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应用上转换发光技术快速检测抗2型猪链球菌抗体
目前,国内针对猪链球菌2型(S.suis 2)抗体的检测方法仅限于用ELISA进行实验室分析,而且各种免疫学检测方法均有一定的非特异性反应.因此,建立适用于现场的S.suis 2抗体快速检测方法,对于流行区疫情监测预警、早期控制以及临床诊断均有重要的应用价值.
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2型猪链球菌Sao-M蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用
目的 制备并鉴定2型猪链球菌重组Sao-M蛋白的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),为建立免疫学快速检测方法及Sao蛋白的功能研究奠定基础. 方法 用重组Sao-M蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术建立稳定分泌抗Sao-M蛋白的杂交瘤细胞株,制备抗Sao单克隆抗体,采用IgG亚类鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的IgG亚型,采用间接ELISA法测定抗体效价.将05ZYH33与单抗共孵育,检测单克隆抗体与细菌表面具有天然构象Sao蛋白的结合能力. 结果 筛选到4株能持久、稳定分泌抗Sao蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(分别命名为1G5、1B10、2A10、3A6),均为IgG1型,ELISA测定腹水抗体效价＞1∶102 400;4株单克隆抗体均能与05ZYH33表面天然构象的Sao蛋白结合,对细菌形态产生显著影响. 结论 成功制备高效价的抗Sao-M单克隆抗体,为建立快速检测猪链球菌感染的免疫学方法及Sao蛋白的功能研究奠定了基础.
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2型猪链球菌AdcR蛋白的原核表达
目的 表达2型猪链球菌(Streptococcus suis2)调控因子AdcR蛋白,为研究其在2型猪链球菌中调控组氨酸三聚体家族蛋白的作用机制奠定基础. 方法 通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在2型猪链球菌05ZYH33全基因组序列中找出编码AdcR的基因.以AdcR基因序列为基础,利用Primer5.0设计引物,采用PCR扩增AdcR基因,经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后将目的片段通过T4 DNA连接酶连接至表达载体pET32a,转化大肠埃希菌E.coli BL21,加入IPTG至终浓度为0.1 mmol/L,37℃诱导4h表达AdcR蛋白,然后利用His亲和层析柱纯化AdcR蛋白. 结果 通过Blast分析,从2型猪链球菌05ZYH33全基因组序列中找到编码AdcR的编码基因05SSU0109.以合成的特异引物PCR扩增出469 bp的AdcR片段,连接原核表达载体pET32a后转化E.coli,经IPTG 37℃诱导4h,成功表达出Ad-cR蛋白,其分子质量单位为40 ku,与理论值相符.经His-Tag亲和层析纯化,获得较高纯度的重组AdcR蛋白. 结论 在大肠埃希菌中成功表达了可溶性的AdcR重组蛋白,为AdcR在2型猪链球菌中调控组氨酸三聚体家族蛋白作用机制研究奠定了基础.
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2型猪链球菌天冬氨酸激酶的原核表达及抗原性检测
目的 原核表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)并检测其免疫原性.方法 对S.suis 2中国强毒株05ZYH33的AK编码基因05SSU1811进行生物信息学分析并设计引物,通过PCR从05ZYH33基因组中扩增目的片段.将目的基因克隆人原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3)后采用IPTG诱导表达日的蛋白,用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.用纯化的重组AK免疫BALB/c小鼠4次,采血,分离血清,采用间接ELISA检测抗体效价,并进行Western blot分析. 结果 构建的重组质粒在宿主菌中高效表达目的蛋白,His亲和层析柱纯化的重组蛋白,能与感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应.ELISA检测重组AK免疫鼠血清抗体效价为1∶102 400,Western blot显示该抗血清能与重组蛋白反应. 结论 成功制备重组AK蛋白,该蛋白具有抗原性,为进一步研究AK在S.suis2致病过程中的作用奠定了基础.
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2型猪链球菌表面蛋白Sao的生物信息学分析及基因工程疫苗的设计
目的 利用生物信息学方法分析Sao蛋白结构并预测B细胞抗原表位,筛选可用于疫苗设计的序列. 方法 以Sao蛋白的氨基酸序列为基础,利用Protparam 工具分析蛋白基本理化性质,TMHMM预测跨膜区,PredictProtein在线分析蛋白二级结构,SWISS-MODEL软件模拟三级空间构象,DNASTAR分析亲(疏)水性、可塑性和表面可及性,综合使用在线ABCPred和BepiPred工具预测B细胞抗原表位,筛选能用于构建基因工程疫苗的蛋白序列. 结果 Sao蛋白羧基端存在7个高度一致的重复序列以及1个LPVTG保守膜锚定基序,二级结构组分中无规卷曲比例高达74.21％,三级空间构象模拟结果与二级结构预测一致.蛋白的亲水区域、可塑性区域、表面可及性区域比例分别为76.21％、64.06％和75.04％.Sao存在多个线性抗原表位,经筛选得到两个可用于疫苗设计的蛋白序列,BLAST显示这两个序列为猪链球菌所特有,存在于2型猪链球菌9种不同的分离菌株中,同时也存在于猪链球菌致病性血清型1、2、1/2、3、7、9、14型中. 结论 Sao蛋白为不稳定蛋白,亲水性强,筛选得到的两个蛋白序列抗原性强且高度保守,为猪链球菌特有序列,能够用于基因工程疫苗的构建.
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2型猪链球菌SrtA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
目的 制备并鉴定2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis2)强毒株05ZYH33分选酶A(Sortase A,SrtA)的单克隆抗体. 方法 PCR扩增2型猪链球菌05ZYH33菌株基因组SrtA全长,构建表达质粒pETDuet-1/SrtA,导入E.coli BL21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达SrtA蛋白,柱纯化后免疫BALB/c雌鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,收集培养上清并制备小鼠腹水,采用Western blot单克隆抗体特异性,ELISA检测单抗效价. 结果 筛选到1株能持久、稳定分泌抗SrtA蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,标记为1F5,抗体亚型为IgM型/κ链;Western blot显示该抗体能识别SrtA蛋白. 结论 成功制备分泌抗SrtA蛋白的杂交瘤细胞株,制备的单抗效价高,为研究2型猪链球菌感染致病过程中SrtA的作用奠定了基础.
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2型猪链球菌细胞分裂蛋白DivIVA的原核表达及纯化
目的 利用原核表达系统制备2型猪链球菌细胞分裂起始因子DivIVA重组蛋白并进行纯化,为研究其在调控细胞分裂中的作用奠定基础. 方法 以2型猪链球菌05ZYH33全基因组为模板,PCR扩增divIVA基因片段,经BamH Ⅰ和Xhol Ⅰ双酶切后将目的片段连接至表达载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a-divIVA,经测序鉴定后将重组质粒转化进入表达菌E.coli BL21,以终浓度为0.1 mmol/L的IPTG于37℃培养4h,诱导DivIVA蛋白表达.用Ni离子亲和层析柱分离纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行检测和验证. 结果 成功构建重组表达质粒pET28a-divIVA,并在E.coli BL21中表达主要以包涵体形式存在的DivIVA蛋白.包涵体蛋白经8 mol/L脲变性溶解后经Ni离子亲和层析柱纯化,获得的目的蛋白经SDS-PAGE检测分子质量为36 ku,与预期大小相符;经Western blot检测,该蛋白能被相应抗体特异性识别. 结论 在E.coli BL21中成功表达并纯化了DivIVA蛋白,为研究该蛋白在2型猪链球菌的细胞分裂机制奠定了基础.
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2型猪链球菌人源致病株07NJH06的分离和病原生物学鉴定
目的 系统分析鉴定南京地区脑膜炎型猪链球菌感染病人脑脊液分离株07NJH06病原生物学特性.方法 采集患者脑脊液,进行细菌分离和培养,观察菌体显微形态,通过免疫凝集试验和PCR方法对分离物进行种属鉴定及毒力因子基因携带情况分析,纸片法测定菌株药物敏感性,采用小白鼠和仔猪模型评估分离菌株的致病特性.结果 从病人脑脊液分离到1株革兰阳性链球菌,经免疫学、生物化学及分子生物学方法系统鉴定为2型猪链球菌(命名为07NJH06),毒力基因型为cps2J+mrp+epf+sly+gdh+fbp+srtA+,未获得含有完整毒力岛PAI89k的证据,该岛两侧边缘反向重复区靶基因以及岛内二元调控系统SalK/SalR均未检出,但针对岛内3个独立的镶嵌结构区代表基因进行扩增,其中2个结构区代表基因(05SSU0942和05SSU0965)得到特异性扩增;药敏试验显示,07NJH06株对青霉素、万古霉素等抗生素敏感,对四环素、头孢噻肟钠等抗生素耐药;动物感染试验显示,07NJH06株对小鼠和猪仔有致病性,毒力较国内暴发流行强致病株05ZYH33弱,与国际参考株毒力相当.结论 07NJH06株为致病性2型猪链球菌,基本生物学特性、主要毒力基因型与既往国内暴发现场分离株相似,但不含有完整的毒力岛PAI89k基因结构,系统掌握该菌遗传信息对于阐明国内强毒株遗传进化规律有重要价值.
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猪链球菌溶血素（SLY）引起血小板聚集活性分析
目的：研究重组表达的2型猪链球菌溶血素（ SLY）与血小板的相互作用，为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白，光密度法检测其溶血活性，再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用，并研究抗血小板药物阿司匹林对SLY引起的血小板聚集的影响，通过比较野生株05ZYH33和sly基因突变株Δsly对小鼠体内血小板体积和数量的影响，推测SLY蛋白对体内血小板的影响。结果与结论重组SLY蛋白溶血活性为2000 HU，1μg／ml SLY蛋白可引起血小板高度聚集，5 mmol／L阿司匹林可显著抑制聚集，SLY蛋白可引起小鼠体内单个血小板体积增大和血小板数量减少。
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2型猪链球菌锌转运蛋白A对小鼠免疫保护作用
目的 研究猪链球菌(Streptococcus suis,S suis)锌转运蛋白A(ZnuA)对小鼠接种致死量2型猪链球菌(S.suis2)菌株的免疫保护作用,为进一步研究S.suis2亚单位疫苗奠定实验基础.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测znuA基因在不同血清型S.suis中的分布情况；蛋白免疫印迹(western blot)检测ZnuA在S.suis2的表达,利用流式细胞术对ZnuA进行细胞定位,动物实验研究ZnuA蛋白的免疫保护作用.结果 除血清型17、21和30型菌株及荷兰分离株T15菌株外,其他30个血清型S.suis菌株、7996菌株以及3株S.suis2型国内分离菌株基因组中均扩增到目的条带；S.suis2菌体蛋白与兔抗ZnuA蛋白的血清能发生特异性反应；兔抗ZnuA血清标记S.suis2的荧光强度明显较高；ZnuA重组蛋白免疫组小鼠死亡率较低.结论 ZnuA是一种具有免疫保护作用的蛋白,可作为S.suis的亚单位疫苗候选分子.
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2型猪链球菌菌毛蛋白编码基因SSU0474生物学特性分析
目的 构建2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33菌毛蛋白编码基因SSU0474缺失突变株,并对其生物学特性进行分析.方法 利用同源重组原理构建SSU0474缺失突变株,PCR及RT-PCR对筛选的突变株进行验证,革兰染色和电镜比较突变株SSU0474与野毒株之间的差异,小鼠实验进一步比较突变株的毒力变化.结果 引物特异性PCR证实SSU0474基因缺失突变株构建成功；革兰染色结果显示突变株和野毒株染色特性差异无统计学意义,SSU0474基因的缺失未明显影响细菌的生长速率；电镜结果表明突变株SSU0474细胞壁明显变薄,细菌菌毛样附属结构缺失；小鼠毒力实验结果提示突变株SSU0474的毒力明显下降.结论 本研究成功获得菌毛蛋白编码基因SSU0474缺失突变株,并对该基因的生物学特性进行了初步探讨,为系统研究2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33菌毛的生物学功能提供依据.
关键词： 2型猪链球菌 菌毛蛋白 SSU0474基因敲除 生物学特性 -
Sao蛋白多克隆抗体制备鉴定及促全血杀菌作用
目的 制备2型猪链球菌(S.suis2)表面抗原一(Sao)重组蛋白的多克隆抗体,鉴定其免疫学特性.方法 通过PCR从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中扩增基因Sao,构建重组表达质粒pET28a-Sao,转化E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷诱导表达目的蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达产物,His亲和层析柱纯化重组蛋白,利用纯化后Sao蛋白制备多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,评价Sao多克隆抗体的促全血杀菌作用.结果 构建的重组质粒可以在宿主菌中高效表达,纯化后获得的重组蛋白纯度可达90％;间接酶联免疫吸附试验测定Sao多克隆抗体效价为1∶102400; Western blot结果显示,Sao多克隆抗体有较好的特异性;全血杀菌实验显示,05ZYH33在含有Sao多抗血清的全血中相对存活率下降85％.结论 本研究制备的2型猪链球菌重组Sao蛋白多克隆抗体效价高,特异性好,可明显增强全血对细菌的杀伤作用.
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2型猪链球菌stk/stp1基因敲除株的构建及特性研究
目的 丝/苏氨酸激酶(STK)与丝/苏氨酸磷酸酶(STP)通过对蛋白质的可逆磷酸化调控原核生物的各项生理活动.文中旨在研究2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33中、stk/stp1同时缺失对其生物学特性及致病性的影响.方法 运用同源重组的方法构建2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33的stk/stp1基因敲除突变株 Δstk/stp1,比较分析野毒株05ZYH33与突变株 Δstk/stp1的生物学特性;通过细胞黏附实验、抗吞噬实验以及小鼠感染模型分析stk/stp1缺失对细菌毒力的影响.将30只SPF级BALB/c小鼠,用随机数字表法分成05ZYH33组(注射1 mL野毒株菌液)、Δstk/stp1组(注射1 mL突变株菌液)和THB组(注射1 mL的新鲜THB液体培养基),每组10只.结果 PCR结果显示,stk/stp1基因被壮观霉素抗性基因Spcr替换,突变株构建成功;生物学特性实验表明,05ZYH33和 Δstk/stp1在接种2 h后开始缓慢增殖,在7 h时都到达平台期.突变株进入对数生长期(A600≈0.4)的时间比野毒株推迟1 h左右,到达平台期后的菌体密度比野毒株低(0.8 vs 1.0).05ZYH33和 Δstk/stp1在血平板上均长出灰白色、圆形半透明、湿润、表面光滑的细小菌落.菌落周围有明显的 β-溶血环,菌落形态和溶血活性无明显变化.小鼠致病性实验显示,05ZYH33组小鼠在12 h内全部死亡,Δstk/stp1组小鼠在12 h内死亡9只,24 h内全部死亡,THB组无发病和死亡症状.结论 stk/stp1同时缺失可能主要影响细菌增殖、分裂相关蛋白的调控.
关键词： 2型猪链球菌 基因敲除 生物学特性 丝/苏氨酸激酶和磷酸酶 -
2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶重组蛋白的制备及鉴定
目的 链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(serine/threonine phosphotase,STP)是重要的磷酸化信号调控系统成员之一.文中对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)STP编码基因stp进行原核表达并对纯化蛋白进行酶活测定.方法对S.suis 2 stp进行生物信息学分析,PCR扩增stp基因片段,构建重组表达载体pET28a::stp.将载体转入E.coli BL21中,经IPTG诱导,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定,利用磷酸对硝基苯酯(p-nitrophenyl phosphate,pNPP)为底物测定其水解量进而鉴定磷酸酶活性.结果 从05ZYH33基因组中PCR扩增到810bp的片段,经连接获得重组表达载体pET28a::stp;经诱导表达及纯化获得相对分子质量为32000的重组蛋白,该蛋白在Mn2+存在下能够水解pNpp.结论获得纯度较高的STP重组蛋白,该蛋白具有Mn2+依赖的磷酸酶活性,为后续阐明STK/STP磷酸化系统的调控机制打下基础.
关键词： 2型猪链球菌 链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶 原核表达 酶活鉴定 -
2型猪链球菌低分子量酪氨酸磷酸酶的制备及酶学研究
目的 表达纯化2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,SS2)低分子量酪氨酸磷酸酶(Low molecular weight protein tyrosine phosphatase,LMW-PTP),测定LMW-PTP磷酸酶活性并鉴定其酶活性位点,为后续的功能鉴定奠定基础.方法分别构建野生型LMW-PTP基因表达质粒pET28a:LMW-PTP、突变型LMW-PTP基因表达质粒pET28a:LMW-PTPC33A和pET28a:LMW-PTPR39A,重组质粒转化E coil BL21(DE3),筛选阳性转化子,通过IPTG诱导表达后经SDS-PAGE鉴定表达产物.镍柱亲和层析纯化得到重组蛋白经Western blot鉴定,野生型LMW-PTP免疫新西兰兔制备兔多克隆抗体.以对硝基苯酚二钠六水(PNPP-Na)为底物检测重组蛋白的磷酸酶活性.结果成功构建野生型LMW-PTP基因表达质粒pET28a:LMW-PTP、突变型LMW-PTP基因表达质粒pET28a:LMW-PTPC33A、pET28a:LMW-PTPR39A,在大肠杆菌中野生型和突变型LMW-PTP均以包涵体的形式存在,相对分子量为23 kDa,包涵体经镍柱纯化及透析复性获得纯度较高的野生型和突变型LMW-PTP.制备得到的抗LMW-PTP的兔多克隆抗体的效价为1:102400,且重组蛋白均能与His-Tag单抗和兔多抗血清发生反应.对野生型蛋白进行磷酸酶活性检测显示其具有酶活性,酶活为2.1 nmol/(min·μg),突变型LMW-PTPC33A、LMW-PTPR39A无磷酸酶活性.结论成功表达了具有磷酸酶活性的LMW-PTP,并鉴定出Cys33和Arg39是LMW-PTP的活性位点.为后续寻找LMW-PTP在2型猪链球菌致病过程中毒力相关的靶蛋白奠定了基础.
关键词： 2型猪链球菌 低分子量酪氨酸磷酸酶 原核表达 -
2型猪链球菌FtsZ重组蛋白的制备及其酶活性测定
目的 制备2型猪链球菌丝状温度敏感蛋白(Filamentous temperature-sensitive protein Z,FtsZ)重组蛋白并测定其水解三磷酸鸟苷(GTP)的酶活性.方法 从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中PCR扩增目的基因sz,构建重组表达质粒pET28a-ftsz,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western blot分析.重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA法检测抗体效价,用孔雀绿-磷酸检测法测定FtsZ重组蛋白的GTP酶活性.结果 成功构建pET28a-ftsz重组表达质粒;纯化获得大量纯度较高的FtsZ重组蛋白;ELISA检测兔多抗血清效价达1∶13 107 200;Western blot显示FtsZ重组蛋白能够与His-Tag单抗和兔多抗血清发生反应;以GTP为底物检测重组蛋白具有GTP酶活性.结论 成功制备了具有GTP酶活性的2型猪链球菌FtsZ重组蛋白并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究2型猪链球菌FtsZ在细胞分裂调控过程中的作用奠定基础.
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2型猪链球菌中国强毒株及其covR基因突变株的蛋白质组学研究
目的 通过比较2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33及其covR基因突变株△covR蛋白表达谱差异,质谱鉴定差异表达蛋白,分析CovR在蛋白表达调控中的作用.方法 首先将05ZYH33和△covR在THB培养基中培养至对数期,然后裂解细菌制备蛋白样品.第一向等电聚焦电泳在pH3～10的IPG胶条上完成后进行SDS-PAGE电泳,电泳胶经扫描分析后选取蛋白点进行质谱鉴定.结果 05ZYH33和△covR全菌蛋白裂解液经二维电泳分别得到559和491个蛋白点,经比对发现两菌株蛋白表达量差异3倍以上蛋白点40个,经质谱鉴定出15个蛋白,主要涉及细胞代谢的酶类如谷氨酸脱氢酶、腺苷酸激酶、PTS系统成分等,以及分子伴侣蛋白如GroEL和Dnak等;电泳分离得到△covR特异蛋白点124个,质谱鉴定出15个,主要为参与细胞糖代谢过程中的酶,如磷酸甘油酸激酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶等;质谱鉴定05ZYH33特异表达蛋白5个.结论 鉴定05ZYH33和△covR差异表达蛋白35个,部分蛋白涉及细菌毒力、宿主细胞粘附、细胞分裂等生命过程,同时蛋白分子伴侣在△covR中的表达变化说明CovR的调控可能发生在蛋白修饰水平,为研究CovR在调控细菌毒力中的作用和分子机制奠定基础.
关键词： 2型猪链球菌 毒力调控因子CovR 二维电泳 蛋白质组 -
2型猪链球菌层粘连蛋白结合蛋白的原核表达及免疫原性检测
目的 表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,S.suis 2)层粘连蛋白结合蛋白(Lmb)并检测其免疫原性.方法 PCR检测lmb基因在不同血清型S.suis中的分布.将S.suis 2中国强毒株05ZYH33的lmb基因克隆至表达载体pET32a,转化大肠杆菌E.coli BL21,IPTG诱导表达,His亲和层析柱纯化重组蛋白.Western blot检测Lmb的免疫原性.结果 lmb基因存在于大多数S.suis血清型中.诱导表达并纯化后获得较高纯度的重组蛋白.重组Lmb能够和感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应.结论 lmb基因在S.suis不同血清型中广泛分布,Lmb在细菌感染宿主过程中表达,可以作为疫苗开发的候选分子.
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宁波市首例人感染猪链球菌病的病原学分析
猪链球菌病是由猪链球菌引起的人-猪重症感染,病死率高.2005年7～8月份,四川省爆发了猪链球菌病,造成多人死亡,引起人类严重感染的疫情,对人类的生命健康造成了严重威胁.2007年5月,宁波市发现了首例猪链球菌引起化脓性肭膜炎的病例,我们对这一病例的病原菌进行了研究分析,现将检测结果报告如下.
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2型猪链球菌溶血素多克隆和单克隆抗体制备及鉴定
目的 制备并鉴定2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis2)四川分离菌株05ZYH33的溶血素(Suilysin,SLY)多克隆和单克隆抗体.方法 利用重组SLY蛋白制备SLY兔多抗,优化间接ELISA体系检测多抗效价,Westem blot分析SLY多抗特异性,检测SLY兔多抗对人外周血杀菌作用的影响.利用杂交瘤细胞融合技术制备SLY单抗,筛选杂交瘤细胞株并制备小鼠腹水,间接EHSA和Western blot鉴定SLY单抗的效价和特异性.结果 间接ELISA显示SLY多抗效价高达1:204 800,Western blot显示SLY多抗有较高的特异性和免疫反应性,人外周血杀菌试验显示,SLY多抗能加强人外周血对05ZYH33的杀伤作用.间接ELISA检测杂交瘤细胞2B6和5F7培养上清效价分别是1:800和1:3 200,单抗效价都为1:204 800.间接ELISA和Western blot鉴定显示,单抗2B6和5F7具有很强的特异性和免疫反应性.结论 成功制备了效价高、特异性强的S.suis2 05ZYH33 SLY多克隆和单克隆抗体.
