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一个FGG杂合缺失突变导致异常纤维蛋白原血症家系分析
目的 对一个新的FGG基因杂合缺失突变导致异常纤维蛋白原血症家系进行表型和基因突变分析,探讨其分子发病机制.方法 收集2016年4月来温州医科大学附属第一医院就诊的先证者临床资料及其家系成员(共3代5人),采用凝固法检测血浆纤维蛋白原活性(Fg:C)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT);免疫比浊法检测纤维蛋白原抗原(Fg:Ag)、D-二聚体(D-D)和纤维蛋白(原)降解产物(FDPs)含量;抽提先证者及其家系成员外周血的基因组DNA,采用PCR扩增先证者纤维蛋白原的FGA、FGB及FGG基因所有外显子和侧翼序列,以及家系成员相应的突变位点区域,产物纯化后直接测序,同时采用克隆测序及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染色进一步验证;用ClustalX-2.1-win软件分析突变位点基因的保守性,并采用Pymol软件分析突变前后蛋白质空间结构及分子间作用力的改变.结果 先证者Fg:C明显下降,而Fg:Ag含量正常,分别为0.30 g/L和2.00 g/L(参考范围均为2.00~4.00 g/L);母亲及外婆Fg:C和Fg:Ag分别为0.42 g/L、2.09 g/L及0.47 g/L和2.42 g/L.基因分析发现先证者FGG基因8号外显子存在c.944_c.952 delCCTTTGATG杂合缺失突变,导致氨基酸289_291delAla,Phe,Asp,其母亲和外婆同样携带此突变,父亲和外公为正常野生型.同源性分析表明Ala289,Phe290,Asp291残基在同源物种间高度保守;蛋白模型分析发现在野生型FGG蛋白质中,Ala289分别与Gly287、Gly292及Thr371形成3个氢键,Phe290分别与Tyr262、Tyr278、His307及Asn308形成4个氢键,Asp291分别与Asp288及Lys302形成2个氢键,当Ala289、Phe290和Asp291发生缺失突变后,原有的氢键连接全部消失.结论 本研究发现了纤维蛋白原γ链289_291delAla,Phe,Asp杂合缺失突变会引起Fg分子空间结构重排,降低了结构稳定性,其与该家系引起异常纤维蛋白原血症有关.(中华检验医学杂志,2018, 41:305-311)
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遗传性低纤维蛋白原血症家系复合杂合基因缺陷的研究
目的 对1个遗传性低纤维蛋白原血症家系进行临床表型诊断和基因分析,并探讨该病的分子发病机制.方法 采集该家系3代共7人外周血,检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、蕲蛇酶时间(RT)、抗凝血酶活性(AT∶A)、蛋白C活性(PC∶A)和蛋白S活性(PS∶A),纤维蛋白原(Fg)抗原和活性分别用免疫比浊法和Clauss法测定；采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对先证者及其父母的血浆纤维蛋白原进行半定量检测及肽链相对分子质量分析；使用自动校正凝血酶生成仪测定先证者的凝血酶生成；应用血栓弹力图仪检测血液凝固的动态过程和纤维蛋白形成过程的动力学变化.抽提先证者及家系成员外周血基因组DNA,采用PCR扩增Fg的3个基因(FGA、FGB和FGG)所有外显子及其侧翼序列,DNA直接测序进行基因分析.结果 先证者凝血功能检查显示Fg抗原为0.68 g/L,活性为0.48 g/L; TT延长为29.2 s,RT延长为75.8 s.SDS-PAGE结果显示,3条肽链相对分子质量正常,但含量明显减低；先证者凝血酶生成峰值为249.93 nmol/L,凝血酶生成潜力为1007.0 nmol·L-1·min;全血凝固的动态过程异常,凝血综合指数(CI)为-8.6,显示全血低凝状态.表型诊断为遗传性低纤维蛋白原血症.基因分析发现先证者纤维蛋白原Aa链存在g.3175A＞C突变导致的Gln143Pro突变,以及g·4642delC 突变导致的438位苏氨酸后编码26个异常氨基酸提前出现终止密码子；前者来源于母亲,后者来源于父亲.结论纤维蛋白原Aa链Gln143Pro和g.4642delC复合杂合突变是导致该家系先证者低纤维蛋白原血症的原因.
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注射用白眉蛇毒血凝酶致低纤维蛋白原血症2例
2例患者（例1女，78岁；例2男，39岁）分别因左下腹包块出血和外伤致休克而静脉滴注注射用白眉蛇毒血凝酶（4 KU/ d），分别于用药8和4 d 后出现纤维蛋白原水平降低（例1，1.49 g/ L降至0.71 g/ L；例2，2.01 g/ L 降至0.52 g/ L），伴明显活动性出血。考虑低纤维蛋白原血症为注射用白眉蛇毒血凝酶所致。均停药并输注血浆冷沉淀，治疗5 d 后，例1纤维蛋白原升至2.01 g/ L，腹部超声结果提示左下腹未见活动性出血；例2纤维蛋白原升至3.44 g/ L，胸腔引流管液体为淡红色。
关键词： 纤维蛋白原缺乏血症 注射用白眉蛇毒凝血酶 -
丙戊酸钠致血小板减少及低纤维蛋白原血症
1例58岁男性患者因癫痫发作持续静脉泵入丙戊酸钠33.6 mg/ h，连续用药3 d。7 d后患者行左颞叶病灶切除术，手术次日 PLT 从入院时的242×109/ L 降至100×109/ L，未予以处理，继续按原剂量静脉泵入丙戊酸钠4 d 后 PLT 降至72×109/ L，凝血酶原时间（PT）由入院时的13.4 s 延长至20.7 s，纤维蛋白原（FIB）由2.08 g/ L 降至0.99 g/ L。考虑为丙戊酸钠所致血小板减少及低纤维蛋白原血症，遂停用丙戊酸钠并给予冷沉淀6.0 U。停用丙戊酸钠1周后复查，PLT 294×109/ L， PT 13.2 s，FIB 2.57 g/ L。
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纤维蛋白原FGB基因插入突变所致遗传性无纤维蛋白原血症的发病机制
目的 探讨一个遗传性无纤维蛋白原血症家系的分子发病机制.方法 应用Clauss法测定血浆纤维蛋白原活性,应用免疫比浊法测定纤维蛋白原抗原.提取先证者及其家系成员外周血DNA,PCR扩增纤维蛋白原FGA、FGB和FGG基因所有外显子和侧翼序列,构建纤维蛋白原野生型和突变型表达载体.在先证者血浆中加入凝血酶进行纤维蛋白聚集曲线测定；应用Western blot分析血浆纤维蛋白原,用野生型或FGB突变型质粒转染COS-7细胞,用Western blot和ELISA法检测转染后的细胞裂解液及细胞培养上清中纤维蛋白原的表达.结果 先证者APTT、PT、凝血酶时间明显延长；血浆纤维蛋白原活性及纤维蛋白原抗原检测结果均为0；先证者FGB基因2号外显子核苷酸2833～2834之间插入GTTT(纯合突变),先证者父亲、母亲、胞弟和儿子为杂合突变；凝血酶诱导的血浆纤维蛋白聚集曲线显示患者血浆无纤维蛋白聚集；Western blot分析显示,非还原条件下先证者血浆缺乏完整的纤维蛋白原分子和纤维蛋白原半分子,在还原条件下未检出截短的Bβ链.在转染突变型质粒的COS-7细胞裂解液中检出异常纤维蛋白原分子(相对分子质量＞340 000),细胞培养上清中未检出异常纤维蛋白原.野生型和突变型质粒转染的COS-7细胞裂解液中纤维蛋白原含量差异无统计学意义[(2.47±0.30)μg/ml对(2.65±0.60)μg/ml,P=0.0889];转染突变型质粒的COS-7细胞培养上清中纤维蛋白原含量低于转染野生型质粒的COS-7细胞,差异有统计学意义[(0.01±0.01)tg/ml对(3.80±0.80)μg/ml,P=0.0001].结论 纤维蛋白原FGB基因插入突变是该家系遗传性无纤维蛋白原血症的分子发病机制；该突变导致纤维蛋白原分子合成异常、组装及分泌障碍.
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长期使用蛇毒血凝酶致低纤维蛋白原血症三例报告并文献复习
目的 首次报告3例长期应用蛇毒血凝酶致低纤维蛋白原血症患者.方法 对3例长期应用蛇毒血凝酶致低纤维蛋白原血症患者的临床资料进行分析并复习相关文献.结果 例1,女,2岁,闭合性肝脏损伤,予大量输血及输注纤维蛋白原、基因重组凝血因子Ⅶa、蛇毒血凝酶(2 U/d)等治疗,患儿肝脏创面出血很快停止,伤后18d血浆纤维蛋白原0.12 g/L;例2,男,3岁,闭合性肝脏损伤,行肝脏创口修补术,术后给予蛇毒血凝酶2 U/d,术后8d腹腔引流管和静脉穿刺处大量渗血,血浆纤维蛋白原0.24 g/L;例3,男,45岁,因下颌恶性肿瘤行全下颌切除术,术后给予蛇毒血凝酶4U/d,术后12d手术切口出现持续渗血,血浆纤维蛋白原0.25 g/L.在停用蛇毒血凝酶并补充纤维蛋白原后,3例患者血浆纤维蛋白原与凝血检查恢复正常,例2、例3出血停止.结论 蛇毒血凝酶长期应用可导致低纤维蛋白原血症与严重出血.
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垂体后叶素致低钾血症和低纤维蛋白原血症三例报告
大咯血是呼吸内科常见的危重症之一,目前死亡率高,治疗手段有限.垂体后叶素是临床上治疗咯血常用的药物之一,虽然其不良反应较多,但止血效果好且至今仍无替代药物.笔者近期在应用垂体后叶素治疗咯血患者时,发现3例较为罕见的低钾血症与低纤维蛋白原血症病例,现报告如下.
