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猪链球菌溶血素（SLY）引起血小板聚集活性分析
目的：研究重组表达的2型猪链球菌溶血素（ SLY）与血小板的相互作用，为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白，光密度法检测其溶血活性，再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用，并研究抗血小板药物阿司匹林对SLY引起的血小板聚集的影响，通过比较野生株05ZYH33和sly基因突变株Δsly对小鼠体内血小板体积和数量的影响，推测SLY蛋白对体内血小板的影响。结果与结论重组SLY蛋白溶血活性为2000 HU，1μg／ml SLY蛋白可引起血小板高度聚集，5 mmol／L阿司匹林可显著抑制聚集，SLY蛋白可引起小鼠体内单个血小板体积增大和血小板数量减少。
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细菌DNA可显著增强豚鼠接种猪链球菌溶血素的免疫效果
目的:研究大肠杆菌DNA的免疫增强效果.方法:用提取的大肠杆菌DNA、合成CpG-ODN、弗氏佐剂、蜂胶等不同佐剂分别与猪链球菌溶血素配合,免疫10日龄豚鼠,用溶血抑制实验、MTT法和细胞流式技术分别检测豚鼠体液免疫和细胞免疫状态.结果:经组间单因素相关性分析,大肠杆菌DNA、合成CpG-ODN和弗氏佐剂均能明显地增强豚鼠特异的体液免疫与细胞免疫,其中,所用大肠杆菌DNA的刺激溶血抑制抗体的活性与合成CpG-ODN相当(P＞0.05),脾淋巴细胞刺激活性与弗氏佐剂相当(P＞0.05).结论:所提取的大肠杆菌DNA具有强烈的免疫刺激作用,可望成为一种新型免疫佐剂.
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猪链球菌2型溶血素的纯化及生物学活性研究
目的:摸索天然和重组猪链球菌2型溶血素的纯化工艺,评价制备蛋白的生物学活性.方法:天然猪溶血素的纯化采用硫酸铵沉淀,阴离子交换层析和疏水层析制备,重组猪溶血素采用镍柱亲和层析进行柱上变复性后,用Thiolpmyl-sepharose 6B进一步亲和纯化.通过溶血实验,细胞毒性测定实验评价纯化蛋白的活性.结果:制备的天然和重组猪溶血素纯度均在90%以上,具有较高的溶血活性,较高浓度时能损伤靶细胞,胆固醇能够完全封闭其活性.结论:制备获得的重组猪溶素与天然蛋白具有相近的生物学活性,为进一步研究猪链球菌2型溶血素在猪链球菌致病机制方面的作用奠定了基础.
