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大鼠脾免疫细胞发生规律的初步研究
脾是介于动脉血管和静脉血管之间的微循环高度分化、高度发达的器官,具有储血、造血、滤血和进行免疫应答等重要的功能.近年来许多学者在免疫学领域对脾的功能和免疫机理进行了广泛的研究和探讨[1].然而脾免疫细胞发生规律的研究相对较少.本实验借助光镜及电镜技术对大白鼠脾免疫细胞的发生规律进行了形态学观察,为专业理论和有关学科提供基本资料,有利于进一步探讨脾的免疫功能.
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高瘦素影响小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖的实验研究
目的:探讨高瘦素(Leptin)水平在不同免疫状态下对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况的影响.方法:选用8周龄的清洁级BALB/c雄性小鼠共50只,分成5组,分别腹腔注射外源性鼠Leptin和Leptin抗体,形成小鼠的不同Leptin水平状态;应用普乐可复(FK506)将小鼠分为正常免疫和免疫抑制状态两类,两种状态各设对照组,测定脾淋巴细胞增殖情况,ELISA方法检测外周血中IL-2、IL-4、IFN-γ和Leptin的浓度.结果:正常免疫状态下,Leptin组的脾细胞增殖与对照组无差异,细胞因子除IFN-γ升高外, IL-2、IL-4均无差异;Leptin抗体组显示脾细胞增殖能力下降,各细胞因子测定显示差异;免疫抑制状态下,Leptin组的IL-2、IFN-γ水平上升、IL-4分泌降低,这种结果也在几乎所有体外加入Leptin的各组中出现.结论:Leptin可以起免疫调节作用,增加IFN-γ、IL-2的合成,降低IL-4的产生,使免疫应答向Th1细胞方向偏离.在正常免疫状态下,Leptin的免疫调节作用不明显,而在免疫抑制情况下,这种调节作用得到体现.
关键词： 瘦素/药理学 细胞因子类/药物作用/代谢 细胞增殖/药物作用 脾/细胞学 人类 -
柞蚕雄蛾提取液对放疗后大鼠脾细胞中Th1/Th2类细胞因子的影响
目的:探讨柞蚕雄蛾提取液对放疗后大鼠脾细胞表达Th1类细胞因子IL-2、IFN-g和Th2类细胞因子IL-4、IL-10的影响,分析其作用机制.方法:将30只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、单纯放疗组和药物治疗组,于放疗后第14天观察各组大鼠的胸腺和脾脏指数变化,用免疫组化法检测大鼠细胞表达IL-2、IFN-g和L-4、IL-10水平的变化.结果:单纯放疗组与对照组大鼠相比,其胸腺和脾脏指数明显下降,脾细胞表达IL-4和IL-10的水平增加,差异有统计学意义,P＜0.05.但IL-2和IFN-g的表达无明显变化,P＞0.05.药物治疗组与单纯放疗组相比大鼠的胸腺、脾脏指数明显增加,脾细胞表达IL-2和INF-g的水平增加,IL-4和IL-10的水平下降,P＜0.05.结论:柞蚕雄蛾提取液可以有效降低放疗引起的免疫抑制,该作用可能与其诱导Th1类细胞因子的表达以及促进Th2样细胞因子向Th1类细胞因子漂移有关.
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卡介苗提取物对小鼠脾细胞免疫调节作用的体外实验研究
目的:分离活卡介苗(bacille calmette guérin,BCG)的有效组分,分析其组分的免疫调节活性.方法: 采用酶裂解法和超声波破碎法对活BCG进行裂解,通过Sephadex G100凝胶层析对其有效组分进行分离及相对分子质量的测定,用SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定纯度;采用四氮唑蓝(MTT)方法检测小鼠脾细胞的增殖反应,用ELISA方法检测细胞培养上清液中细胞因子的产生.结果: BCG提取液经Sephadex G100层析和SDS-PAGE凝胶电泳分离后得到3个组分BCGE1、BCGE2和BCGE3,相对分子质量分别为42.5×103、36.3×103和28.6×103;BCGE2和BCGE3均能诱导小鼠脾细胞的增殖反应和IL-12、TNF-α等细胞因子的产生,P值分别为0.000 1、0.000 1和0.002 7,并且有剂量效应关系;但BCGE1对小鼠脾细胞的增殖反应无促进作用,P＝0.497;BCGE1﹑BCGE2和BCGE3对小鼠脾细胞产生IL-4无诱导作用,P值分别为0.988、0.889和0.841.结论: BCGE2和BCGE3可能是BCG免疫调节作用的有效组分,对该成分的进一步分离纯化和机制研究,可为BCG的免疫治疗奠定基础.
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1型糖尿病与脾脏CD4+CD25+调节性T细胞及相关基因Foxp3表达的关系
目的:研究链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病小鼠发病中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)及相关基因Foxp3表达的变化,从而探讨CD4+CD25+Tr在自身免疫耐受中的作用.方法:实验选用健康昆明小鼠60只,将60只小鼠随机分对照组(n=20)和模型组(n=40).模型组给与腹腔注射6 g/L STZ溶液,60 mg/(kg·d),连续5 d;对照组给予枸橼酸钠缓冲液0.2 mL/d腹腔注射,连续5 d.流式细胞仪检测脾脏CD4+和CD4+CD25+Tr细胞数量的变化,RT-PCR检测脾小鼠脾脏细胞中CD4+CD25+Tr细胞相关基因Foxp3 mRNA的表达.结果:模型组血糖和抗胰岛素抗体水平明显高于对照组(t=0.023,P<0.05;t=0.018,P<0.05);模型组小鼠脾脏CD4+T细胞数量[(29.69±4.77)%]明显高于对照组[(19.60±11.42)%](f=0.014,P<0.05),模型组CD4+CD25+Tr/CD4+T比值低于对照组;Foxp3 mRNA水平模型组的表达普遍高于对照组.结论:CD4+CD25+Tr细胞的相对降低,引起外周耐受状态的打破;在STZ破坏胰岛细胞,自身抗原存在的同时,导致了自身免疫糖尿病的发生.
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小鼠脾脏自然杀伤性树突细胞纯化方法的比较
目的 比较流式细胞分选技术(FACS)及免疫磁珠分选技术(MACS)对小鼠脾脏自然杀伤性树突细胞NKDC分选纯化的效率,为自然杀伤性树突细胞的深入研究创造基本条件.方法 制备小鼠脾脏单细胞悬液,细胞悬液经70 μm细胞滤膜过滤,离心滤液,用红细胞裂解液裂解沉淀中的红细胞,用缓冲液洗涤两次后通过FACS和MACS分选方法各自分选其脾脏表型为NK1.1+ CD11c+的自然杀伤性树突细胞NKDC.结果 分选之前小鼠脾脏NK1.1+ CD11c+自然杀伤性树突细胞占3.3％.单细胞悬液经FACS分选的NKDC纯度为(90.2±2.0)％,回收率为(91.3±1.8)％,细胞活力(82.5±1.2)％；经MACS分选纯度为(70.5±3.0)％,回收率为(80.5±1.7)％,细胞活力为(60.2±0.8)％.两种方法分选NKDC细胞纯度差异有统计学意义(P=0.03),回收率差异也有统计学意义(P=0.02).结论 FACS较MACS可更高效、快捷、简便地纯化小鼠脾脏自然杀伤性树突细胞.
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仙草提取物对小鼠脾淋巴细胞DNA氧化损伤保护作用的研究
目的:观察仙草提取物对原代培养脾淋巴细胞H2O2所致DNA氧化损伤的保护作用.方法:原代培养24 h的脾淋巴细胞悬液,随机分为6组,其中4组细胞用不同浓度的仙草提取物溶液预先处理60 min,再加入50 μmol/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,6组细胞共同在4℃下染毒20 min,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,后用激光共聚焦显微镜拍摄图像,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度.结果:H2O2可致原代培养脾淋巴细胞DNA的严重损伤,而仙草提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100 μg/ml的浓度下,彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为88%、60%和36%(P分别<0.05、0.01、0.01),总彗星长度也从对照组的(49.56±6.94)μm,逐渐降低为(41.14±5.64)μm、(38.89±9.81)μm、(28.62±4.66)μm(P分别<0.05、0.01、0.01).结论:仙草提取物具有显著的抗氧化功能,能在一定浓度范围内保护细胞免受氧自由基对DNA的氧化损伤.
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环孢霉素和供体脾细胞门静脉接种延长小鼠心脏移植存活
目的探讨同种异系抗原门静脉接种和环孢霉素A(CsA)对同种异系间小鼠心脏移植存活期的影响.方法无菌条件下取出NIH/q新生小鼠(出生24 h内)的心脏,行BALB/C小鼠耳后皮下移植.移植前1周,预先用NIH/q小鼠脾细胞或用与供、受体无关的C57BL/6小鼠脾细胞行受体小鼠门静脉或腔静脉接种,同时给予小剂量CsA(4 mg/kg.b.w.)喂服(术前7 d～术后5 d).观察各组移植物的存活时间.结果供体脾细胞门静脉接种加CsA组移植物存活时间为(31.00±3.23)d,较其他各组显著延长(n=6,P＜0.05);单纯门静脉接种组和单纯CsA组移植物存活时间分别为(16.11±1.97)和(18.50±2.59)d,较对照组[(11.71±1.50)d]显著延长(P＜0.05);供体脾细胞经腔静脉接种以及与供、受体无关的C57BL/6小鼠脾细胞门静脉接种对移植物存活时间无显著影响(P＞0.05).结论供体脾细胞门静脉接种和CsA对延长同种异系小鼠心脏移植存活时间有协同作用,其作用具有抗原特异性.
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阳离子脂质体介导的外源基因转染小鼠脾细胞的方法学探讨
[目的] 探讨高效阳离子脂质体介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的方法.[方法] 用新型阳离子脂质体DOSPER包裹携带lac Z报告基因的质粒pCAGGS-lacZ按3种方法转染小鼠脾细胞,①常规方法直接转染;②脾细胞经刀豆球蛋白A(Con A)活化后再按常规方法转染;③用黏附辅助脂质体法(adhesion-assisted lipofection, AAL)转染脾细胞.转染效率用X-gal染色法测定.[结果] 上述3种方法的转染效率依次为<0.010,0.057及0.199,经方差分析,3种方法转染效率的差异有显著性(P<0.01,n=3).[结论] AAL法介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的转染效率高.
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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗抑制小鼠脾细胞的凋亡
目的:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠并以Em原头节攻击后探讨以上疫苗对小鼠脾细胞凋亡的变化.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫Balb/c鼠8 wk后,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染18 wk杀鼠取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于感染对照组.结论:泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞凋亡,而多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗可在一定程度上抑制感染鼠脾细胞的凋亡.
