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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗促进小鼠脾细胞因子的分泌
目的 动态观察多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化.方法 采用鼻腔内接种疫苗免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,检测脾细胞培养上清液中的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照.结果 疫苗接种组中IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后2～6、2～6、2～10和8～10周升高,分别在免疫后4、4、8和10周达高水平.结论 多房棘球绦虫重组BCG-Em Ⅱ/3疫苗在免疫早期(2～8周)即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应.
关键词： 多房棘球绦虫 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 细胞因子 -
多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察
目的 动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化. 方法 将混合疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,测定IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平.试验设有PBS对照. 结果 疫苗接种组小鼠脾细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后2～10周、4～8周、6～10周和4～6周升高,分别在免疫后6、6、8和4周达高水平,含量分别为10.0 pg/ml、(75.0±6.6) pg/ml、(245.0±83.0) pg/ml和(187.5±16.5) pg/ml. 结论 多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗在免疫早期(2～8周)即可诱导小鼠产生TH1和TH2混合型免疫反应.
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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的动态观察
目的 动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化.方法 将疫苗采用鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠,免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠,眼球取血,常规ELISA测定血清IgG及其亚类和IgE水平,同时设有PBS对照.结果 疫苗免疫组的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后2～18周升高,分别在免疫后10、4和4周达高水平,ELISA A值分别为0.097±0.030、0.024±0.003和0.022±0.003;血清IgG1和IgE水平均在免疫后2～18周显著降低,分别在免疫后4周和18周达低水平,A值分别为0.022±0.005和0.181±0.011;血清IgG3水平在免疫后10～12周增加,在免疫后12周达高水平,A值为0.212±0.008.结论 多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗在免疫早期即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应.
关键词： 多房棘球绦虫 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 IgG及其亚类 IgE -
多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗构建及其表达效率
目的 构建多房棘球绦虫(Em)重组卡介苗(BCG-EmⅡ/3)疫苗,分析EmⅡ/3分子在该疫苗中的表达效率.方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增EmⅡ/3的抗原编码基因:将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG,构建重组质粒pBCG-EmⅡ/3;电穿孔法转化BCG,构建多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗.免疫印迹分析重组BCG-EmⅡ/3疫苗的表达产物.结果 RT-PCR成功扩增出1 680 bp的EmⅡ/3抗原编码基因;双酶切证实EmⅡ/3抗原编码基因成功插入pBCG中;PCR证实rBCG-EmⅡ/3疫苗构建成功;免疫印迹分析发现重组BCG-EmⅡ/3疫苗的表达产物在相对分子质量(Mr)约为65×103处有明显的目的 蛋白表达条带,且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别.结论 成功构建了多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗,为疫苗的开发和利用打下了坚实的理论基础.
关键词： 多房棘球绦虫 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 构建 表达效率 -
多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导的保护力观察
目的 探讨多房棘球绦虫(Em)重组卡介苗(BCG-EmⅡ/3)疫苗免疫对Em原头节攻击感染的保护性作用.方法 Balb/c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗(BCG)对照组和磷酸缓冲液(PBS)对照组.接种免疫8周,用Em原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,称取检获泡球蚴质量,计算减蚴率,并用ELISA法测定血清中IgG及其亚类和IgE水平.结果 与PBS对照组比较,疫苗皮下注射组和鼻腔内接种组小鼠检获泡球蚴质量均降低(q=2.65、3.68,P＜0.05或＜0.01),疫苗鼻腔内接种组与皮下注射组比较,检获泡球蚴质量降低(q=2.78,P＜0.05),疫苗接种组的减蚴率为63.23%～74.70%;与疫苗鼻腔内接种前比较,接种后和Em原头节攻击后小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平均明显升高(P＜0.05或＜0.01),IgGl降低(P＜0.01),IgG3未见明显改变(P＞0.05).结论 重组BCG-EmⅡ/3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用.
关键词： 棘球蚴病 肝 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 保护力 -
多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导小鼠脾细胞凋亡的研究
目的 探讨多房棘球绦虫(Em)重组卡介苗(BCG-EmⅡ/3)疫苗免疫对Em原头节攻击小鼠脾细胞凋亡的影响.方法 Balb/c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗(BCG)对照组和PBS对照组.免疫8周时用Em原头节攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率;取脾分离脾细胞,流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率.结果 与PBS对照组相比,疫苗皮下注射组和鼻腔内接种组小鼠检获泡球蚴质量均降低(q=2.65、3.68,P＜0.05或P＜0.01),疫苗鼻腔内接种组与皮下注射组比较,检获泡球蚴质量明显降低(q=2.78,P＜0.05),疫苗接种组的减蚴率为63.23%～74.70%;疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于PBS对照组(P＜0.01);皮下注射组的脾细胞凋亡发生率明显低于鼻腔内接种组(P＜0.01).结论 泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞发生凋亡,多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗接种可抑制感染鼠脾细胞凋亡.
关键词： 棘球蚴病 肝 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 脾 细胞凋亡 -
多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导小鼠脾细胞因子变化的研究
目的 探讨多房棘球绦虫(Em)重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化.方法 将Balb/c小鼠按体质量随机分为3组:疫苗皮下注射组、疫苗鼻腔内接种组、对照组.免疫后8周用Em原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,分别用原液、Em抗原(EmAg)、刀豆蛋白A(ConA)或植物血凝素(PHA)培养,酶联免疫吸附(ELISA)法检测脾细胞培养上清液中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-β)、白细胞介素4(IL-4)水平.结果 疫苗皮下注射组原液培养条件下IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平分别为(34.6±2.7)、(34.5±2.8)、(265.0±0.0)、(9.8±2.6)ng/L,与对照组[(25.0±1.9)、(30.0±0.0)、(10.0±0.0)、(12.5±2.7)ng/L]比较差异均有统计学意义(P＜0.01或＜0.05);疫苗鼻腔内接种组原液培养条件下上述4种指标分别为(32.5±2.2)、(33.6±2.7)、(130.0±0.0)、(10.4±2.7)ng/L.与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01或＜0.05);疫苗皮下注射组原液培养条件下TNF-α水平明显高于疫苗鼻腔内接种组(P＜0.01).EmAg、ConA(或PHA)刺激培养条件下,上述4种指标明显高于相同组别的原液培养(P＜0.01),且ConA(或PHA)刺激培养条件下,上述4种指标明显高于相同组别的EmAg刺激培养条件(P＜0.01).结论 多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导小鼠产生辅助T淋巴细胞(Th)1型免疫反应,从而对抗Em原头节攻击感染.
关键词： 棘球蚴病 肝 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 细胞因子类 -
多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究
目的 探讨多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫和多房棘球绦虫(Em)原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化.方法 Balb/c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗(BCG)对照组和磷酸缓冲液(PBS)对照组.疫苗免疫8周时用Em原头节进行攻击,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比.结果 疫苗皮下注射组和鼻腔接种组的脾CD4+T细胞亚群比值分别为0.345±0.018、0.314±0.014,与PBS对照组(0.216±0.027)比较明显增高(q值分别为3.93、3.76,P＜0.01);CD8+T细胞亚群比值分别为0.091±0.005、0.083±0.007,与PBS对照组(0.085±0.018)比较无明显变化(q值分别为0.92、0.89,P＞0.05);CD4+/CD8+亚群比值分别为3.81±0.30、3.80±0.44,与PBS对照组(2.75±1.08)比较明显增高(q值分别为3.25、3.06,P＜0.01).皮下注射组的CD4+和CD8+T细胞亚群数目显著高于鼻腔内接种组(q值分别为3.52、2.63,P＜0.01或＜0.05).结论 CD4+T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用.
关键词： 棘球蚴病 肝 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 T淋巴细胞亚群 -
多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导的保护力观察
目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCC-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:混合疫苗接种组的减蚴率为45.29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和lgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低.结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用.
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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗对小鼠脾细胞凋亡的影响
目的:检测多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗对原头蚴攻击小鼠脾细胞凋亡的影响.方法:用重组BCG-EmⅡ/3疫苗分别通过皮下注射和鼻腔粘膜接种免疫BALB/C小鼠8周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,分离脾细胞,用ConA刺激培养16～18 h,然后用Annexin V-FITC染色法检测脾细胞凋亡.结果:小鼠脾细胞原液组和ConA刺激组细胞凋亡发生率均显著低于PBS对照组(P＜0.05或P＜0.01);每个ConA刺激组脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液组(P＜0.05或P＜0.01);鼻腔粘膜接种组脾细胞凋亡率显著低于皮下注射组(P＜0.01).结论:多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可抑制感染小鼠脾细胞发生凋亡,增加CD4+T细胞亚群的数量,加强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应.
关键词： 多房棘球绦虫 重组BCG-EmⅡ/3疫苗 脾细胞 凋亡 -
多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察
目的:动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化.方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照.结果:疫苗接种组的脾CD4+和CD8+T细胞亚群分别在免疫后2～12周和2～18周升高,分别在免疫后6和10周达高水平.结论:CD4+T细胞亚群数目在多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em 14-3-3疫苗免疫早期(2～6周)显著增加.
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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾脏T细胞亚群的变化
目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/C鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:疫苗接种组的脾CD4+细胞亚群显著增加,CD8+T细胞亚群无明显变化,CD4+/CD8+亚群比值明显升高;皮下注射组的CD4+和CD4+/CD8+亚群比值显著高于鼻腔内接种组.结论:CD4+T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起一定作用.
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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠的免疫保护力观察
目的 探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用.方法 将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平;分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果 疫苗接种组的减蚴率为45.29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低;疫苗接种组的脾CD4+T细胞亚群显著增加,CD8+T细胞亚群无明显变化,CD4+/CD8+亚群比值明显升高.结论 多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE以及CD4+T细胞亚群在疫苗诱导的保护力中起重要作用.
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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞因子的变化
目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫后再以Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化.方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠后8周,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染.感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,并收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;皮下注射组的TNF-α水平高于鼻腔内接种组.结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗可诱导小鼠产生Th1型细胞应答,抵抗Em原头节的攻击感染.疫苗皮下注射途径优于鼻腔内接种.
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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗抑制小鼠脾细胞的凋亡
目的:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠并以Em原头节攻击后探讨以上疫苗对小鼠脾细胞凋亡的变化.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫Balb/c鼠8 wk后,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染18 wk杀鼠取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于感染对照组.结论:泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞凋亡,而多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗可在一定程度上抑制感染鼠脾细胞的凋亡.
