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精液源性病毒感染增强因子SEVI-HIV性传播中的重要因素
精液源性病毒增强因子(Semen-derived enhancer of viral infection,SEVI)是前列腺酸性磷酸酶(Prostatic acid phosphatase,PAP)位于PAP248-286的多肽片段,可增强人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)的感染性.SEVI促进HIV感染的作用机制包括:①富含阳离子氨基酸残基的SEVI能通过静电作用降低HIV病毒颗粒与靶细胞之间的静电排斥；②SEVI在人体液中呈无序状态,利于病毒与靶细胞膜相互作用；③SEVI直接捕获HIV颗粒,提高病毒在靶细胞表面沉降速度,促进病毒与靶细胞的吸附和融合.目前已发现能抑制SEVI活性的物质包括:绿茶来源的EGCG(没食子儿茶素没食子酸酯)、氨基喹啉类小分子化合物Surfen、ThT类似物BTAEG6等,能通过阻断HIV与SEVI结合或阻止其淀粉样纤维的形成,降低SEVI的病毒感染增强作用.研究SEVI的生物学特性及作用机制对防治HIV感染具有较为重要的指导意义.
关键词： 精液源性病毒增强因子 HIV性传播 淀粉样纤维 静电斥力 -
家族性淀粉样变性多发神经病家系的产前基因诊断一例并文献复习
家族性淀粉样变性多发神经病( familial amyloid polyneuropathy,FAP)是以细胞外特异性淀粉样物质聚集、主要累及外周神经和白主神经系统为特征的常染色体显性遗传性神经系统疾病[1],是具有广泛种族分部的家族性综合征.FAP的临床症状多样,主要表现为进行性的周围运动神经和感觉神经障碍,以及自主神经功能异常,可出现肾病综合征、充血性心功能衰竭、心律失常等,多种症状可单独或合并出现,患者往往因心、肾损害而死亡.FAP的致病基因为转甲状腺素蛋白(transthyretin,TTR)基因[2],位于染色体18q12.1,约7 kb,含有4个外显子.TTR负责转运甲状腺素和视黄醇,但基因发生突变时该蛋白的四聚体裂解为单体,形成淀粉样纤维,并在多种组织聚积而导致发病.目前,无有效消除淀粉样物质沉积的方法,主要以对症治疗来推迟靶器官的功能衰竭[3],但通过基因检测可以尽早识别症状出现前的患者,对于该病的防治具有重要意义.本研究对来自已明确诊断为TTR基因杂合突变的FAP家系[4]的第三代患者的子代进行产前基因诊断,为其提供遗传咨询及发病风险评估.
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纤维样肾小球病一例报道及文献复习
目的 通过对一例纤维样肾小球病(fibrillary glomerulopathy,FGP)患者的临床和病理资料进行分析,探讨其发病机制、临床表现、诊断、治疗及预后.方法 回顾性分析一例纤维样肾小球病患者的临床表现,并将患者肾穿刺组织进行光镜、免疫荧光、电镜检查,通过以上数据,并结合相关文献系统复习纤维样肾小球病的临床特征.结果 通过其临床表现,肾组织病理学检查,特别是电镜诊断本例为纤维样肾小球病.临床表现多为大量蛋白尿、镜下血尿和高血压等.电镜的检查结果是诊断纤维样肾小球病的主要依据.其主要特点是纤维样物质呈弥漫性或团块状分布于肾小球系膜区和(或)肾小球基底膜,排列紊乱,无规律,纤维僵直,一般无分支.该病预后差,大约50％的患者2～4年内进展为终末期肾脏疾病.结论 电镜结合刚果红染色是诊断纤维样肾小球病的重要方法,该病发病率较低,病理生理机制仍不清楚,预后不佳,目前缺乏较为有效的治疗措施.
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PSB0739抑制精液来源的淀粉样纤维形成
目的 探究PSB0739对精液来源的淀粉样纤维形成的抑制作用.方法 440μmol/L的PAP248-286多肽分别与不同浓度的化合物孵育,在不同时间点分别取样,用刚果红染色法、透射电子显微镜法检测药物对淀粉样纤维形成的影响;通过病毒感染实验分析在PSB0739作用下,精液淀粉样纤维促进病毒感染的能力;利用Zeta电势仪检测PSB0739对成熟的精液来源性淀粉样纤维表面电荷的影响;MTT法检测PSB0739对Hela细胞的毒性作用,以评价磺酸类化合物PSB073的体外安全性;体外细胞病毒感染实验检测PSB0739抗HIV-1的活性.结果 PSB0739在体外能有效抑制精液淀粉样纤维的形成,在48 h内,220μmol/L的PSB0739能抑制440μmol/L的PAP248-286形成淀粉样纤维SEVI;透射电子显微镜可以直接观察到220μmol/L的PSB0739就能有效抑制PAP248-286形成的淀粉样纤维;PSB0739能拮抗SEVI介导的增强病毒感染的作用;体外220μmol/L的PSB0739能逆转SEVI携带的正电荷,差异均有统计学意义(P<0.05).浓度低于62.5μmol/L时PSB0739对宫颈癌Hela细胞无明显毒性作用,细胞存活率无统计学意义(P>0.05);PSB0739能直接抑制HIV的能力与浓度正相关,PSB0739具有抗HIV作用,其IC50为21.77±5.15μmol/L.结论 PSB0739能抑制精液来源的淀粉样纤维的形成.
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乳酸抑制精液来源淀粉样纤维的形成
目的 探究乳酸对精液来源的淀粉样纤维形成的抑制作用.方法 2 mg/mL的PAP248-286多肽与不同浓度乳酸(4、2、1、0.5、0.25、0.125 mg/mL)分别孵育,在不同时间点取样,用硫磺素T和刚果红染色法分别检测淀粉样纤维形成的过程;采用圆二色谱法检测乳酸对PAP248-286形成β-片层结构的影响;采用透射电子显微镜观察乳酸对淀粉样纤维形态的影响;用病毒感染实验,检测与乳酸孵育的不同时间点,精液淀粉样纤维促进病毒感染的能力;将2 mg/mL的PAP248-286多肽与不同浓度的健康女性阴道分泌液孵育后,用硫磺素T和刚果红染色法评价阴道分泌液抑制精液淀粉样纤维形成的作用.结果 乳酸体外能浓度依赖性地抑制精液淀粉样纤维的形成,在48 h内,0.5 mg/mL乳酸能够抑制2 mg/mL的淀粉样纤维SEVI的形成;在48 h内,1 mg/mL的乳酸能抑制精液淀粉样纤维(2 mg/mL)的β-片层结构的形成,透射电子显微镜观察到1 mg/mL的乳酸能完全抑制2 mg/mL PAP248-286聚合形成淀粉样纤维;与乳酸孵育的多肽PAP248-286,失去了促进病毒感染的能力;阴道分泌液浓度依赖性地抑制SEVI的形成,48 h内,2 mg/mL的PAP248-286在67%阴道分泌液存在时几乎无SEVI生成.结论 乳酸能抑制精液来源的淀粉样纤维的形成.
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成熟中性粒细胞中淀粉样变纤维成分的检测
目的：先前报道红细胞中存在淀粉样纤维，本文进一步探讨成熟中性粒细胞是否存在淀粉样变纤维，为解析阿尔茨海默病（AD）淀粉样变形成分子机制提供科学依据。方法：收集AD患者以及对照人群各30例，利用希森美康X5-500i血液分析仪测定血液白细胞、红细胞、血红蛋白水平以及中性粒细胞绝对值等4项指标，采集静脉EDTA-K2抗凝血分离中性粒细胞，分别测定中性粒细胞与淀粉样变特异探针之间亲和性，血浆部分用硫磺素T（ThT）检测淀粉样变荧光强度。结果：亲和试验结果显示淀粉样变荧光探针（ThT）能够与组织淀粉样变纤维特异性结合，中性粒细胞中淀粉样变纤维染色也呈现阳性反应。 AD组与健康对照组间血细胞白细胞、红细胞、血红蛋白水平以及中性粒细胞绝对值比较差异无统计学意义（P＞0．05），但是血浆淀粉样变荧光强度显著高于对照组（P ＜0．05）。结论：报道成熟中性粒细胞发现淀粉样变纤维，且AD患者血浆淀粉样变纤维水平显著增高。
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人工设计GAV-6短肽自组装形成淀粉样纤维的研究
淀粉样纤维是一类与人类疾病密切相关的蛋白异常聚集体,从一些核心短肽序列入手研究天然蛋白形成淀粉样纤维的分子机制是近年来的研究热点.本文设计了一个由甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、缬氨酸(V)三种疏水性氨基酸构成的六肽GGAAVV(GAV-6),并研究其形成淀粉样纤维的能力.以原子力显微镜(AFM)和动态光散射(DLS)为手段的纳米结构表征发现,GAV-6能够在水溶液中自组装形成光滑不分叉的纳米纤维.通过刚果红染色/结合实验和硫磺素T结合实验,我们证实了这些纳米纤维具有典型的淀粉样纤维的特征.上述结果表明,人工设计的GAV-6短肽能够自组装形成淀粉样纤维,这可能为今后深入研究天然蛋白形成淀粉样纤维的机制提供一种简单的模式分子.
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氨基酸对胰岛素纤维形成及细胞毒性的影响
目的:研究氨基酸对牛胰岛素淀粉样纤维的生成、形态和细胞毒性的影响.方法:采用硫黄素(ThT)荧光检测牛胰岛素形成淀粉样纤维的动力学曲线,透射电镜观察纤维形态;以淀粉样纤维诱导人红细胞的聚集和溶血为指标评估纤维对细胞膜的损害作用.结果:牛胰岛素在pH 1.6,57℃的条件下,可在1.5 h开始形成淀粉样纤维,5种氨基酸即组氨酸(His)、脯氨酸(Pro)、苏氨酸(Thr)、谷氨酰胺(Gln)和精氨酸(Arg)具有延迟胰岛素纤维化的作用,同时改变了淀粉样纤维的形态. 胰岛素在形成淀粉样纤维后可在较低的浓度范围内诱导人红细胞溶血和聚集,该作用随着纤维的生长逐渐增强. 虽然在氨基酸作用下延迟生长的纤维具有不同的纤维形态,但并不能改变纤维对细胞膜的损害作用.结论:牛胰岛素在形成淀粉样纤维后具有破坏细胞膜结构的作用. 氨基酸可以抑制胰岛素的纤维化作用. 胰岛素纤维对红细胞膜的损害作用与其形态和生长动力学无关.
