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剪接因子 SF3 a3通过 PI3 K-Akt 信号传导通路调控丙型肝炎病毒的复制
目的：研究剪接因子 SF3a3（ Splicing factor 3， subunit 3， SF3a3）在丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）复制中的作用并初步探索其机制。方法以基因2型HCV病毒株（JFH1）感染的Huh7.5.1细胞（肝癌细胞株）为研究平台，用siRNA技术沉默基因SF3表达，72 h后感染JFH124 h，用PEG-IFNα-2b（30 IU／ml）处理48 h，用实时荧光定量PCR（RT-PCR）及免疫印迹（Western Blot）技术研究SF3家族成员与HCV核心蛋白、干扰素信号通路蛋白间的相互作用。结果在mRNA和蛋白表达水平上，特异性siRNA对SF3a3的沉默效果佳；沉默SF3a3后，HCV核心蛋白表达增强；同等PEG-IFNα-2b压力下，干扰素抗HCV的作用受抑制；而PI3K-Akt总蛋白和磷酸化蛋白表达降低。结论 SF3a3可通过下调PI3K-Akt总蛋白和磷酸化蛋白表达，直接和间接促进HCV复制。
关键词： 剪接因子3a3 肝炎 丙型 聚乙烯二醇类 PI3K-Akt通路 -
PI3K-Akt信号通路与大鼠肝脏缺血预处理保护作用关系的研究
目的 研究PI3K-Akt信号转导系统在大鼠肝缺血再灌注(IR)及缺血预处理(IPC)后的激活规律,探讨其与IPC保护作用的关系.方法 将68只SD雄性大鼠随机分成空白对照组(Sham)、缺血再灌注组(IR)、缺血预处理组(IPC)、阻断剂组(LY)、溶剂对照组(DMSO)5组,于复灌0、1/2、1、2、4h各不同时间点取材,应用免疫组化和免疫印迹法测定肝组织中Akt1、p-Akt1等信号蛋白的表达;HE染色观察肝组织显微结构;同时测定血清肝功酶水平.结果 IR组大鼠在各复灌时间点上都显示明显肝细胞损伤,并随复灌时间延长加重;肝细胞质内有p-Akt1(Thr-308)表达.IPC组大鼠血清肝功酶指标在复灌0、2、4h较IR组明显降低(P＜0.01),p-Akt1(Thr-308)表达更强、时程延长;同时,IPC使Akt1下游底物Bad(Ser-136)磷酸化水平增强、caspase-3的活化减少.应用PI3K特异性阻断剂LY294002阻断PI3K-Akt信号系统活化的同时,也抑制了IPC的保护作用.结论 IPC通过对PI3K-Akt信号转导通路的调控发挥了对肝脏的保护作用;该信号通路的激活水平上调,可能是肝IPC保护作用的机制之一.
关键词： 缺血再灌注损伤 缺血预处理 PI3K-Akt通路 肝脏 大鼠 -
miRNA-126质粒转染对甲状腺未分化癌细胞系8505C的影响
目的 研究miR-126质粒转染对甲状腺未分化癌细胞系8505C的影响及具体机制.方法 通过HiPerFect转染试剂分别转染miR-126质粒和空质粒至8505C细胞,细胞分组为miR-126组(miR-126)和对照组(control),MTS细胞增殖实验测定细胞24h,48h,72h的增殖情况,细胞克隆实验测定比较两组细胞2周生成的细胞克隆团块数量,蛋白免疫印迹法测定两组细胞p85β蛋白表达,PI3K-AKT通路的表达情况.结果 MTS试验示:质粒转染后72h,miR-126组细胞增殖下降达到峰值(65.14±1.31％VS100.00±2.09％,P＜0.0001);细胞克隆实验示:与对照组相比,miR-126组细胞克隆团数量明显下降(67.31±9.34％VS100.00±8.13％,P＜0.05);蛋白免疫印迹实验发现miR-126组p85β表达量下降了41.31+2.18％ (P＜0.0001),p-AKT表达量下降了35.84±1.75％(P＜0.0001).结论 miR-126质粒转染有效抑制了甲状腺未分化癌细胞系8505C的增殖和克隆,其机制为miR-126作用其靶基因PIK3R2,抑制了PI3K-AKT通路活化.
关键词： miR-126 甲状腺未分化癌 8505C细胞系 PI3K-Akt通路 -
丹参对大鼠肝缺血再灌注损伤PI3K-AKT信号传导通路的影响
目的 研究丹参注射液预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)中PI3K-AKT信号传导通路的影响.方法 健康雄性SD大鼠80只,随机分为4组,即假手术组、缺血再灌注组(IR组)、丹参组(SI组)、丹参+阻断剂组(LY组),每组分别按再灌注时间(1、3、6、24h)分为4个时相,每组各个时相均为5只.制作70％肝缺血再灌注模型,测血清ALT、AST及LDH水平；免疫印迹法测肝组织中PI3K、Akt及p-Akt(Ser308)蛋白的表达情况；TUNEL法观察各组的肝细胞凋亡；以及光镜下观察大鼠肝脏形态学变化.结果 ALT、AST、LDH含量:IR、SI、LY组的值明显高于假手术组(P＜0.05)；SI组、LY组各个时相的值较IR组均下降(P＜0.05)；与LY组比较,SI组各个时相的值均下降(P＜0.05).免疫印迹检测:各组PI3K、AKT的表达无显著差异(P＞0.05)；而在p-Akt的表达中,假手术、IR、LY组组间无显著差异(P＞0.05),SI组各时相的表达都高于其余各组,且均有显著差异(P＜0.05).凋亡检测:IR组肝细胞有典型的凋亡特征,SI、LY及假手术组均优于IR组(P＜0.05)；其中SI组又优于LY组(P＜0.05)；假手术组正常,优于其余各组.在光镜下观察肝形态学变化,可见IR组损伤为明显,SI组和LY组较IR组轻,其中SI组更轻,而假手术组肝组织形态正常.结论 肝脏缺血再灌注造成了肝细胞显著损伤,丹参注射液预处理通过PI3 K-Akt信号传导通路的调控发挥了对肝脏的保护作用.
关键词： 肝脏 缺血再灌注损伤 丹参 PI3K-Akt通路 大鼠 -
miRNA146b在多种疾病中的作用及其机制研究进展
miRNA 146b(简称 miR-146b,其人类同源性miRNA也被称为 hs-miR-146 b-5 p)同 miRNA 146 a均是miRNA 146家族中的一员.鼠miR-146 b由位于19 号染色体19 qC3 位置的 MIRNA146 B 基因编码,而鼠miR-146 a由位于11 号染色体的11 qA5 位置的MIRNA146 A基因编码,两者结构差异仅是两个位于3′端的核苷酸,该区域对目标识别的影响较小[1].因此,miR-146a 和 miR-146b 可通过靶向性结合同一转录产物达到同样的抑制翻译的目的,并具有相似的调节通路.miR-146 b可抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,miR-146 b在甲状腺乳头状癌(thyroid papillary carcinoma,PTC)、乳腺癌、前列腺癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lym-phoma,DLBCL)和胶质瘤中的表达均发生显著变化.此外,miR-146b 在小儿中耳炎等感染性疾病,阿尔茨海默病、视网膜黄斑变性等退行性疾病中亦发挥关键影响.本文将对miRNA146 b在上述不同疾病中扮演的双重角色及相关作用机制进行综述.
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乌索酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化的机制
研究在乌索酸诱导的人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化过程中PI3K/Akt信号通路的调控作用.乌索酸作用HL-60细胞96 h后,通过形态学观察,四唑氮兰(NBT)还原实验等研究发现乌索酸能诱导HL-60细胞发生单核分化；Western blotting结果表明乌索酸能激活PI3K/Akt信号通路,上调通路关键蛋白——Thr308和SeR473两个位点磷酸化的Akt,且通过免疫荧光实验检测到通路激活过程中发生Akt的核迁移；另外,为进一步证明分化与PI3K/Akt通路的相关性,采用PI3K特异性抑制剂LY294002,结果发现抑制剂作用后乌索酸的诱导分化作用消失.因此,乌索酸能够诱导HL-60细胞向单核方向分化,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt通路,从而达到分化诱导作用.
关键词： 乌索酸 分化 急性早幼粒白血病 HL-60 PI3K-Akt通路 -
神经生长因子对H9 c2心肌细胞缺氧/复氧后凋亡的保护作用及其机制
目的：探讨神经生长因子( NGF)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧( H/R)后凋亡的保护作用及其机制。方法将培养的H9 c2心肌细胞随机分为5组：正常对照组( C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、NGF组(N组)、NGF+PI3k受体特异性阻断剂LY294002组( N+L组)和LY294002组( L组)。 C组用正常培养液在通有95%空气+5% CO2的37℃培养箱内正常培养8 h；H/R组用预先经95% N2+5% CO2的混合气饱和1 h的模拟缺氧液置换正常培养液后,放入通有95% N2+5% CO2的37℃培养箱缺氧培养4 h,然后将模拟缺氧液换用预先经95%空气+5% CO2饱和的正常培养液,在正常条件下复氧4 h；N组、N+L组和L组先缺氧培养4 h(缺氧条件同H/R组),再分别用预先经95%空气+5% CO2饱和的含NGF、NGF+LY294002和LY294002的正常培养液置换模拟缺氧液,在正常条件下复氧4 h。 NGF和LY294002的终浓度分别为0.05 mg·L-1和3 mg·L-1。 CCK-8比色法测定各组细胞的存活率；应用碘化丙啶( PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot法检测胞内Akt磷酸化水平及内质网应激蛋白Caspase-12蛋白的表达。结果 N组与N+L组或H/R组或L组相比能明显提高H9 c2心肌细胞经H/R损伤后的存活率,减少细胞凋亡率,上调Akt磷酸化水平,降低内质网应激蛋白Caspase-12表达；LY294002明显抑制了NGF对Akt磷酸化水平的上调作用。结论 NGF对经H/R损伤的 H9 c2心肌细胞有抗凋亡作用,其机制可能与PI3k-Akt通路有关。
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白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用和机制
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用及其机制.方法 ♂SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)、白藜芦醇预处理组 ( Res+I/R),每组20只.采用线栓法阻断大脑中动脉血供90 min,拔出栓线造成局部脑区缺血/再灌注损伤.Res+I/R组缺血前1 h腹腔注射白藜芦醇(30 mg·kg-1).缺血/再灌注后第5天,TUNEL法原位标记海马CA1区凋亡的神经元细胞,免疫组化法检测海马CA1区PI3K、p-Akt及Caspase-3的表达.结果 TUNEL染色结果显示,与I/R组相比较,白藜芦醇预处理明显减少脑缺血/再灌注损伤所引起的大鼠海马CA1区神经元凋亡(P<0.05);免疫组织化学结果显示,与I/R组相比,白藜芦醇预处理使海马CA1区PI3K、p-Akt表达明显增多(P<0.05),Caspase-3表达明显减少(P<0.05).结论 缺血前1 h白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡具有保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关.
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骨代谢分子信号通路研究进展
骨代谢异常可引起骨质疏松、佩吉特症、骨硬化症、骨折等疾病;其病因复杂,机理不明.骨代谢过程包括骨形成及骨吸收,其具体的分子调节通路不明.现代研究表明,在骨代谢过程中至少存在WNT/β-连环蛋白通路、NFAT通路、胰岛素信号通路、Sema4D-Plexin-B1通路、PI3K-AKT通路及MAPK通路等.通过分子信号通路,可有效促进骨代谢研究,并开发具有治疗骨代谢异常疾病的新药.
