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脐血复温后细胞输入剂量对植入的预测作用分析
本研究探讨非血缘供者脐带血移植(unrelated cord blood transplantation,UCBT)中复温后供者细胞输入剂量对植入和造血重建的预测作用.回顾性分析1999年8月至2010年4月间接受单份UCBT的97例儿童恶性及非恶性疾病患者的临床资料,比较冷冻前和复温后检测的总有核细胞(total nucleated cells,TNC)、CD34+细胞及粒-巨噬细胞集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM)的输入剂量对受者的植入及造血重建速度的影响,供者脐带血均来自广州脐血库.结果表明,冷冻前TNC(/kg)(mean±SD:7.65×107±4.26×107;median:6.34×107)、CD34+细胞(/kg)(mean±SD:4.64×105±4.47×105;median:3.03×105)及CFU-GM(/kg)(mean±SD:0.79×105±1.09×105;median:0.57×105)与其对应的复温后TNC(/kg)(mean±SD:6.98×107±4.12×107;median:6.00×107)、CD34+(/kg)(mean±SD:6.86×105±8.56×105;median:4.17×105)、CFU-GM (/kg)(mean±SD:0.52×105±0.52×105;Median:0.39×105)均显著相关(r=0.952,p＜0.001;r=0.794,p＜0.001;r=0.478,p＜0.001).植入组(n=70)的冷冻前和复温后CFU-GM输入剂量均高于未植入组(n=22)(p=0.023;p=0.011),而二者的冷冻前和复温后的TNC、CD34+细胞输入量的差异无统计学意义.冷冻前TNC、CD34+细胞、CFU-GM输入剂量与受者的中性粒细胞植入时间呈负相关(r=-0.285,p=0.018;r=-0.396,p=0.002;r=-0.373,p=0.002),复温后TNC与CD34+细胞数亦与之呈负相关(r=-0.260,p=0.031;r=-0.483,p＜0.001),而只有冷冻前CD34+细胞数与血小板植入时间负相关(r=-0.352,p=0.013).结论:CFU-GM输入剂量对预测植入有一定帮助,而冷冻前和复温后的各项指标相比,前者与植入及造血重建速度的相关性更为密切,提示脐带血在提供搜寻或发放用于移植之前,完善相应的造血功能检测是非常必要的.
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海藻糖深低温保存外周血造血干细胞的可行性
背景:二甲基亚砜是目前造血干细胞深低温保存的经典保护剂,但其对细胞和患者均有一定的毒副作用.海藻糖是一种稳定的无毒副作用的非还原性双糖,已被广泛应用于红细胞、血小板和胚胎等的冷冻保存中.目的:探讨海藻糖作为低温保存造血干细胞保护剂的可行性.方法:外周血造血干细胞经重组人集落刺激因子动员后,用血细胞分离机采集连续单个核细胞,分为0.5 mol/L.海藻糖组、1.0 mol/L海藻糖组、对照组.采用程序降温法液氮保存,冻存7 d后取出,立即置于40℃水浴箱内复苏.锥虫蓝拒染法检测细胞存活率;采用甲基纤维索半固体培养体系进行集落培养,计数粒-巨噬细胞集落形成单位的回收率;采用CD34-PE/CD45-FITC双标法,流式细胞仪检测CD34~+细胞回收率.结果与结论:与对照组比较,0.5,1.0 mol/L海藻糖组细胞存活率、粒巨噬细胞集落形成单位回收率、CD34~+细胞回收率均明显升高(P<0.001),且0.5 mol/L海藻糖组升高幅度尤为显著(P<0.001或P<0.01).证实海藻糖对于短期内低温冻存的外周血造血干细胞有一定保护作用,浓度为0.5 mol/L的海藻糖保护冻存的造血干细胞效果较佳.
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Rituximab减少SLE患者B淋巴细胞对骨髓粒-巨噬细胞集落的抑制作用
目的:了解不同浓度Rituximab对SLE患者B淋巴细胞、对正常人及SLE患者骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位(GM-CFU)抑制作用的影响及其机制.方法:体外用终浓度为0.1、0.5、1、3、6、9 μg/ml的Rituximab与SLE患者B淋巴细胞共同加入SLE患者及正常人骨髓GM-CFU的培养体系中,观察它们对SLE患者及正常人骨髓GM-CFU形成的影响,用流式细胞仪检测经不同浓度Rituximab处理前后SLE患者B淋巴细胞上的CD20表达水平,逆转录PCR法检测与终浓度为9 μg/ml Rituximab共同孵育前后SLE患者B淋巴细胞的IL-10 mRNA与β-actin的比值.结果:加入终浓度为0.1、0.5、1、3、6、9 μg/ml的Rituximab和SLE患者B淋巴细胞后,正常人骨髓GM-CFU产率分别为180±37、200±54、226±45、248±71、251±56、258±66个/105细胞,与不加Rituximab和SLE患者B淋巴细胞的正常人骨髓GM-CFU产率(256±80个/105细胞)比较,前二组P＜0.05,后四组P＞0.05,与仅加入SLE患者B淋巴细胞的正常人骨髓GM-CFU产率(199±92个/105细胞)对比,前二组P＞0.05,后四组P＜0.05.加入以上6种相同浓度的Rituximab和SLE患者B淋巴细胞后,SLE患者骨髓GM-CFU产率分别为119±71、116±78、177±68、202±49、217±52、227±48个/105细胞,与不加Rituximab和SLE患者B淋巴细胞的SLE患者骨髓GM-CFU产率(182±50个/105细胞)对比,前二组P＜0.05,后四组P＞0.05,与仅加入SLE患者B淋巴细胞的SLE患者骨髓GM-CFU产率(131±86个/105细胞)对比,前二组P＞0.05,后四组P＜0.05.Rituximab处理前SLE患者B淋巴细胞CD20+表达水平为(92±21)%,经用以上6种浓度的Rituximab处理后SLE患者B淋巴细胞CD20+表达水平分别为(83±53)%、(81±0)%、(75±34)%、(62±16)%、(38±22)%、(15±10)%,与Rituximab处理前的比较,前二组P＞0.05,后四组P＜0.05.与终浓度为9 μg/ml的Rituximab共同孵育前SLE患者B淋巴细胞IL-10mRNA与β-actin比值为4.6±2.8,共同育3 h后SLE患者B淋巴细胞IL-10mRNA与β-actin比值为2.4±1.3,两者差别有显著性,P＜0.05.结论:Rituximab浓度在1 μg/ml以上时,可以减少SLE患者B淋巴细胞对SLE患者和正常人骨髓GM-CFU形成的抑制作用,Rituximab浓度越高,这种作用越明显,其机制与Rituximab减少SLE患者B淋巴细胞CD20、IL-10mRNA表达有关.
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BXSB狼疮鼠骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位异常与发病的关系
目的:研究BXSB自发性狼疮鼠骨髓粒-巨噬细胞系的增殖情况与狼疮发病的关系.方法:雄性BXSB小鼠按4、8、12、16及20周龄分组,每组6只,采用甲基纤维素半固体培养方法体外培养骨髓单个核细胞(BMMC),计数粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及小鼠外周血单核细胞(PBMC),并检测尿蛋白.相同周龄的C57BL小鼠作为正常对照组.结果:12周龄雄性BXSB小鼠尿蛋白(+),20周龄时尿蛋白(+++),4、8周龄BXSB小鼠及各周龄C57BL小鼠尿蛋白(-).8周龄雄性BXSB小鼠骨髓CFU-GM为(96.00±18.11)/2×105 BMMC,PBMC计数为(111.33±10.97)×106·L-1,均明显高于4周龄BXSB小鼠及正常C57BL小鼠(P＜0.05),随着周龄增加,CFU-GM和PBMC进一步增多.结论:BXSB小鼠粒-巨噬细胞系造血异常及外周血单核细胞增多参与了自身免疫疾病的发病过程.
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特发性血小板减少性紫癜骨髓造血干细胞的功能及与疗效的关系
目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者骨髓造血干细胞的增殖分化功能,并从巨核细胞集落形成单位的数量和血小板上升的幅度探讨两者之间的疗效关系.方法:用甲基纤维素半固体培养ITP患者粒-巨噬细胞集落形成单位、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位,观察巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值的关系.结果:ITP患者骨髓粒-巨噬细胞集落、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位集落数低于正常对照组,粒-巨噬细胞集落数及丛落数高于正常对照组,巨核细胞数大于5/高倍视野的ITP患者其巨核细胞数与血小板上升无关,巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值有关.结论:ITP患者骨髓造血干细胞增殖分化功能异常,提示ITP可能是造血干细胞异常的疾病.ITP的巨核细胞集落形成单位与血小板上升幅度有关,巨核细胞集落形成单位可以预测ITP的治疗效果.
