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P2Y2受体激动剂2-硫代-UTP及拮抗剂苏拉明对Hela细胞活性影响
目的 研究P2Y2受体激动剂2-硫代-UTP及其拮抗剂苏拉明对Hela细胞活性的影响,从而在细胞水平探究P2Y2受体在人子宫颈癌病理生理过程中的作用.方法 应用CCK-8法检测不同时间点各处理组Hela细胞的活性;ELISA法分别检测细胞上清液中TNF-α和IL-6的水平;qPCR和Western blot法分别检测细胞P2Y2mRNA和蛋白的表达变化.结果 2-硫代-UTP可明显提高Hela细胞的增殖能力.且经2-硫代-UTP处理后的细胞IL-6的水平明显增加,P2Y2mRNA和蛋白表达水平均有所提高;苏拉明可明显抑制Hela细胞增殖,经其处理后的细胞TNF-α水平有所提高,P2Y2mRNA和蛋白表达水平无明显变化.结论2-硫代-UTP可通过激活P2Y2受体的活化细胞,引起细胞过表达P2Y2受体,从而促进Hela细胞增殖.苏拉明可通过阻断P2Y2受体及其下游活动,抑制Hela细胞增殖.以上结果表明,P2Y2受体可能成为治疗子宫颈癌等疾病的新靶点,这将为探索子宫颈癌新型治疗手段等方面提供新思路.
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P2Y及P2Y2受体的研究进展
嘌呤P2受体家族是比较复杂的受体家族之一,可分为门控离子通道P2X受体和G蛋白偶联P2Y受体,目前已有7种P2X受体和8种P2Y受体被克隆.随着分子生物技术的发展,P2Y受体的研究取得了明显的进展,P2Y受体在体内分布广泛,功能复杂,迄今为止已从人体组织细胞克隆出的P2Y受体分别为P2Y1、2、4、6、11、12、13、14.P2Y2受体作为P2Y受体的一个重要亚型,与诸多生理功能密切相关,日趋受到人们的重视.本文针对P2Y受体和P2Y2受体的分子结构特征、分类和生理功能等方面进行综述.
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慢性神经病理性痛大鼠背根神经节P2Y2受体mRNA的表达
目的 评价背根神经节(DRG)P2Y2受体mRNA的表达在大鼠慢性神经病理性痛中的作用.方法 SPF级大鼠24只,体重150～200 g,雌雄不拘,随机分为2组:假手术组(S组)和慢性神经痛组(N组),每组12只.N组结扎左侧坐骨神经建立大鼠慢性压迫性损伤(CCI)模型,S组只暴露,不结扎左侧坐骨神经.2组分别于CCI前1 d、CCI后1、4、7、10、14 d进行行为学观察,测定大鼠双后肢热痛阈和机械痛阈,并分别于CCI后7、14 d各取6只大鼠断颈处死,取双侧L4～6背根神经节,RT-PCR法测定P2Y2受体mRNA的表达.结果 两组CCI后4 d热痛阈、机械痛阈明显降低(P＜0.05),持续至CCI后14 d;N组左侧DRG P2Y2受体mRNA表达较右侧明显下调,CCI后14 d较CCI后7 d下调(P＜0.05);与S组右侧比较,N组DRG P2Y2受体mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 背根神经节P2Y2受体mRNA的表达下调参与了大鼠慢性神经病理性痛的形成.
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P2Y2受体在人涎腺及腺样囊性癌中的表达
[目的]探讨P2Y2受体在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)中表达的临床意义.[方法]应用免疫组织化学方法检测P2Y2受体在49例SACC和肿瘤周边涎腺组织中的表达及分布,利用显微镜图像分析技术测定P2Y2受体表达的平均灰度值,统计学分析两组该受体表达量的差异.[结果]SACC中P2Y2受体表达的平均灰度值为12.73±7.59,显著高于肿瘤周边涎腺组织的3.76±1.82(P<0.05).SACC实性型的表达平均灰度值高于腺样一管状型,Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期,神经侵袭型高于非神经侵袭型,以上分组中两组间差异均具有统计学意义.[结论]SACC中P2Y2受体表达与肿瘤的恶性程度呈正相关性.
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电针深刺对三叉神经痛大鼠三叉神经节中P2Y2受体及Kv3.4表达的影响
目的 探讨电针深刺法对三叉神经痛(TN)大鼠三叉神经节中P2Y2受体及Kv3.4表达情况的影响,进而阐明此法镇痛机制.方法 将30只SD大鼠(成年健康雄性)随机分成假手术组、模型组、电针组,各10只.制备大鼠三叉神经痛模型(眶下神经慢性缩窄环术法).3组均用细丝法检测大鼠痛阈,分别于14、28 d后检测痛阈并进行组间比较;3组均采用Western blot方法检测大鼠神经节(TG)神经元中P2Y2受体表达情况,并进行组间比较;3组均采用实时定量PCR技术检测大鼠神经节中Kv3.4 mRNA表达情况,并进行组间比较.结果 电针深刺法治疗后三叉神经痛大鼠痛阈显著提高(P<0.05),TG中P2Y2受体的表达显著下降、Kv3.4mRNA表达显著增加,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 此法可以通过降低P2Y2受体表达同时增加Kv3.4 mRNA表达,抑制神经元兴奋性而起到镇痛作用.
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核苷酸和P2Y2受体与伤害性感受的研究进展
P2受体为以ATP、UTP及其类似物激活的受体,分为促离子型P2X受体和促代谢型P2Y受体两大类,其各自又分为许多亚型.许多证据显示,P2Y,特别是P2Y2受体,在痛觉信息调节和痛觉过敏中起着重要作用.ATP和UTP作为P2Y2受体的天然激动剂,是伤害性感受和痛觉过敏信息传递中的重要介质.P2Y2受体参与疼痛的调节可能与辣椒素受体有关.膜片钳分析小鼠背根神经节神经元证明了是P2Y2而非P2Y1受体在ATP诱发的TRPV1介导的热痛过敏反应中起作用.原位杂交组织化学研究结果也显示大鼠腰段脊髓背根神经节中TRPV1 mRNA与P2Y2 mRNA共同表达.这些证据证明了促代谢型P2Y2受体介导背根神经节神经元中核苷酸对VR1的增敏效应及参与伤害性感受的调节.
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治疗囊性纤维化的药物Denufosol Tetrasodium
嘌呤受体亚型P2Y2激动剂denufosol 四钠盐(INS-37217)是由Inspire制药公司开发的囊性纤维化(CF)治疗药物,与P2Y2受体的天然配体尿苷三磷酸(UTP)具有相似的药理作用,能增加氯和水的分泌,纤毛波动频率及黏蛋白的释放,还可增强体内黏液的转运.
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嘌呤受体亚型P2Y2在先天性巨结肠中的表达及意义
目的 研究HD患儿各段肠管中ATP受体亚型P2Y2的表达情况.初步探讨P2Y2受体表达与HD发生的关系.方法 随机选取2000至2008年在我院行手术治疗的HD患儿结肠标本共30例,将HD患儿正常段肠管设为对照组,移行段及痉挛段肠管设为实验组,应用免疫组化及RT-PCR法观察ATP受体P2Y亚型P2Y2在各肠段的表达情况.结果HD患儿正常段肠管的神经节细胞中有大量P2Y2阳性细胞的表达,而在痉挛段肠管中没有P2Y2阳性细胞的表达,移行段组织中可见P2Y2阳性细胞的表达,但其数量明显少于对照组,差别具有统计学意义(P<0.05).RT-PCR结果显示mRNA水平的表达与免疫组化一致.结论 HD患儿痉挛段肠管中ATP受体P2Y2的表达缺失,P2Y2的表达缺失可能与HD的发生有关.
关键词： Hirschsprung病 P2Y2受体 逆转录聚合酶链反应 -
吗啡精神依赖对大鼠消化道嘌呤受体亚型P2Y2mRNA表达的影响
目的 观察吗啡条件性位置偏爱(CPP)大鼠消化系统食管、胃、十二指肠P2Y2受体mRNA表达的变化,探讨阿片类精神依赖下消化系统异常的分子机制.方法 吗啡剂量递增法颈背部皮下注射建立大鼠吗啡CPP模型(模型组),生理盐水对照组则予注射生理盐水,其余处理同模型组.实时荧光定量PCR分别检测大鼠食管、胃、十二指肠P2Y2受体mRNA的表达水平,采用2-△△Ct方法进行比较分析.结果 与生理盐水对照组比较,模型组大鼠在白箱的停留时间明显延长(P＜0.01);食管、胃、十二指肠P2Y2受体mRNA表达水平下调,分别仅为生理盐水对照组的0.41、0.33和0.14倍.结论 P2Y2受体mRNA表达下调可能与吗啡精神依赖过程胃肠道功能的失调有关.
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P2Y2受体对支气管哮喘豚鼠α防御素表达的调控
目的 研究支气管哮喘豚鼠α防御素(RNP)的表达及P2Y2受体对其的影响.方法 72只成年雄性豚鼠随机分为正常组(A组)和哮喘组(B组),以腹腔内注射联合雾化吸入卵白蛋白(OVA)复制哮喘模型.将A组及B组分为生理盐水组(AL/B1组)、ATP干预组(A2/B2组)、苏拉明干预组(A3/B3组),分别对豚鼠腹腔内注射生理盐水、ATP及苏拉明.检测豚鼠气道外周阻力(RL)、肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及中性粒细胞(PMN)计数；HE染色显示炎性细胞浸润情况；ELISA法检测血浆RNP和白细胞介素8(IL-8)表达含量；免疫组化和RT-PCR方法检测肺组织中RNP蛋白和mRNA以及P2Y2 mRNA的表达情况.结果 哮喘组及其干预组豚鼠RL上升幅度较A组及其干预组增加10％ (P ＜0.05).HE染色证实哮喘组豚鼠支气管管腔变窄,炎性细胞浸润.B1组BALF中细胞总数及PMN计数高于A1组和B3组,低于B2组(P＜0.05)；A组间比较,差异无统计学意义.B1组血浆和肺组织中RNP表达较A1组和B3组增高,较B2组表达减低(P＜0.05)；A1组较A2组表达减低,与A3组比较增高(P＜0.05).B1组血浆中IL-8表达较A1组和B3组增高,较B2组减低(P＜0.05)；A组及其干预组比较,无明显差别(P＞0.05).RNP主要表达于细支气管中,尤其PMN浸润部位.RNP mRNA表达结果与肺组织中RNP表达趋势一致.A1组P2Y2 mRNA较A2组表达降低,与A3组比较增高(P＜0.05)；B1组P2Y2mRNA表达较B2组降低,与B3组比较增高(P＜0.05).直线相关分析显示A组及其干预组RNP与PMN、IL-8无明显相关性,RNP与P2Y2mRNA呈正相关；B组及其干预组RNP与PMN、IL-8、P2Y2 mRNA呈正相关.结论 α防御素在支气管哮喘豚鼠中表达增高；豚鼠α防御素表达可能与P2Y2受体有关.
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大鼠嘌呤P2Y2受体在神经系统分布的实验研究
目的探讨P2Y2受体在脊髓、背根神经节和坐骨神经的表达和具体分布,研究三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)对神经再生的作用机制提供理论基础. 方法将6只SD乳鼠的脊髓、背根神经节和坐骨神经标本置于含有0.1%二乙基焦碳酸的4%多聚甲醛液中快速固定、石蜡包埋、超薄切片.实验组:根据P2Y2受体mRNA的碱基序列,制作非放射性标记的核苷酸探针,原位杂交后将切片置于含有NBT溶液(50 mg/ml硝基兰四唑溶于二甲基甲酰胺)、BCIP溶液(75 mg/ml溴-绿-吲哚磷酸溶于二甲基酰胺)的检测缓冲液中染色,镜下观察P2Y2受体的具体分布.对照组:切片用不含探针的杂交缓冲液覆盖、染色观察. 结果实验组:脊髓灰质前角神经元胞浆中可见P2Y2受体的表达,呈弱阳性;背根神经节雪旺细胞的胞浆和胞核中均可见P2Y2受体的表达,且呈强阳性;对照组:无P2Y2受体表达.实验组与对照组坐骨神经原位杂交无P2Y2受体的表达. 结论 P2Y2受体主要分布在脊髓、背根神经节,细胞外ATP可以通过P2Y2受体作用于脊髓和背根神经节细胞.
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吗啡依赖小鼠十二指肠P2Y2受体表达及其对十二指肠碳酸氢盐分泌的影响
目的 研究吗啡依赖小鼠十二指肠嘌呤受体P2Y2表达及其对碳酸氢盐分泌的影响.方法 小鼠吗啡6 mg/kg颈背部皮下注射,每日1次,连续8 d,建立小鼠吗啡条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)模型.确认模型建立成功后处死取十二指肠(10只),Western-blot技术检测其P2Y2受体蛋白的表达;选取十二指肠(8只),剥离浆膜后装载于Ussing Chamber上,经ATP和Surmain+ ATP分别刺激后,用 pH-stat技术测定十二指肠碳酸氢盐的分泌量.结果 CPP模型组小鼠嘌呤受体P2Y2蛋白(0.6267 ±0.0463)在十二指肠中较生理盐水对照组(1.0870 ±0.0549)的表达明显降低(P =0.036 0,*p＜0.05);用P2Y2受体特异性激动剂ATP刺激后,CPP模型组小鼠的碳酸根离子分泌(0.426 7 ±0.060 6)明显低于生理盐水对照组(0.726 7 ±0.038 4) (P=0.045 0,*P＜0.05),Suramin能显著抑制ATP刺激生理盐水对照组(0.216 7 ±0.020 3)和模型组(0.196 7 ±0.008 8)的碳酸氢盐分泌.结论 在吗啡依赖状态下,十二指肠嘌呤受体P2Y2蛋白的表达水平下调,并由此可介导十二指肠碳酸氢盐分泌的减少,这可能是阿片类依赖者胃肠功能失调的一个重要原因.
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高浓度葡萄糖对体外培养大鼠Müller细胞P2Y2受体的影响
目的:观察高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠视网膜Müller细胞P2Y2受体表达的影响.方法:用改进的酶消化法纯化培养并用胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和谷氨酰胺合成酶(GS)鉴定大鼠Müller细胞.分别在对照组(5.5mmol/L)与高糖组(10,25,50mmol/L)中孵育24h和72h,通过免疫荧光及荧光强度半定量分析检测Müller细胞中P2Y2受体表达的变化.结果:纯化培养到第3～4代的Müller细胞,经鉴定纯度大于90%,表达GFAP和GS.在24h,10,25,50mmol/L组的荧光强度分别为31.05±7.06,59.17±11.42和84.11±12.72,与对照组(26.60±5.15)相比较均明显增高(P<0.01).而在72h,仅25和50mmol/L组的荧光强度明显强于对照组(P<0.01).结论:高浓度葡萄糖上调大鼠视网膜Müller细胞P2Y2受体的表达,提示这一受体可能参与糖尿病视网膜病变过程.
