电针对大鼠急性骨骼肌损伤修复中生长相关蛋白和聚集蛋白表达的影响

目的:通过观察电针治疗对急性骨骼肌损伤中生长相关蛋白(GAP-43)及聚集蛋白(agrin)表达的影响,探讨电针促进受损骨骼肌功能恢复的作用机制.方法:将32只SD大鼠随机分为正常组(A组,n=4)、模型组(B组,n=4)、自然恢复组(C组,n=12)、电针组(D组,n=12),A组为空白对照不做任何处理,其余各组使用自制重物打击器建立骨骼肌急性钝挫伤模型,C组不做电针处理自然恢复,D组于造模后48h开始电针干预,每日1次,每次15min.于造模后24h处死B组取材观察造模是否成功,C组及D组于建模后第7、14、21天三个时间点同时取材使用HE染色观察组织形态变化,Western-bolt检测GAP-43及agrin表达情况.结果:HE染色显示:与A组比较,各组肌细胞大量溶解、肌纤维排列紊乱及炎性细胞浸润.D组与C组比较,肌卫星细胞增殖较快,新生肌纤维明显增多,修复更为迅速.在正常组织中GAP-43表达量极少,骨骼肌损伤后各组中GAP-43表达量显著增高(P＜0.05);在第14天,GAP-43表达量达到高峰,D组继续表达呈上升趋势(P＜0.01),C组开始下降,但仍高于A组(P＜0.05).与A组相比,骨骼肌受损后各时间点C、D两组agrin的表达明显增多(P＜0.05),其中D组差异为显著(P＜0.01).结论:电针有促进受损骨骼肌恢复的作用,可能与提高GAP-43和agrin的表达水平有关.

α-synuclein片段对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能和活性氧水平的影响

目的研究α-synuclein的纤维源性片段NAC对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能及活性氧水平的影响.方法采用神经生长因子将PC12细胞诱导分化成多巴胺能细胞,后经不同浓度的NAC(0、0.1、1.0、10.0、25.0、50.0 μmol/L)处理48 h,MTT法测定线粒体氧化还原酶的活力.用硫磺素S染色观察细胞内蛋白聚集情况,JC-1检测线粒体膜电位,DCFH-DA检测细胞内活性氧水平.结果经NAC处理48 h后,与对照组比较,PC12细胞线粒体活力在高浓度(≥25 μmol/L)NAC作用时明显下降64.1%(P＜0.05).NAC(25 μmol/L)可诱导出现蛋白聚集,JC-1荧光染色可检测到线粒体膜电位明显去极化,DCFH-DA荧光染色及流式细胞仪检测显示PC12细胞内活性氧增加.60.6% 结论 NAC可引起PC12细胞内蛋白聚集,进而线粒体功能障碍及氧化应激增强,终导致细胞死亡.

聚集蛋白基因转染促进移植肌肉功能恢复的实验研究

目的 研究转染神经源性聚集蛋白基因对游离移植肌肉功能恢复的影响.方法 选大鼠股薄肌原位移植模型,按移植术后即刻肌肉内注射溶液的不同分为pCS2+-agrin基因转染实验组,pCS2+空质粒组以及生理盐水注射组,后两组作为手术对照组,基因电转染术后不同时间检测各组肌肉收缩功能、神经源性agrin蛋白表达,以及终板区烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)数量的变化.结果 术后早期agrin基因转染组肌肉功能恢复明显优于空质粒转染组以及生理盐水注射组(4、5、10周,P＜0.05),但术后晚期15及20周时各组肌肉功能间差异无统计学意义.免疫组化显示agrin基因转染后,术后1周到5周,有大量棕黄色抗原抗体复合物沉积在终板及其邻近区域,但到第10周时表达明显减少,接近对照组水平.agrin基因转染组终板区的nAChR数量在各个时间点均高于实验对照组.结论 移植肌肉终板区转染神经源性agrin基因,促进了移植肌肉早期功能的恢复.

自噬及其在神经变性疾病中的保护作用

自噬是一种在细胞内清除绝大多数长半衰期蛋白质和细胞器的降解过程,包裹着细胞质和细胞器的双层膜的自噬泡和溶酶体融合,并对胞内成分进行降解.自噬功能障碍会导致各种神经变性疾病,病理学主要表现为异常蛋白质的聚集,神经变性疾病中,自噬对于降解错误折叠和聚集蛋白方面起着关键的作用,受到越来越多研究者的关注.

肌肉内神经源性聚集蛋白功能研究进展

聚集蛋白(agrin),早因为能促进培养肌组织表面乙酰胆碱受体(AChR)的聚集而被发现,后从电鳐电器官的基底膜中分离出来.从结构上看,agrin是一种肝素硫酸酯类糖蛋白分子(heparan sulfate proteoglycan),相对分子质量大约为220×103.其N末端含有一个与K型蛋白酶抑制剂同源的序列区,介导了agrin与基底膜层粘连蛋白(laminin)的结合,而C端含有与相应受体作用的功能区,包括3个与laminin-α链的G区同源的序列和4个富含半胱氨酸残基的类表皮样生长因子(EGF)重复序列区,前者可能介导了agrin与α-肌营养不良蛋白聚糖(α-dystroglycan)的结合,并能促进细胞之间的黏附,而后者主要提供二硫键的结合位点.从第3个类EGF序列区到C末端之间相对分子质量长55×103的片段,主要与乙酰胆碱受体(AChR)簇集活性有关[1].

聚集蛋白和CD34在良性与恶性肝脏病变鉴别诊断中的作用

聚集蛋白是硫酸类肝素蛋白聚糖家族中的一个成员,因其正常情况下表达于肝脏胆管和血管基膜,而被认为是胆管和血管的标记物.正常肝组织中很少表达聚集蛋白,肝硬化中因胆小管反应性增生和纤维间隔新的血管形成而表达增加,肝细胞癌中肿瘤新生血管形成聚集蛋白也表达增加,提示聚集蛋白可能作为肝细胞癌诊断的一种标记物.

Agrin在神经系统损伤后修复中的作用