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GⅡ.4型诺如病毒GZ121株P蛋白的表达及其结合HBGA受体特征
目的 建立我国流行优势株GⅡ.4型诺如病毒(GZ121)P蛋白(包括P颗粒和P二聚体)的原核表达系统,并明确其结合HBGAs受体的能力和方式.方法 从GⅡ.4型诺如病毒GZ121株基因组中克隆P区域基因片段,通过构建P区域氨基酸序列进化树,确定其基因簇.构建含铰链Hinge-P和不含铰链P-CDCRGDCFC的pGEX4T-1原核表达质粒,将构建的原核表达载体导入大肠杆菌(E coliBL21,用0.6 mmol/L IPTG(isoProPylthio-β-D-galaetoside)过夜诱导P颗粒(不含铰链)和P二聚体(含铰链)在BL21中表达.目的重组蛋白经溶血酶酶切和FPLC鉴定分析,用EIA法检测P颗粒和P二聚体与HBGAs的结合特征.结果 GZ121株诺如病毒为GⅡ.4基因型2004簇(GⅡ.4/2004 cluster).SDS-PAGE分析确定P颗粒和P二聚体相对分子质量(Mr)约为36×103,大小与报道相符.重组P颗粒经FPLC证实,其在Mr约为830×103处形成特异的P颗粒波峰,Western blot技术证实了重组P蛋白的特异性.EIA分析结果表明,GZ121株P蛋白与A、B、O型唾液均能结合,与非分泌型唾液不结合,而P颗粒结合HBGAs受体能力是P二聚体的80～ 100倍,与96簇VA387 P颗粒相比,其结合O型能力增强,而结合A型能力稍弱.结论 我国优势流行株GⅡ.4型诺如病毒P蛋白的表达成功及其与HBGAs受体结合模型的建立,为今后研究我国诺如病毒的流行进化规律及疫苗的开发研究奠定了实验基础.
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我国GⅡ.4型诺如病毒Sydney株P颗粒的表达及其组织血型抗原结合特征
目的 表达我国新发现GⅡ.4型诺如病毒优势流行株Sydney株的P颗粒,并探究其结合人类组织血型抗原(HBGAs)受体特征及变化规律.方法 扩增SH 2012 05株中的P区域序列,构建进化树分析其氨基酸序列,并在原核表达系统中表达P颗粒.目的重组蛋白经Western blot确定其特异性,并采用ELISA法检测P颗粒结合HBGAs的能力及方式.结果 SH 2012_05毒株P区域与Sydney/2012原型株同源性为99.1％oo,为GⅡ.4/Sydney基因簇.SDS-PAGE电泳和West-ern blot分析验证SH 2012_05株P颗粒具有特异性.其结合HBGAs受体方式与以往流行的基因簇一致,即与A、B、O、AB型分泌型唾液均能结合,其中与B型抗原亲和力高.结论 成功表达了我国新发现GⅡ.4型诺如病毒Sydney株的P颗粒,明确了Sydney株能结合分泌型HBGAs受体的特征.本研究为诺如病毒疫苗株选择提供了技术储备,这将为GⅡ.4型诺如病毒的预防和控制提供科学基础.
