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复方雷公藤外敷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠滑膜组织细胞因子及ERK通路的影响
目的 探讨复方雷公藤外敷治疗类风湿关节炎的可能作用机制.方法 30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和雷公藤外敷组,每组10只.除正常组外其余两组采用Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠模型,雷公藤外敷组于首次免疫后第14天起,大鼠双后肢给予复方雷公藤外敷剂0.50g/(kg·d)外敷,每天1次,连续28天,模型组、正常组不给予处理.每周测量各组大鼠后足体积,实验结束时检测血清及滑膜组织白细胞介素1β (IL-1 β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管肉皮生长因子(VEGF)和血管生成素1(Ang-1)含量以及滑膜组织细胞外信号调节激酶(ERK)通路蛋白表达,并进行关节病理检测. 结果 模型组大鼠后足体积、血清(除VEGF外)及滑膜组织各细胞因子水平较正常组明显升高,滑膜组织p-ERK1/2表达亦升高(P＜0.05或P＜0.01),关节病理切片显示可见大量炎症细胞浸润,关节软骨及关节面严重破坏,骨实质侵蚀,结构紊乱.而复方雷公藤外敷组大鼠血清IL-1β、TNF-α和Ang-1水平降低,滑膜组织中各细胞因子水平及mRNA表达下降,p-ERK1/2表达降低(P＜0.05或P＜0.01);病理显示复方雷公藤外敷有良好的抑制滑膜组织增殖、减少炎症细胞浸润、延缓骨与软骨破坏的效果. 结论 复方雷公藤外敷剂可能通过降低关节炎滑膜组织炎症细胞因子水平、减弱ERK通路活化,从而抑制滑膜组织增殖、减少滑膜中血管新生和血管翳形成.
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DNA甲基化与细胞外信号调节激酶通路在系统性红斑狼疮发病机制中的作用
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的发病机制尚不完全清楚,对SLE动物模型和人类疾病的研究表明表观遗传的缺陷起到明确的作用,特别是DNA甲基化在SLE的发病机制中尤为重要.
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ERK通路参与雌二醇减轻皮瓣缺血再灌注损伤的机制研究
目的 研究雌二醇对大鼠腹部轴型皮瓣缺血再灌注(I/R)损伤的影响,并探讨其与细胞外信号调节激酶(ERK)通路的关系,为雌二醇应用于临床治疗I/R损伤提供理论基础.方法 取健康雄性Wistar大鼠50只,随机分为对照组(Ⅰ组)、I/R组(Ⅱ组)、生理盐水组(Ⅲ组)、雌二醇组(Ⅳ组)及抑制剂组(Ⅴ组),每组10只.于大鼠左下腹切取3.0 cm×6.0 cm以腹壁浅动脉为蒂的轴型皮瓣,用无创显微血管夹夹闭腹壁浅动静脉,以形成大鼠腹部皮瓣I/R模型.术后2、4、6 d观察皮瓣变化情况,术后第七天测定皮瓣成活率.取皮瓣组织进行HE染色组织学观察,TUNEL染色检测细胞凋亡指数.Western blot检测皮瓣组织ERK、p-ERK、MKP-1蛋白表达水平.结果 Ⅳ组皮瓣成活率明显高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ组,Ⅴ组皮瓣成活率高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05);Ⅳ组ERK、p-ERK蛋白表达水平明显高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ组(P<0.05),而MKP-1蛋白表达水平明显低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ组(P<0.05);细胞凋亡指数Ⅰ和Ⅳ组较其他组明显低(P<0.05).结论 雌二醇可能通过抑制MKP-1介导ERK磷酸化表达变化,从而抑制细胞凋亡,使皮瓣I/R损伤减轻.
关键词： 雌二醇 外科皮瓣 缺血再灌注损伤 细胞凋亡 细胞外信号调节激酶通路 -
雌激素膜受体对良性乳腺结构不良性疾病痛觉过敏微环境的影响
目的 以雌激素膜受体、痛觉过敏微环境及其相互关系为靶点,探讨良性乳腺结构不良发生的可能机制.方法 选择2016年6月至12月经病理及彩超同时证实为良性乳腺结构不良的患者44例,光镜HE染色观察病理变化,Western blot方法检测雌激素核受体α(ERα)、雌激素膜受体(G蛋白偶联雌激素受体1,GPER1)、细胞外信号调节激酶(ERK)通路相关蛋白及痛觉过敏微环境中促炎因子的表达水平.结果 良性乳腺结构不良患者疼痛总发生率为63.64％,其中纤维瘤疼痛发生率为66.67％,纤维囊性变疼痛发生率为16.67％,合并两种及以上病变疼痛发生率为90.0％.纤维瘤与纤维囊性变的疼痛发生率比较有统计学差异(P ＜0.017),合并两种及以上病变与纤维囊性变的疼痛发生率比较有统计学差异(P ＜0.017),纤维瘤与合并两种及以上病变的疼痛发生率比较无统计学差异(P＞0.017).疼痛组ERK的表达高于无疼痛组(P＜0.05),其余炎症相关因子[白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、神经生长因子(NGF)]组间比较无统计学差异(P＞0.05).痛觉过敏微环境中,炎症因子IL-1β与TNF-α存在显著相关性(r=0.825,P=0.002),NGF与TNF-α有相关性(r=0.658,P=0.028).两组间ERα表达无统计学差异(P＞0.05).GPER1表达在疼痛组低于无疼痛组(P＜0.05).ERα/GPER1比值在疼痛组高于无疼痛组(P＜0.05).结论 良性乳腺结构不良患者疼痛的发生与病变性质相关.GPER1表达下调导致炎症抑制作用减弱、促炎微环境使外周致敏化是疼痛发生的重要机制.
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针刺对脑出血大鼠细胞外信号调节蛋白激酶通路影响的研究
目的：探讨针刺百会透曲鬓穴对脑出血大鼠细胞外信号调节蛋白激酶（ ERK）信号转导通路的影响。方法选取健康雄性Wistar大鼠192只，随机分为空白组、模型组、模型＋针刺组（简称针刺组）、激动剂组四组。空白组12只大鼠，模型组、针刺组、激动剂组各60只大鼠，制备脑出血模型。针刺组针刺患侧百会透曲鬓穴，运用Western blot的检测方法，观察不同时相点针刺百会透曲鬓穴对脑出血大鼠血肿周围脑组织p-ERK蛋白表达的影响。结果各造模组大鼠血肿周围脑组织的p-ERK阳性细胞表达至7 d时达高峰。在1 d、2 d、3 d、7 d，针刺组大鼠p-ERK表达[（0．19±0．04）、（0．23±0．07）、（0．24±0．05）、（0．25±0．06）]均明显高于模型组[（0．10±0．04）、（0．17±0．02）、（0．09±0．05）、（0．10±0．06），q＝11．45，均P＜0．01]；激动剂组p-ERK表达[（0.20±0．05）、（0．24±0．06）、（0．25±0．09）、（0．26±0．09）]也均明显高于模型组[（0．10±0．04）、（0．17±0．02）、（0.09±0．05）、（0．10±0．06），q＝10．07，均P＜0．01]；针刺组与激动剂组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论针刺百会透曲鬓穴能够激活ERK通路，增加p-ERK蛋白的表达，起到保护神经元细胞的作用。
关键词： 针刺 脑出血 细胞外信号调节激酶通路 大鼠 -
细胞外信号调节激酶通路对人动脉硬化平滑肌细胞增殖、表型标志蛋白及微小RNA-31表达水平的影响
目的 探讨阻断人动脉硬化平滑肌细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)通路,进一步明确ERK、微小RNA(miR)-31与血小板源性生长因子(PDGF)-BB介导的平滑肌增殖之间的调控关系.方法 收集下肢动脉硬化闭塞患者下肢截肢标本,用贴壁法原代培养平滑肌细胞.相同代数的第3～6代血管平滑肌细胞(VSMCs),加入PDGF-BB或PDGF-BB+ PD98059分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Transwell法、Western blot、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测VSMCs增殖、迁移能力、表型标志性蛋白表达以及miR-31表达水平.结果 经组织贴壁法成功培养出原代平滑肌细胞.PDGF-BB诱导动脉硬化细胞的增殖率上调102％ (P＜0.05)和迁移率上调246％ (P＜0.05),ERK阻断剂PD98059能阻滞PDGF-BB诱导的诱导作用,平滑肌细胞增殖抑制53％(P＜0.05)和迁移抑制19％ (P ＜0.05).与空白组比较PDGF-BB处理后,收缩表型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)含量下调38％ (P ＜0.05),增殖型蛋白骨桥蛋白(OPN)和miR-31含量分别上调116％ (P ＜0.05)和386％ (P ＜0.05).与PDGF-BB组比较,PD98059+PDGF-BB处理后,α-SMA含量显著上调41％ (P ＜0.05),增殖型蛋白OPN和miR-31含量分别下调33％ (P ＜0.05)和46％(P＜0.05).结论 阻断ERK通路可促进VSMCs由增殖型向收缩型转变,同时下调miR-31的表达水平,ERK-miR-31通路可能是调控人动脉硬化平滑肌细胞功能及表型的重要通路.
关键词： 动脉硬化 平滑肌细胞 细胞外信号调节激酶通路 微小RNA-31 表型转换 -
细胞外信号调节激酶通路对气道平滑肌的功能调节
细胞外信号调节激酶(ERK)通路是一种重要的细胞内信号转导通路,ERK是该通路的关键酶,气道平滑肌中有ERK1/2分布,ERK参与气道平滑肌表型改变、内膜下迁移、细胞的增殖与凋亡等多种功能.
关键词： 细胞外信号调节激酶通路 气道 平滑肌 -
细胞外信号调节激酶通路激活抑制δ氨基酮戊酸-光动力疗法对SW480细胞的细胞毒作用
目的:探讨δ氨基酮戊酸-光动力疗法(ALA-PDT)诱导SW480细胞后的细胞外信号调节激酶(ERK)通路以及阻断此通路对细胞毒作用的影响.方法:将SW480细胞分为空白对照组、激光照射组、ALA组、ALA-PDT组(又分为30、60、90min组)及PD98059组,Western蛋白印迹检测各组细胞MEK和ERK1/2蛋白产物及磷酸化蛋白产物的表达;用MTT比色法分别检测各组细胞在不同时间段的光密度值,计算各组细胞存活率.结果:ALA-PDT后SW480细胞的ERK通路激活;阻断ERK通路后ALA-PDT对SW480细胞的细胞毒作用增强.结论:ERK通路的激活对ALA-PDT后SW480细胞起着保护作用;不同水平阻断ERK通路,可能成为增强ALA-PDT杀伤结肠癌细胞的新靶点.
关键词： δ氨基酮戊酸 光动力疗法 SW480 细胞外信号调节激酶通路 -
ERK途径可能参与抗坏血酸诱导的神经干细胞向多巴胺能细胞分化
目的 探讨抗坏血酸(ascorbic acid,AA)诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元方向分化的作用并初步探索其机制.方法 从12.5 d胚胎大鼠中脑获得NSCs,培养扩增后分为对照组和分别加入1、10、50、100、200 μmol/L AA处理组,比较NSCs向多巴胺能神经元分化结果;采用免疫细胞化学对NSCs以及分化后神经元进行鉴定和检测,RT-PCR检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、多巴胺转运子(dopamine transporter,DAT)、SHH、Nurr1、Ptx3 mRNA表达;在AA诱导分化中加入ERK阻断剂PD98059,以探讨ERK通路在分化中的作用.结果 获得大量的神经球并且表达nestin强阳性;AA处理组比对照组表现出较强的多巴胺能分化,其中100 μmol/L AA诱导组表达TH和DAT阳性细胞数量比对照组明显增加(P＜0.05),增加30 ～ 50倍;AA诱导增加了Nurr1、TH、DAT、SHH mRNA的表达,ERK抑制剂PD98059能抑制AA诱导后Nurr1、TH、DAT mRNA的表达而不影响SHH mRNA表达(P＜0.05).结论 抗坏血酸能诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元,ERK途径可能是AA诱导过程中参与多巴胺能分化的途径之一,Nurr1基因可能参与到ERK途径中或者是其下游基因.
关键词： 神经干细胞 分化 促分裂原活化蛋白激酶 细胞外信号调节激酶通路 信号转导
