首页 > 文献资料
-
三醋酸纤维素膜与聚砜膜低通量透析器对细菌DNA片段的通透性研究
目的 通过体外实验观察三醋酸纤维素膜和聚砜膜低通量透析器对细菌DNA片段的通透性,比较2种透析器对细菌DNA片段的截留能力. 方法 以透析器类型分为三醋酸纤维素膜/低通量(130G)和聚砜膜/低通量(F6hps)两组.体外模拟血液透析4小时,血液侧为无菌生理盐水500ml,流速200ml/min.透析液侧为无菌生理盐水1000ml.以大肠埃希氏菌分别为2.06×102,1.603×103,2.671×103,1.336×104cells/ml浓度的混悬液作为污染透析液,透析液流速200ml/min.采用鲎试剂动态比浊法检测透析液和血液侧样本内的内毒素浓度,以超微量分光光度计检测血液侧样本的细菌DNA浓度,并对两组透析器血液侧的细菌DNA浓度进行比较.结果 ①透析4h后,两组透析器的血液侧透后样本的内毒素检测均为阴性.但细菌DNA浓度升高,并随透析液中污染菌浓度增加呈现上升趋势.②在透析液细菌浓度在1.603×1 0 3,2.671×10 3,1.336×104cells/ml浓度时,130G组血液侧样本的细菌DNA浓度明显高于F6hps组,两组间比较,t值分别为7.982,4.264,10.499,P值分别为0.001,0.013,＜0.001,差异显著性有统计学意义. 结论 ①细菌DNA比内毒素对三醋酸纤维膜和聚砜膜透析器的穿透能力更强.②与聚砜膜透析器相比,三醋酸纤维素膜对细菌DNA有更高的通透性.
-
全血中细菌DNA检测方法的建立及初步应用
目的:采用PCR方法定性检测血中细菌DNA,快速诊断菌血症的存在.方法:提取全血DNA(包括细菌DNA),用PCR方法定性检测血中细菌16sRNA和大肠杆菌β-半乳糖苷酶DNA.结果:PCR方法可以检测出血中细菌DNA,PCR产物随着细菌DNA模板量的增加而增多;采用溶血处理全血可以增加细菌DNA检出的灵敏度,全血可冷冻保存;在肝缺血-再灌流大鼠和免疫抑制大鼠血中检出不等量的细菌DNA;部分脓毒症/发热病人血中可检测到细菌DNA的存在.结论:PCR方法检测全血细菌DNA具有简便、快速、灵敏和经济的优点,可用于实验研究及临床菌血症的诊断.
-
多重PCR检测肠源性脓毒症常见病原菌的方法构建及初步临床应用
目的 构建多重PCR反应体系检测肠源性脓毒症常见病原菌的快速可靠的方法,并初步探索其临床价值. 方法 选择2013年6月-2015年7月医院42例肠源性脓毒症患者,随机分为多重PCR组及对照组,各21例;根据10种肠源性脓毒症常见病原菌(以下简称目标细菌)的16sRNA特异性片段设计互补序列的引物和探针;优化多重PCR反应体系并进行特异性实验及浓度梯度敏感性实验. 结果 多重PCR体系检测10种目标细菌的标准菌株均呈现阳性结果;浓度梯度敏感性实验提示本项目设计的多重PCR反应体系可检测的小细菌浓度为1×103 CFU/ml,适宜检测浓度范围1×103~1×106 CFU/ml;多重PCR组检出率显著高于对照组,多重PCR组患者SIRS持续时间、抗菌药物费用与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 本项目建立的多重PCR反应体系具备高通量、精准检测脓毒症患者感染的常见病原菌的能力;初步的临床研究提示该方法在指导肠源性脓毒症患者的抗微生物治疗中有一定的应用价值.
-
细菌感染刺激在狼疮性肾炎进展中的作用研究
目的 探讨细菌感染刺激在狼疮性肾炎(LN)进展中的作用.方法 选取2012年12月～2014年12月青岛大学附属医院黄岛院区肾病科没有细菌感染的LN患者19例,根据疾病活动程度分为LN发作期组10例,LN缓解期组9例.另选择青岛大学附属医院查体中心的健康人10例作为健康对照组.提取并培养各组外周血单个核细胞并用CpG-ODN刺激,用ELISA检测血清及细胞上清液中的干扰素-α(IFN-α)水平.结果 ①LN发作期患者血清IFN-α的水平[(1072.87±530.99)n/ml]明显高于LN缓解期患者[(348.60±190.63)n/ml,P＜O.01]以及健康对照组[(293.31±214.40)ng/ml,P＜0.01].②在CpG-ODN的刺激下LN缓解期患者外周血单个核细胞上清液IFN-α水平[(2616.36-2393.76) ng/ml]明显高于LN发作期患者[(1109.37±396.66)ng/ml,P=0.024]以及健康对照组[(1121.98±370.46)ng/ml,P=0.025].结论 细菌感染是LN疾病加重的诱发因素.
-
纳米银抗菌作用机制：剂量依赖性促进细菌凋亡
背景：纳米银具有高效、广谱抗菌性及不易产生耐药性等优点，已成为目前抗菌材料的研究热点，但目前尚不明确其抗菌的确切机制。
目的：研究纳米银抵抗细菌生长的机制。
方法：采用抑菌环实验检测Ti、TiO2及载纳米银TiO2对单克隆大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用；将大肠杆菌接种于LB液体培养基中，分别加入0，5，10 mg/L的纳米银溶液，检测24 h内的菌液A值，进行琼脂糖凝胶电泳，分析细菌DNA的变化，应用Annexin V和PI双染色，采用流式细胞术检测细菌凋亡。
结果与结论：Ti 和 TiO2对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌无明显抑制现象，在 TiO2管载纳米银材料片周围出现了明显抑菌环。加入纳米银溶液后，大肠杆菌菌液A值明显降低，并且随着加入纳米银质量浓度的增加，降低趋势更明显。加入纳米银溶液后，大肠杆菌的DNA含量明显减少，并且减少程度随加入纳米银溶液质量浓度的增加而增加。加入纳米银后，细菌Annexin V阳性率增加，并且这种增加趋势与加入纳米银的质量浓度呈正比。表明纳米银可通过促进细菌凋亡这一机制来影响细菌生长。 -
细菌DNA可显著增强豚鼠接种猪链球菌溶血素的免疫效果
目的:研究大肠杆菌DNA的免疫增强效果.方法:用提取的大肠杆菌DNA、合成CpG-ODN、弗氏佐剂、蜂胶等不同佐剂分别与猪链球菌溶血素配合,免疫10日龄豚鼠,用溶血抑制实验、MTT法和细胞流式技术分别检测豚鼠体液免疫和细胞免疫状态.结果:经组间单因素相关性分析,大肠杆菌DNA、合成CpG-ODN和弗氏佐剂均能明显地增强豚鼠特异的体液免疫与细胞免疫,其中,所用大肠杆菌DNA的刺激溶血抑制抗体的活性与合成CpG-ODN相当(P＞0.05),脾淋巴细胞刺激活性与弗氏佐剂相当(P＞0.05).结论:所提取的大肠杆菌DNA具有强烈的免疫刺激作用,可望成为一种新型免疫佐剂.
-
卡介苗DNA抗肿瘤免疫的实验研究
目的 探讨卡介苗DNA抗肿瘤免疫的效果及其免疫机制.方法 纯化提取卡介苗菌DNA,建立荷瘤裸鼠模型,将24只荷瘤裸鼠随机分为3组,每组8只.于接种A549细胞株后第15d,分别腹腔注射TES液、BCG液、DNA液各0.3 ml,隔2 d 1次,共8次.结果 DNA、BCG可抑制肿瘤生长,DNA增强NK/Mψ杀伤活性,提高荷瘤裸鼠血清IFN-γ和TNF-α水平.结论 DNA与卡介苗都具有抗肿瘤免疫效果,DNA比卡介苗抗肿瘤效果更强.
-
细菌基因分型技术方法及其评价
细菌的爆发流行是当前医院感染中的常见问题,及时地判定感染的爆发、确定感染源是控制流行和交叉感染的必要手段,现代分子生物学的理论和技术为细菌分型方法提供了可靠的保证.近来各种细菌DNA分型技术已广泛应用于临床中,本文将主要的分子生物学分型技术方法进行了简介并对其应用作一评述.
-
肝硬化患者腹水中细菌DNA与相关因素的关系
目的 探讨肝硬化患者腹水中细菌DNA与血浆内毒素、肠通透性、肠道菌群等因素的关系. 方法 选取失代偿期肝硬化伴腹水患者55例,于入院当日或次日抽取腹水行腹水中细菌DNA的提取及PCR扩增,同时行腹水常规、需氧菌及厌氧菌培养检查,于入院次日测定血浆内毒素、肠通透性并进行肠道菌群分析,同时测定血常规、肝肾功能、凝血功能等生物化学指标.30例健康成年人作为正常对照,行除腹水之外的上述检查. 结果 55例肝硬化患者腹水细菌培养均为阴性,其中19例(34.55%)患者腹水中检测到细菌DNA.与细菌DNA阴性组比较,细菌DNA阳性组患者的凝血酶原活动度明显降低(t=-3.184,P=0.002),而肝功能Child-Pugh评分(t=3.224,P=0.002)和腹水白细胞计数(t'=4.088,P=0.001)明显升高.与正常对照组比较,肝硬化患者血浆内毒素水平(t=13.705,P=0.000)、尿中乳果糖/甘露醇(L/M,t'=28.568,P=0.000)和肠道肠杆菌数量(t=2.912,P=0.005)明显升高,而肠道双歧杆菌数量明显减少(t=-3.669,P=0.000).与腹水中细菌DNA相关的指标为肠道肠杆菌数量(P=0.007)和凝血酶原活动度(P=0.011).结论 肝硬化患者发生腹水细菌移位的关键因素是肠腔细菌过度生长,并与肝病的严重程度相关.
-
CpG基元在细菌DNA诱导小白鼠THP-1释放细胞因子中的作用
目的探讨CpG基元在细菌DNA诱导的细胞因子释放中的作用.方法实验前1 h经腹腔注射600 mg/kg D-氨基半乳糖(D-Galactoamine , D-GalN)敏化小鼠,采用纯化的大肠杆菌DNA(Escherichia coli DNA,EC DNA)、小牛胸腺DNA(Calf thymus DNA,CT DNA)、含有CpG基元的硫代寡核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotides,CpG ODN )和C与G序列颠倒的硫代寡核苷酸(Non-CpG ODN )静脉给予小鼠,DNA的注射剂量为30 mg/kg,ODN的剂量为10 nmol/只,观察EC DNA、DNA、CpG ODN与CT DNA、NON-CpG ODN导致小鼠死亡情况的差异.体外培养THP-1细胞系,在THP-1细胞培养体系中加入上述制剂后,测定细胞因子TNF-α、IL-6、 IL-1β的释放情况,观察上述制剂诱导细胞因子释放能力的不同.结果 EC DNA、CpG ODN 可诱导小鼠的死亡以及细胞因子的大量释放,而CT DNA、NON-CpG ODN则无此能力.结论含有CpG基元的寡核苷酸具有诱导巨噬细胞大量释放细胞因子的作用,CpG基元在细菌DNA诱导的细胞因子释放中具有重要的作用,可能是细菌DNA作用的结构基础.
-
快速提取细菌DNA方法的研究
目的:研究快速、有效可以应用于压电基因传感器对病原微生物的快速检测的DNA的提取方法.方法:采用沸水浴法,酚、氯仿法,chelex100法和试剂盒法提取金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC 27853和大肠杆菌ATCC 25922的DNA对产物进行纯度和产量测定,并对16SrDNA区域利用通用引物进行扩增.初步应用自行研制的压电基因传感器检测金黄色葡萄球菌ATCC25923的PCR产物.结果:除沸水浴法,其他3种方法均能抽提出3种细菌的DNA与100法和酚、氯仿法抽提产物的纯度和产量差异无显著性(P＞0.05),但chelex100法操作更为简单、成本低;试剂盒法抽提出的产物纯度和产量明显高于酚、氯仿法、chelex100法P＜0.05),但成本高,操作繁琐.结论:chelex100法操作简便、省时、成本低,适宜用于压电传感器样本的预处理.
关键词： 细菌DNA chelex100法 压电基因传感器 -
3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较
目的 寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法.方法 分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增.结果 (1)商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性日的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段; (2)碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段.结论 碱液加热裂解法是3种方法中简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取.
-
细菌脂多糖、脂蛋白和DNA体内协同致病作用观察
目的观察细菌脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS)、脂蛋白(bacterial lipoprotein, BLP)及其DNA[鸟嘌呤二核苷酸(CpG)寡核苷酸(oligonucleoetide), CpG-ODN]的体内协同致病作用. 方法 147只小鼠随机分为等渗盐水对照组、单纯LPS组、单纯CpG-ODN组、单纯BLP组、LPS+BLP组、LPS+ CpG-ODN组和LPS+BLP+CpG-ODN组,尾静脉注射给药,观察小鼠死亡率及血清肿瘤坏死因子(TNF)-α水平. 结果注射后12,24,48 h,二联组的死亡率显著高于单独给药组(P <0.05或P< 0.01);三联给药组各时相点死亡率显著高于二联组(P<0.05).单独给药后6 h,TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.05),12,24 h与对照组比较,差异无统计学意义.二联组与单因素组和对照组比较,6,12 h血TNF-α均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).三者联合刺激时,6,12 h血TNF-α与二联组比较,差异有统计学意义(P<0.05),至24 h仍显著高于对照组(P<0.05). 结论细菌LPS、细菌脂蛋白和细菌DNA不仅自身存在一定的致病能力,而且三者间具有明显的协同效应,特别是三者联合给药时作用强.
