首页 > 文献资料
-
三种常见人呼吸道腺病毒六邻体蛋白的克隆、表达及抗原性分析
目的：克隆、表达常见的人呼吸道腺病毒的主要中和抗原六邻体蛋白，分析重组表达产物的抗原性和免疫原性。方法分别PCR扩增克隆人3型、4型、7型腺病毒完整的六邻体蛋白基因，测序和序列比对并与GenBank上人腺病毒的六邻体蛋白进行同源性比对；对其主要的抗原区进行克隆、表达和纯化，表达产物免疫动物，ELISA和Western blot实验对表达产物的抗原性和免疫原性及其交叉反应进行分析。结果国内首次报道1株人4型腺病毒的六邻体基因序列，与GenBank中的NHRC3分离株核酸及氨基酸的同源性均大于99％；3种腺病毒包含全部高变区的六邻体部分区段在大肠杆菌中成功表达并纯化，重组蛋白可以被不同型别的人腺病毒免疫血清识别，重组蛋白免疫小鼠血清可以识别不同型别的人腺病毒，而型间反应有显著差异，预测了3种腺病毒六邻体型、型间特异性表位。结论成功表达人3型、4型、7型腺病毒六邻体蛋白主要抗原区，重组表达产物有强免疫原性，包含型间、型特异性抗原表位。
-
基因测序在人类腺病毒分型中的应用
人类腺病毒可引起呼吸道、胃肠道和眼部的感染,不同类型的腺病毒引起的疾病类型及表现不尽相同.因此,腺病毒的分型具有重要的临床研究价值.在基因学上,编码六邻体蛋白,五邻体蛋白和纤维蛋白的区域是腺病毒基因组中变异大的区域,通过对其编码区的测序,尤其是六邻体蛋白编码区的测序,是快速可靠的确定腺病毒类型的重要方法之一.此文主要对基因测序在腺病毒分型中的优势、应用现状,在腺病毒突变重组、种系发生学中的鉴定检测等作一综述.
-
黄芪甲苷体外抗腺病毒作用研究
目的 研究黄芪甲苷体外抗腺病毒作用.方法 采用细胞病变效应(CPE)抑制实验和噻唑蓝(MTT)比色法观察黄芪甲苷对人腺病毒3型(HAdV3)的抑制作用,激光共聚焦显微镜荧光分析检测黄芪甲苷在病毒生物合成阶段对HAdV3六邻体(hexon)蛋白表达的影响.结果 CPE及MTT结果表明黄芪甲苷对腺病毒有直接灭活作用,同时能够抑制腺病毒的复制和吸附,病毒抑制率与药物浓度呈正相关,但在细胞保护作用方式下黄芪甲苷不能阻断病毒进入细胞.在生物合成阶段黄芪甲苷组与病毒对照组比较hexon蛋白的表达明显降低.结论 黄芪甲苷在体外具有抗腺病毒作用,黄芪甲苷抗腺病毒作用可能与其在生物合成阶段抑制hexon蛋白的表达有关.
-
腺病毒六邻体蛋白的基因测序在流行性角膜结膜炎病原检测中的应用
背景 流行性角膜结膜炎是常见的眼部传染性疾病,腺病毒为常见病原体之一.六邻体蛋白是构建病毒衣壳的重要蛋白,也是病毒与抗体结合的主要靶点.应用针对六邻体蛋白编码区的测序方法可对腺病毒进行快速分型,对于流行性角膜结膜炎的早期诊断、病情监测和预后判断具有重要意义. 目的 通过针对腺病毒六邻体蛋白编码区的测序,完成上海地区腺病毒与流行性角膜结膜炎相关的分子流行病学调查.方法 在受检者知情同意的情况下,收集2010年1月至2012年12月在上海市眼病防治中心和上海市急性出血性结膜炎防控办公室下属红眼病监测站点就诊的214例可疑流行性角膜结膜炎患者结膜囊的结膜拭子样本214份.对结膜囊标本提取DNA后,通过PCR法扩增病原体六邻体蛋白编码区内140 bp的保守序列,对于腺病毒阳性的标本,通过对六邻体蛋白保守区域内956 bp的序列进一步测序以确定其病毒分型. 结果 在214例患者中,109例在通用PCR中显示腺病毒阳性,占50.93％.其中通过基因测序确定AdV1者4例,AdV2者33例,AdV3者15例,AdV4者12例,AdV8者19例,AdV19者15例,AdV37者8例.属于D组腺病毒的AdV8、AdV19和AdV37检出阳性患者更容易出现角膜炎症反应、伪膜性结膜炎和耳前淋巴结肿大等,而B组腺病毒检出阳性者易伴发上呼吸道感染,但角膜受累者较少.结论 针对六邻体蛋白编码区内保守区域的测序是腺病毒分型的重要方法之一,可快速确定流行性角膜结膜炎是否系腺病毒感染引起,并确定腺病毒分型.
-
人3型腺病毒GZ13株的分离鉴定及六邻体蛋白的分子进化研究
目的 分离鉴定1株引起儿童急性支气管肺炎的腺病毒及分析其主要中和抗原六邻体蛋白的分子进化趋势.方法 采用荧光定量PCR方法,对1例引起严重支气管肺炎的患儿咽拭子进行检测,并从中分离得到1株腺病毒(命名为GZ13).利用型特异性引物PCR进行初步亚型鉴定;克隆该株腺病毒完整的六邻体蛋白基因,测序和序列比对,确定其型别;同时与GenBank上人3型腺病毒的六邻体蛋白进行同源性比对,分析预测六邻体蛋白的分子进化趋势.结果 该临床标本经荧光定量PCR鉴定为腺病毒强阳性,型特异性引物PCR初步鉴定为3型;完整六邻体基因比对终确定为人3型腺病毒;GZ13株与我们先前分离的GZ01、GZ02株及台湾地区分离株核苷酸及氨基酸的同源性均大于99%.结论 引起该例儿童急性支气管肺炎的病原体为人3型腺病毒,目前在广州以及台湾地区流行的3型腺病毒仍属同一流行株,其主要中和性抗原六邻体蛋白未出现明显变异,这对今后开发研究人3型腺病毒疫苗及药物具有重要指导意义.
