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中国彝族人群HLA-Cw位点基因多态性研究
目的应用DNA分型技术,分析中国彝族人群在HLA-Cw位点的等位基因分布频率,为进一步研究HLA-Cw与HIV感染及其发病进程的关联提供背景资料.方法设计合成26条特异性分型引物和1对内对照引物,组成24个PCR反应,建立PCR-SSP分型方法,对102例随机选取的无亲缘关系的中国彝族健康人作HLA-Cw基因分型.结果在彝族健康人群中共检测到HLA-Cw位点的12种等位基因,其中HLA-Cw*01、Cw*07和Cw*08为主要分布型别,基因频率分别为0.333 3、 0.250 0和0.176 5, 检出了HLA-Cw*12、Cw*130 1、Cw*14和 Cw*15等血清学方法不能鉴定的HLA-Cw基因;统计分析表明HLA-Cw位点的基因型分布符合Hardy-Weinburg平衡(χ2=65.983 1, df=66,P>0.05).结论证实了PCR-SSP法用于HLA-Cw基因分型的可靠性和适用性,在DNA水平上提供了中国彝族群体的HLA-Cw基因分布频率资料.
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HLA-A和HLA-B与HLA-DRB1基因低分辨相合的无关供/受者对HLA高分辨水平匹配性分析
位基因6/6相合的样本中,等位基因8/8相合及10/10相合的比例分别为63.2%(48/76)和57.9%(44/76);但其中1～2个HLA-Cw等位基因不相合的比例为36.8%(28/76),且主要为抗原水平不相合.结论 实现HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1的高分辨分型数据入库虽有助于提高无关供/受者对与HLA高分辨配型检索的成功率,但HLA-Cw抗原水平的不相合不能被忽视,建议将HLA-Cw基因分型纳入骨髓库骨髓志愿捐献者HLA入库数据的常规检测.
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HLA-Cw基因常规检测区外第1、5、6、7外显子核苷酸序列测定的研究及临床应用
目的 研究中国人群HLA-Cw基因第1、5、6、7外显子的分子遗传多态性,探讨增加第1、5 6 7外显子核苷酸序列测定在临床组织配型工作中的重要性及意义.方法 应用PCR-SBT法,对324份样本的HLA-Cw基因第2、3、4外显子作常规测序分型.对检出的模棱两可结果,设计HLACw第1、5 6 7外显子序列测序引物并优化测序反应条件,增加第1、5、6、7外显子核苷酸序列分析.结果 对HLA-Cw基冈第2、3、4外显子常规检测,一次性获得等位基因前4位数分型结果 的样本占23.8%(77/324);出现模棱两可结果的样本数占76.2%(247/324),检出的模棱两可等位基因组合有73种;增加HLA-Cw基因的第1、5、6、7外显子多态性检测,可解决Cw* 030201/030202、030301/0320N、Cw* 040101/0409N/0430、Cw* 070201/0750、Cw* 0403/0409N/0430和Cw* 080101/0822等10种常见的模棱两可等位基因组合.结论 在临床HLA-Cw基因配型中增加第1、5、6、7外显子多态性检测,有助于解决测序分型中的模棱两可的结果 和提高HLA-Cw基因分型精确度,对临床组织配型工作具有重要意义.
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一个罕见HLA-C等位基因间重组家系的遗传背景研究
目的 研究HLA-C等位基因座位上的交换重组,探讨HLA新等位基因产生的分子遗传背景.方法 采集拟进行造血干细胞移植的1例慢性粒细胞白血病患者、患者父母以及2名哥哥的静脉血,采用AlleleSEQR HLA 测序分型试剂进行HLA-A、C、B、DRB1和DQB1共5个位点的高分辨基因分型;再采用Protrans S4 HLA单倍体测序技术分离2个HLA-C等位基因,以确定序列异常的1个C等位基因;进一步采用分子克隆和测序方法进行患者及父母HLA-C等位基因的全长单倍体序列分析.按遗传规律分析该家系的HLA 5个位点的连锁单倍型,同时将HLA-C等位基因全长序列经IMGT/HLA Database中的"BLAST"程序进行序列的对比,以确定C等位基因重组发生的精确位置.结果 经HLA测序及遗传家系分析,该家系中父亲的2条HLA连锁单倍型分别为a:A*0207-C*010201-B*550201-DRB1*090102-DQB1*030302与b:A*240201-C*120202-B*5201-DRB1*1502-DQB1*0601;母亲的分别为:c:A*300101-C*060201-B*130201-DRB1*0405-DQB1*0401与d:A*110101-C*070201-B*4001-DRB1*080302-DQB1*0601.患者的2名哥哥均分别正常遗传了父母的2条单倍体a、d及b、c.患者的2条单倍体分别为母源单倍体c及父源重组单倍体a/b,其中A*240201来自父亲的1条染色单体b,而B*550201-DRB1*090102-DQB1*030302则来自父亲的另1条染色单体a.对比患者携带的C未知新等位基因与父亲的1对C*010201 、C*120202等位基因的全长单倍体序列,推断父亲的2条染色单体在减数分裂时,由于HLA-C等位基因的第273位至330位碱基区域之间发生了交换,重组后形成新的C等位基因及单倍型并遗传给了患者.该C新等位基因的全长序列已递交GenBank,并被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为C*0121.结论 本研究发现了1个罕见的中国汉族人群HLA-C基因座位上的基因重组家系,阐明了HLA-C*0121新等位基因及单倍型的产生来源,为更深入研究基因重组及HLA多态性形成机制提供了理论依据.
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自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体在脐带血移植治疗白血病中的作用
目的 探讨自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)在脐带血移植中的作用.方法 总结23例脐带血移植治疗白血病病例,应用序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)基因分型方法,检测患者外周血和脐带血的人类白细胞抗原(HLA)-C等位基因分型和KIR基因分型,随访其植活率和长期生存率,分析KIR对脐带血移植的影响和产生的作用.结果 通过检测发现KIR基因在23位供者中的表达呈现多态性.在17例髓性白血病组中,如果供受双方KIR抑制性受体与其配体HLA-C不匹配,其植活率和长期生存率高于匹配组(64% vs 50%,73% vs 50%),且复发率降低(9% vs 16%).如果患者HLA-Cw1或HLA-Cw2亚群缺失,其移植后的植活率和长期生存率长于HLA-Cw1/Cw2双表达组(65% vs 50%,70% vs 50%).HLA-Cw8(+)对于预后的影响与不含Cw8组并无明显区别.KIR2DL2与KIR2DS2呈连锁表达,供者中其双表达共4例移植病例全部长期无病生存.结论 KIR及其配体HLA-C对脐带血移植治疗白血病起到重要作用.供受双方KIR/HLA-C不匹配组,患者HLA-Cw1或HLA-Cw2亚群缺失组,供者KIR2DL2与KIR2DS2双表达组提示预后好.
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内质网氨基肽酶1在银屑病发病中的作用
银屑病是一种慢性炎症性皮肤病,其发病机制尚不清楚,可能涉及遗传、环境及自身免疫等多方面因素.近年来,随着全基因组关联研究的进展,众多银屑病易感位点陆续被发现,内质网氨基肽酶1基因便是其中之一.几乎所有种族人群的研究均表明,内质网氨基肽酶1区域的许多单核苷酸多肽性与银屑病相关,且与HLA-C之间可能存在交互作用.内质网氨基肽酶1参与人白细胞抗原Ⅰ类分子翻译后的加工,并与多种细胞膜表面受体的分裂有关.内质网氨基肽酶1还参与免疫调节,尤其与CD8+T细胞的活化有关,与其他炎性细胞和细胞因子共同作用,诱发或维持银屑病的皮损.
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寻常型银屑病与HLA-C第73位密码子相关性的研究
目的探讨寻常型银屑病与人类白细胞抗原(HLA)复合体C基因座位第73位氨基酸密码子的相关性。方法采用聚合酶链反应—变性聚丙烯酰胺凝胶电泳—DNA银染、测序，检测了104例寻常型银屑病患者和110例健康对照者的HLA-C基因第73位氨基酸密码子。结果寻常型银屑病患者编码HLA-C抗原第73位的丙氨酸序列、苏氨酸序列的频率与健康对照组差异有显著性，在有、无家族史的寻常型银屑病患者中差异亦有显著性。结论HLA-C第73位密码子与寻常型银屑病发病存在相关性；HLAC的第73位丙氨酸序列可能是该病的易感因素，而第73位苏氨酸序列似乎是该病的保护性因素。
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白血病患者与非亲缘造血干细胞供者的HLA-Cw基因高分辨分型
目的 对白血病患者与非亲缘造血干细胞供者进行HLA-Cw基因高分辨分型,探讨供、受者的相合几率.方法 用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)联合序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法进行HLA高分辨分型,依据分型结果将78例白血病患者与来自中国造血干细胞捐献者资料库中的126名供者进行配对,选择配合佳者.结果 21例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中,HLA-Cw高分辨分型的常见基因型为Cw*0102、Cw*0304、Cw*0302、Cw*0702和Cw*0801,其表型频率分别为0.57、0.33、0.19、0.14和0.14;ALL患者的Cw*0102和Cw*0304的表型频率明显高于捐献者(P＜0.05);7例患者(33.3%,7/21)的10个等位基因与捐献者全相合,HLA-Cw全相合常见的基因亚位点依次为Cw*0102(4/7)、Cw*0702(2/7).34例慢性粒细胞白血病(CML)患者中,HLA-Cw高分辨分型的常见基因型为Cw*0702、Cw*0102、Cw*0304、Cw*0801、Cw*0401和Cw*0303,其表型频率分别为0.44、0.38、0.21、0.18、0.15和0.12;与捐献者相比,CML患者各基因型的表型频率的差异均无统计学意义;8例患者(23.5%,8/34)的10个等位基因与捐献者全相合,HLA-Cw全相合常见的基因亚位点依次为Cw*0702(5/8)、Cw*0304(3/8).23例急性髓系白血病(AML)患者中,4例的10个等位基因与捐献者全相合,其原发病均为AML-M2型.结论 ALL患者和捐献者的Cw*0102和Cw*0304基因表型频率较高,有利ALL患者寻找到HLA-Cw相合的供者.
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母体KIR与胎儿HLA-C基因的组合形式对子痫前期发病的影响
[目的]探索子宫蜕膜自然杀伤细胞(uNk细胞)免疫球蛋白受体基因(KIR基因)人类白细胞抗原C类分子基因(HLA-C基因) 的结合对妊娠期高血压疾病发病的影响.[方法]30例早发型重度子痫前期孕妇及其胎儿作为观察组,20例正常健康孕妇及其胎儿作为对照组,孕妇抽取静脉血进行KIR基因分型,胎儿在出生时抽取脐静脉血进行HLA-C基因分型.[结果]两组HLA-C2的百分率相比差异无显著性(χ2＝0.67,P>0.05).子痫前期组母体KIR基因AA型的有14例,对照组母体AA型有3例,子痫前期组有更多孕妇的KIR基因为AA型,差异有显著性(χ2＝5.31,P<0.05 ).在子痫前期组,胎儿为HLA-C2型基因共 16 例,有11 例母体KIR基因型为AA型,胎儿为HLA-C1共14 例,有 3例母体KIR基因型为AA型,在对照组,胎儿为HLA-C2基因型共 13 例,有3 例母体KIR基因型为AA型,比较发现,子痫前期组中,胎儿为HLA-C2基因型时,有更多的母体KIR基因型为AA型,差异有显著性(确切概率P值=0.0109).子痫前期组与对照组比较,子痫前期组有更多的母体KIR为AA基因型与胎儿HLA-C为C2基因型的结合形式(确切概率P =0.0161 ).[结论]母体KIR基因为AA型,所生胎儿HLA-C基因为C2型时,子痫前期发病的风险增加.
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运用全长序列鉴定HLA-C罕见基因的实验研究
目的 检测与分析2例骨髓志愿捐献者携带的罕见等位基因.方法 用快速DNA提取试剂盒从全血样本中提取基因组DNA,经HLA-C基因商品化测序分型试剂盒扩增,纯化后的扩增产物作为模板用试剂盒配套的第2、3、4外显子正反向测序引物及自行研制的第5外显子正反向、第6外显子正向和第7外显子反向测序引物进行测序,结果导入Assign-SBT 3.5.1.45软件分析,并用PCR序列特异性引物技术(SSP)对标本进行确认.结果 分型结果显示其中一例为HLA-C* 07:63,另一例为HLA-C* 01:24.结论 临床移植配型遇罕见基因时应测定全长序列以提高分型结果的准确性,此两例罕见等位基因为中华骨髓库建立HLA高分辨数据库提供了有效依据.
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贵州省布依族和苗族HLA-C基因rs3130542位点多态性研究
目的:研究HLA-C基因rs3130542位点在贵州省布依族和苗族人群中的分布特征,探讨该位点在不同群体间的分布差异.方法:应用TaqMan-MGB探针基因分型方法,检测贵州布依族(289例)和苗族(174例)群体HLA-C基因rs3130542 SNP多态位点的基因频率及基因型频率,比较同一性别不同民族及同一民族不同性别人群间HLA-C基因rs3130542 SNP多态位点的基因频率及基因型频率,并与人类基因组计划网站公布的中国北京人群、日本人群、欧洲人群及非洲人群的分布特点进行比对.结果:布依族和苗族群体比较HLA-C基因rs3130542位点等位基因频率和基因型频率差异有统计学意义(P＜0.05),同一民族群体不同性别之间比较HLA-C基因rs3130542位点多态性分布差异均无统计学意义(P＞0.05);与人类基因组计划网站公布的其他人群相比,贵州苗族布依族人群HLA-C基因rs3130542位点的基因型频率与中国北京人群间差异有统计学意义(P＜0.05),等位基因和基因型频率与日本人群间差异均有统计学意义(P＜0.05),但与欧洲人群间差异无统计学意义(P＞0.05),等位基因频率与非洲人群间差异有统计学意义(P＜0.01).结论:HLA-C基因rs3130542位点在不同地域、不同民族或种族之间分布存在一定的差异;但在贵州省苗族和布依族同一民族男女性别中的分布差异无统计学意义.
