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鼠特异性Fas抗体对人鼠嵌合肝中人肝细胞增殖的促进作用
目的: 探讨人胎肝细胞移植联合使用Jo2抗体的策略,促进人胎肝细胞在小鼠肝内存活和增殖.方法:裸鼠经脾移植1×106人胎肝细胞,移植后第1天ip JO2抗体,剂量为0.2mg/kg,1次/wk,持续12 wk为实验组,裸鼠经人胎肝细胞移植后未给予JO2抗体为对照组,建立人鼠嵌合肝动物模型.采用HE染色、原位末端标记方法(TUNEL染色)观察未经人胎肝细胞移植而给予JO2抗体24 h后处死的裸鼠肝脏组织.免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时相点实验组和对照组嵌合肝中肝组织人白蛋白、特异人增殖细胞核抗原(PCNA)和人白蛋白mRNA表达.结果:未经人胎肝细胞移植而给予JO2抗体的裸鼠病理组织切片发现肝组织出血、坏死和细胞凋亡.实验组和对照组裸鼠均能存活至24 wk.移植后嵌合鼠肝组织表达人白蛋白和人PCNA阳性细胞的时间:实验组2-20 wk,对照组2-12 wk; 白蛋白mRNA表达:实验组4-16wk, 对照组4-8 wk:实验组与对照组移植后8、12 wk PCNA表达差异有显著性(25.7%±8.5% vs 13.4%±7.8%, 29.4%±5.0% vs 8.5%±2.3%,均P<0.05).结论:人肝细胞异种移植于裸鼠体内能够存活,经小剂量JO2抗体ip裸鼠,使人鼠嵌合肝中人肝细胞得以增殖,存活时间延长.
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受体胸腺内注射Fas抗体对急性移植排异的作用及机制
目的:探讨胸腺内注射死亡受体(Fas)抗体对心脏移植急性排异、半胱氨酸基天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)表达及心肌细胞凋亡的影响.方法:应用大鼠腹腔心脏移植模型(供体:Wistar大鼠,受体:SD大鼠),随机分为实验组、环孢素组和对照组.心脏移植前24 h,向实验组受体胸腺内注射Fas抗体(0.1 mg/kg)1次,腹腔注射生理盐水2 mL 1次/d;向环孢素组受体胸腺内注射磷酸缓冲液(PBS)(1 mL)1次,腹腔注射环孢素(8 mg/kg)1次,d;向对照组受体胸腺内注射PBS(1 mL)1次,腹腔注射生理盐水(2 mL)1次/d.术后5 d取移植心脏,进行病理学检查,排斥分级;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植心脏Caspase-3 mRNA表达;免疫组化检测Caspase-3蛋白表达;原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞.结果:1.排斥级别:实验组2.13±0.64低于对照组3.75 ±0.46高于环饱素组1.25 ±0.68(P＜0.05);2.Caspase-3 mRNA水平:实验组0.62±0.05低于对照组0.87±0.12,高于环孢素组0.59 ±0.08(P＜0.05);3.Caspase-3蛋白阳性细胞数:实验组113 ±12.5低于对照组223±4.80高于环孢素组95 4±4.50(P＜0.05);4.凋亡指数:实验组7.32 ±0.58低于对照组11.07 ±1.18高于环孢素组5.67 ±0.43(P＜O.05).结论:受体胸腺内注射Fas抗体减轻心脏移植急性排异程度.机理是下调移植心脏Caspase-3基因mRNA及蛋白表达、减少心肌细胞凋亡.
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Fas抗体对气道上皮细胞凋亡的影响
目的 观察Fas抗体、白介素1β(IL-1β)对体外培养的气道上皮细胞凋亡的影响.方法 分离培养兔的气道上皮细胞(AEC),加入IL-1β与不同浓度的Fas抗体共同孵育,以流式细胞术和TUNEL法检测AEC凋亡的变化.结果 以流式细胞术和TUNEL法检测, Fas抗体对AEC凋亡呈剂量、时间-效应依赖性作用;IL-1β对Fas抗体诱导AEC的凋亡没有明显影响.结论 Fas抗体能够有效的诱导正常和炎症状态下原代AEC发生凋亡,可能对抑制气道炎症和气道重塑有积极作用.
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bcl-2硫代反义寡核苷酸提高肺癌细胞对Fas介导细胞毒作用的敏感性
Fas系统介导的细胞凋亡是细胞免疫反应所致细胞毒作用的重要途径.有研究证明,即使小细胞肺癌细胞存在Fas蛋白的表达,而且肿瘤侵袭淋巴细胞中有相应的FasL,也不会诱导癌细胞发生大量凋亡[1].这可能与肺癌细胞中bcl-2基因高表达有关,但目前研究尚少.我们用bcl-2硫代反义寡核苷酸抑制小细胞肺癌细胞系的bcl-2基因表达,观察激活型Fas抗体对其凋亡的诱导作用,以探讨bcl-2反义寡核苷酸用于肺癌治疗的价值.
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Fas／APO-1基因途径治疗胶质瘤的实验研究
目的：研究Fas抗原在SHG-44胶质瘤细胞株中的表达及Fas抗体促进其凋亡的情况，并观察转TNF-α基因对Fas表达的影响。方法：用逆转录病毒载体将TNF-α基因导入SHG-44胶质瘤细胞。在细胞培养液中加入Fas抗体后，检测Fas对转基因前后SHG-44细胞的杀伤性，并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：Fas抗原在SHG-44胶质瘤细胞株内没有明显表达。转TNF-α基因后，SHG-44细胞内的Fas表达并不能显著增加。Fas抗体对转基因前后的SHG-44细胞均不敏感，不能明显诱导细胞凋亡。结论：TNF-α基因的转染对Fas阴性的胶质瘤细咆无明显促进Fas抗体诱导的凋亡作用。
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Fas抗体对小鼠膀胱癌的体内免疫治疗作用
目的: 研究Fas抗体对小鼠膀胱癌的体内免疫治疗作用.方法:采用仓鼠抗小鼠Fas单克隆抗体RK8对小鼠可移植性膀胱移行细胞癌模型BST739进行体内免疫治疗.结果:免疫组织化学方法证明小鼠可移植性膀胱移行细胞癌模型BST739表达Fas;将仓鼠抗小鼠Fas单克隆抗体RK8 25 μg直接注射于1只荷瘤小鼠尾静脉内,导致小鼠在13～15 h内死亡,DNA ladder方法证明小鼠肝脏具有明显的凋亡性特征;对6只荷瘤小鼠肿瘤局部多点分别注入仓鼠抗小鼠Fas单克隆抗体RK8 20 μg后,荷瘤小鼠平均生存时间为12 d,明显长于对照组的6.33 d(P< 0.05).结论:直接局部注射Fas单克隆抗体对表达Fas的小鼠膀胱实体肿瘤具有治疗作用,可明显延长荷瘤小鼠的存活期,且无明显的全身毒副作用.
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胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响
目的 研究受体胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响.方法 应用大鼠同种异位腹腔心脏移植模型,将24只模型动物随机均分为三组,A组移植前后不给处置,B组给环孢素A,按每日8mg/kg的剂量于术前一天开始口服,C组胸腺注射Fas抗体.观察术后移植心脏局部的Fas及FasL的表达情况(免疫组化法和RT-PCR法).结果 与A组相比,C组移植心脏局部的Fas/FasL基因表达(RT-PCR法半定量结果P<0.05)和蛋白表达减少(免疫组化法P<0.05).结论 受体胸腺内注射Fas抗体是一种有效的抑制心脏移植急性排斥反应的方法,引起移植心肌局部Fas/FasL表达下调.
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细胞色素P450 2E1在酒精性肝损伤中的作用及研究进展
Cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) may be a key pathway in generating oxidative stress,nitrosative stress,lipid peroxidation,and causing alcoholic liver injury by various hepatotoxins.It was found that CYP2E1 induction and liver injury occur with co-administration of ethanol and hepatotoxins.CYP2E1 inducers including alcohol and pyrazole could potentiate the hepatotoxicity caused by FAS antibody or LPS,suggesting that overexpression of CYP2E1 might contribute to the synergy and susceptibility of the liver to FAS/LPS-induced liver injury.Thus,CYP2E1 and its polymorphism have important role in liver injury caused by ethanol and are also associated with nonalcoholic steatohepatitis (NASH).Ethanol ingestion and toxin administration drive more CYP2E1 induction contributing to the more severe liver injury.Potential mechanisms involved in the potentiated toxicity include elevated oxidative stress,nitrosative stress,lipid peroxidation,apoptosis,hypoxia,TNF-α production,decreased level of antioxidants and activation of MAP kinase.Clarification of CYP2E1-dependent liver injury and interactions with other hepatotoxins will lead to a better understanding to the pathogenesis of hepatotoxicity and may help to give strategies which protect the liver from alcoholic liver injury.
关键词： 细胞色素P450 CYP2E1 氧化应激 酒精性肝损伤 Fas抗体 脂多糖
