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健脾止动汤对Tourette综合征模型鼠纹状体多巴胺转运蛋白表达的影响
目的 研究健脾止动汤对多发性抽动症(Ts)模型鼠纹状体多巴胺转运蛋白(DAT)表达的影响.方法 32只雄性ICR小鼠分成4组,即空白组、模型组、泰必利组、健脾止动汤组.除空白组外,其余3组小鼠腹腔注射亚氨基二丙腈建立Ts小鼠模型.除空白组和模型组给予生理盐水外,其余2组分别灌胃给予相应药物.4周后采用博士德公司的小鼠DATmRNA原位杂交试剂盒检测小鼠脑组织DATmRNA的表达和分布.结果 Ts模型鼠表现出抽动症特征性的运动行为和刻板行为.模型组、泰必利组以及中药组小鼠纹状体部DATmRNA的表达[分别为(0.17 ±0.017),(0.20 ±0.021),(0.24±0.022)]分别比空白对照组(0.30 ±0.036)减少13％、10％和16％.结论 健脾止动汤治疗小儿多发性抽动症的作用可能是通过上调DAT基因表达,进而抑制多巴胺神经元功能亢进,达到抗抽动的效果.
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哌仑西平抑制豚鼠形觉剥夺性近视的视网膜机制
目的 观察哌仑西平对豚鼠形觉剥夺性近视的抑制效果,探讨其可能的作用机制.方法 1周龄豚鼠60只随机分为4组,每组15只,分别为正常对照组(Ⅰ组)、单纯遮盖组(Ⅱ组)、哌仑西平组(Ⅲ组)与氯化钠组(Ⅳ组)；各组右眼为观察眼,左眼为对照眼.6周后检测4组豚鼠双眼屈光度、眼轴长度,免疫组织化学法及 Western blot 检测视网膜多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)的表达水平,并进行统计分析.结果 Ⅱ,Ⅳ组观察眼相对屈光度及眼轴长度变化与Ⅰ组比较差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅲ组与Ⅰ组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；视网膜DAT阳性细胞数和DAT蛋白表达Ⅱ,Ⅳ组明显低于Ⅰ,Ⅲ组(P＜0.05),Ⅰ组与Ⅲ组,Ⅱ组与Ⅳ组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 哌仑西平能抑制豚鼠形觉剥夺性近视的发展,阻止近视视网膜DAT表达水平下降,推测哌仑西平可能通过影响视网膜多巴胺系统而抑制近视的发展.
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肌苷对Tourette综合征大鼠脑组织多巴胺D2受体和多巴胺转运蛋白的影响
目的 研究肌苷对Tourette综合征(TS)大鼠脑组织多巴胺D2受体(DRD2)和多巴胺转运蛋白(DAT)的影响,探讨肌苷治疗TS可能的作用机制.方法 将40只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(氟哌啶醇0.5 mg·kg-1)、联合用药组(氟哌啶醇0.25 mg·kg-1+肌苷320 mg·kg-1)、肌苷组(肌苷320 mg·kg-1),每组8只.采用亚氨基二丙腈(IDNP)腹腔注射法建立TS大鼠模型.氟哌啶醇和(或)肌苷给药28 d后通过大鼠刻板行为评分、酶联免疫吸附法、原位杂交法,研究肌苷对TS模型大鼠刻板行为、大鼠脑组织DRD2、DAT水平的影响以及DRD2 mRNA表达情况.结果 1.肌苷组大鼠刻板行为评分低于模型组(P<0.01),高于阳性对照组(P<0.01),与联合用药组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).2.DRD2阳性细胞广泛分布于大脑皮质、海马、纹状体等处,以模型组DRD2阳性细胞分布为密集.3.肌苷组DRD2水平低于模型组(P<0.01),高于阳性对照组和联合用药组(Pa<0.01),而与正常对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).4.肌苷组DAT水平高于正常对照组、模型组及阳性对照组(Pa<0.01),与联合用药组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 肌苷改善TS模型大鼠的刻板行为的作用机制可能是通过促进多巴胺释放和转运,起到类似于DRD2拮抗剂的作用.
关键词： 肌苷 Tourette综合征 多巴胺受体 多巴胺转运蛋白 大鼠 -
哌仑西平对豚鼠离焦性近视的作用及机制
目的 评价眼表应用M1受体桔抗剂哌仑西平对豚鼠离焦性近视(lens-induced myopia,LIM)的作用,并探讨其作用机制.方法 健康2周龄雄性豚鼠40只,随机分为4组:单纯遮盖组(Ⅰ组)、氯化钠组(Ⅱ组)、哌仑西平组(Ⅲ组)、正常对照组(Ⅳ组),各组各10只.Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组豚鼠均右眼配戴-10.0 D透镜,左眼开放;Ⅳ组豚鼠双眼不做任何处理.Ⅱ、Ⅲ组豚鼠的右眼每天2次分别滴生理盐水溶液和30 g·L-1复方哌仑西平眼液.4周后检测4组豚鼠双眼屈光度、眼轴长度,免疫组织化学法检测豚鼠视网膜多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)表达情况.结果 4周后,4组实验眼屈光度、眼轴长度、视网膜DAT阳性细胞个数分别为:Ⅳ组(0.40±1.05)D、(7.64±0.18)mm、(37.00 ±3.48)个,Ⅲ组(-2.15±1.02)D、(7.66±0.03)mm、(35.60±3.74)个,Ⅰ组(-4.70 ±0.39)D、(8.02±0.17)mm、(24.20 ±3.73)个,Ⅱ组(-4.05 ±0.75)D、(7.86 ±0.19)mm、(23.40±2.77)个,与Ⅲ和Ⅳ组相比,Ⅰ和Ⅱ组实验眼形成中高度近视、眼轴明显延长、视网膜DAT阳性表达也低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);Ⅲ组与Ⅳ组相比,各项检测指标差异均无统计学意义(均为P>0.05).结论 哌仑西平滴眼液能有效抑制豚鼠LIM的发展,能阻止LIM眼视网膜DAT表达水平的下降.
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母爱剥夺对成年大鼠情绪及多巴胺转运蛋白基因表达的影响
目的:研究母爱剥夺对雄性大鼠成年后情绪及脑纹状体多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)基因表达的影响,探讨DNA甲基化是否参与调控DAT基因的表达.方法:新生幼鼠随机分为实验组和对照组,实验组出生后第1至14天,每天母子分离6 h.12周龄时,采用高架十字迷宫、旷场实验评定2组大鼠的情绪水平,采用RT-PCR法检测纹状体DAT mRNA表达水平,亚硫酸测序法检测DAT基因启动子区DNA甲基化水平.结果:实验组大鼠在新异环境中的探索能力下降、焦虑水平较低,大脑纹状体DAT mRNA表达显著低于对照组(P＜0.05),DAT基因启动子区的DNA甲基化水平差异没有统计学意义(P＞0.05).结论:母爱剥夺对雄性大鼠成年后的情绪有持久的影响,且抑制纹状体DAT mRNA的表达;DNA甲基化可能不是DAT表达下降的机制.
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熄风静宁颗粒对Tourette综合征模型大鼠脑纹状体多巴胺D2受体和多巴胺转运蛋白mRNA表达的影响
目的 观察熄风静宁颗粒对Tourette综合征(TS)模型大鼠脑纹状体多巴胺D2受体(DRD2)和多巴胺转运蛋白(DAT)mRNA表达的影响.方法 Wistar雄性大鼠36只随机分为空白对照组、模型组、氟哌啶醇组、熄风静宁颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组,采用亚氨基二丙腈(IDPN)腹腔注射建立TS大鼠模型,造模后连续给药6周,采用RT-PCR法检测大鼠脑纹状体中DRD2和DAT mRNA表达的情况.结果 IDPN诱导的模型大鼠的体质量显著低于正常大鼠(P＜0.01);给药前后熄风静宁颗粒中剂量组TS模型大鼠体质量增长与正常大鼠体质量的增长无差异;TS模型大鼠脑纹状体DRD2 mRNA与正常组比较呈现高表达(P＜0.01);熄风静宁颗粒中、高剂量组和氟哌啶醇可降低TS模型大鼠脑纹状体DRD2 mRNA的表达(P＜0.05);TS模型大鼠脑纹状体DAT mRNA表达与正常组比较显著增高(P＜0.01);中药颗粒高剂量组能够降低TS模型大鼠脑纹状体DAT mRNA的表达,但氟哌啶醇作用更明显(P＜0.05).结论 熄风静宁颗粒尚具有部分调节机体状态的作用;Tourette综合征存在多巴胺功能的亢进,熄风静宁颗粒能够通过降DRD2受体的敏感性,抑制多巴系统系统功能的亢进而发挥药物治疗的作用.
关键词： 熄风静宁颗粒 Tourette综合征 多巴胺D2受体 多巴胺转运蛋白 -
131I-β-CIT多巴胺转运蛋白显像的基础研究
用过氧乙酸法进行131I标记β-CIT.以MPTP连续5 d注入猫股静脉内,建立PD模型.取正常猫6只、PD模型猫3只,每只分别注入74 MBq/0.5 ml 131I-β-CIT,观察4 h和20 h时动物体内分布情况.将74 MBq/0.5ml/只131I-β-CIT经股静脉分别注入正常组及PD组猫体内,于注射后0.5、1、2、4、20 h进行脑显像,计算纹状体131I-β-CIT的特异性结合.结果显示:标记物131I-β-CIT放化纯达97.62%±0.31%.室温下放置4 h以及分别与水、人新鲜血清孵育4 h后,放化纯平均值分别为95.33%±0.59%、95.14%±0.87%、95.06%±0.64%.猫静脉注射131I-β-CIT后,放射性主要浓聚于纹状体区,其次为肺、肝、肾.以每克组织中放射性占总放射性计数的百分比计算,正常猫4h和20h纹状体/小脑比值分别为18.31±3.50和20.51±2.23.20 h PD猫纹状体/小脑的比值为11.20±0.29,与20 h正常猫相比显著下降(P＜0.05).显像研究显示正常猫纹状体20 h特异性结合为4.83±0.82,PD模型猫为2.92±0.66,两者有显著性差异(P＜0.05). 分布研究与显像研究的结果相符.因此,β-CIT是一种较理想的DAT配体,碘标β-CIT 的DAT功能显像可作为PD诊断的客观指标.
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不同病程帕金森病大鼠纹状体多巴胺转运蛋白的动态变化
目的:观察不同病程帕金森病(PD)大鼠纹状体多巴胺转运蛋白(D AT)的动态变化,并探讨该变化与黑质酪氨酸羟化酶(TH)之间的关系.方法:采用双点注射6-OHDA至大鼠右侧黑质致密部和前脑内侧束,建立偏侧PD模型.建模后2周、4周、6周的PD大鼠分别尾静脉注射99mTc-TRODAT-1,1h后取左右纹状体,以γ计数仪测定放射性计数,并计算单位质量的左、右放射性计数率以及左、右纹状体单位质量的放射性计数比值.同时取建模后2周、4周、6周PD大鼠黑质组织进行TH免疫染色,观察阳性细胞形态及分布.结果:PD大鼠毁损侧纹状体放射计数明显低于健侧,建模后2周、4周、6周PD大鼠DAT相对放射计数较健侧分别降低了16.8％、35.9％和50.1％ (P ＜0.05 ～0.001);不同病程PD大鼠毁损侧纹状体DAT的相对放射计数与TH阳性细胞数呈高度的正相关(P＜0.01,R=0.9,n=15).结论:PD大鼠纹状体DAT含量随着病程的增加逐渐减少,99mTc-PRO-DAT-1的放射性分布能够较准确的反映突触前多巴胺能神经元的变化.
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红景天苷对MPTP诱导的帕金森病小鼠黑质多巴胺转运蛋白的影响
目的:探讨红景天苷(salidroside,Sal)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)小鼠黑质多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)表达的影响.方法:将神经毒素l-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phen-yl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)注入C57BL/6小鼠腹腔内,制备PD模型,Rotarod实验和游泳实验观察小鼠行为学变化,免疫荧光组织化学法检测黑质DAT阳性神经元数目的变化.结果:行为学实验结果显示,Rotarod实验中模型组小鼠在滚轴上运动的时间明显短于正常组(P＜0.01),给予不同剂量的Sal后,小鼠在滚轴上运动的时间有所延长,并呈剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01).游泳实验结果与Rotarod结果一致,模型组小鼠游泳时间明显短于正常组(P＜0.01),给予不同剂量Sal后,小鼠游泳时间不同程度增加(P ＜0.05,P＜0.01).免疫荧光结果显示,模型组小鼠黑质中DAT阳性神经元的数目明显少于正常组(P＜0.01),而给予不同剂量Sal干预后,小鼠DAT阳性神经元数目的减少有所恢复(P ＜0.05,P＜0.01).结论:Sal可以改善PD小鼠行为协调能力,提高DAT阳性神经元存活的数目,并呈剂量依赖性,表明Sal对多巴胺(dopamine,DA)能神经元具有一定的保护作用.
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洛贝林抑制细胞膜多巴胺转运蛋白摄取
目的 研究洛贝林调节多巴胺在细胞内外分布的作用位点及作用机制.方法 利用六羟基多巴(6-OHDA)损伤偏侧部分多巴胺纹状体系统模型、Sprague-Dawley(SD)鼠纹状体突触体摄取实验和神经母细胞瘤细胞系(SK-N-SH)及永久转染细胞膜多巴胺转运蛋白的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO)研究洛贝林作用位点及其机制.结果 洛贝林可以有效降低6-OHDA损伤大鼠对阿朴吗啡的敏感性;洛贝林在细胞水平有效抑制多巴胺转运蛋白的转运活性,重新分布多巴胺在细胞内外浓度,而对多巴胺转运蛋白的释放功能没有影响.结论 洛贝林通过有效抑制细胞膜多巴胺转运蛋白的摄取功能增加突触间隙内多巴胺浓度;洛贝林是多巴胺转运蛋白的有效抑制因子.
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新生猪缺氧缺血脑损伤模型纹状体基本病理特点及多巴胺能机制的初步研究
目的 观察新生猪缺氧缺血性脑损伤纹状体多巴胺受体和谷氨酸的变化,初步探讨纹状体多巴胺能和谷氨酸能系统的相互作用机制.方法 使用新生猪缺氧缺血脑损伤模型,通过磁共振波谱(MRS)检测纹状体损伤时谷氨酸的代谢变化,以及用免疫组化法观察纹状体损伤时多巴胺D2受体和多巴胺转运蛋白(DAT)的改变,并进一步分析三者的相关性.结果 缺氧缺血后纹状体D2受体阳性神经元的数量随着时间延长始终在减少,其减少的区域恰好与基底节损伤区域一致,减少的程度也与基底节损伤程度相平行;神经元DAT阳性表达先增加后减少,缺氧缺血后12 h表达强;Glx/Cr比值在缺氧缺血后早期增加并与DAT改变呈正相关(r=0.77).结论 多巴胺能和谷氨酸能系统参与了由于缺氧缺血引起的纹状体损伤,且二者之间可能存在一定的交互作用.
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大鼠帕金森病模型99mTc-TRODAT-1的脑内分布
目的:研究多巴胺转运蛋白(DAT)显像剂99mTc-2β-[N,N'-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷(99mTc-TRODAT-1)用于评价帕金森病(PD)大鼠模型早期改变的价值.方法:将SD大鼠分为3组:①对照组(n=14)只;②单侧PD模型组(n=14)(颅内单侧纹状体毁损);③多发性腔梗模型组(n=12)(颈动脉注射自体血栓术).观察正常对照大鼠脑内、纹状体内99mTc-TRODAT-1分布情况,比较单侧PD模型组健侧与毁损侧及多发性腔梗模型组双侧纹状体99mTc-TRODAT-1的摄取比值.结果:对照组大鼠脑内和纹状体内分布实验表明,纹状体明显摄取99mTc-TRODAT-1;单侧PD模型组大鼠分布实验表明,毁损侧纹状体99mTc-TRODAT-1摄取较健侧明显减少;多发性腔梗模型组大鼠的结果与对照组相似.结论:99mTc-TRODAT-1显像剂被纹状体特异性摄取,为PD病早期诊断提供了有力依据.
关键词： 帕金森病 多巴胺转运蛋白 99mTc-TRODAT-1 -
运用单光子发射计算机断层扫描显像诊断帕金森病和血管性帕金森综合征
目的 探讨99Tcm-TRODAT-1{99Tcm-2β-[N, N'-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷}脑显像在早期帕金森病(PD)和血管性帕金森综合征(VP)鉴别诊断中的意义.方法 对确诊的47例早期PD患者、26例VP患者和30例年龄匹配的正常对照者分别进行99Tcm-TRODAT-1SPECT脑显像,应用计算机感兴趣区(regions of interest, ROI)技术分别计算各组双侧纹状体/小脑的放射性计数比值,并对结果进行比较分析.结果 早期PD患者患肢对侧纹状体对99Tcm-TRODAT-1 的摄取减少,患肢同侧和对侧纹状体/小脑的放射性计数比值均较正常对照者均值明显降低(P＜0.05).VP患者双侧纹状体区对99Tcm-TRODAT-1的摄取接近正常,患肢同侧和对侧纹状体/小脑的放射性计数比值与正常对照者双侧均值无显著差异(P＞0.05).结论 99Tcm-TRODAT-1显像及半定量分析有助于PD的早期诊断及与VP的鉴别诊断.
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新生儿缺氧缺血性基底节损伤的病理特点、多巴胺转运蛋白和多巴胺D2受体的变化
观察新生儿缺氧缺血性基底节损伤(BGI)的病理特点、探讨多巴胺转运蛋白(DAT)和多巴胺D2受体(D2R)变化与急性缺氧缺血性BGI的关系.光镜检查63例HIE死亡患儿脑HE染色标本,并用免疫组化链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(简称S-P法)检查18例急性缺氧缺血性BGI的DAT和D2R的变化.结果显示:42.9%(27/63)的HIE患儿有BGI,其中急性BGI 18例,慢性BGI 9例.在早产儿,急性BGI主要表现为神经元核裂解,而在足月儿主要表现为神经元嗜酸性变,组织坏死在早产儿比足月儿更明显.18例急性BGI中,7例相对轻的BGI病例,其基底节的神经元和神经纤维对DAT免疫反应增强,而8例较重的BGI病例,其基底节的神经元和神经纤维对DAT免疫反应减弱.在所有急性BGI病例,基底节D2R阳性神经元均减少,其减少的区域恰好与基底节损伤区域一致,减少的程度也与基底节损伤程度相平行.结论认为,早产儿和足月儿缺氧缺血性BGI的病理改变可能由于神经元的成熟性或和易损性不同略有差别,DAT和D2R参与了缺氧缺血性BGI,基底节对缺氧缺血易损可能与其神经化学解剖结构有关.
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多巴胺转运蛋白显像剂11C-β-CFT的全自动化合成
通过对反应条件的优化及合成模块的改进,探索了一种高效、全自动化合成11C-β-CFT的方法.以11CO2为起始原料与LiAlH4、HI或HBr反应生成11CH3I(或11CH3 Br),再转化成Triflate-11 CH3,后与nor-CFT进行甲基化反应合成11C-β-CFT.整个合成工艺实现了全自动化,产品校正放化产率为70.2％士1.8％,放化纯度大于95％.用新方法合成的11C-β-CFT无菌注射液经pH测定、HPLC检测、内毒素检查、细菌培养及异常毒性检查,均符合注射液要求.用制备的11C-β-CFT对正常志愿者与帕金森病患者进行PET显像,PET显像显示正常对照者双侧纹状体影像清晰,帕金森病患者双侧纹状体不对称性摄取减低.该工艺实现了11 C-β-CFT全自动化,放化产率高,工艺简单,有利于工作人员放射防护,显像效果良好,可满足临床需要.
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99mTc-TRODAT-1 SPECT脑显像鉴别血管性帕金森综合征与帕金森病的初步应用
目的探讨应用99mTc-TRODAT-1进行SPECT脑多巴胺转运蛋白(DAT)显像鉴别诊断血管性帕金森综合征(VP)与帕金森病(PD)的临床应用价值.方法对15例VP患者,22例PD患者和9例健康志愿者行99mTc-TRODAT-1SPECTDAT显像,并应用ROI技术测定纹状体与小脑部位的放射性比值.结果与正常对照组相比,VP患者纹状体区对99mTc-TRODAT-1的摄取仅有轻微降低,并无明显差别;PD患者双侧纹状体区对99mTc-TRODAT-1的摄取均明显减少(P＜0.01).PD患者与VP患者相比也表现为降低(P＜0.01),且PD患者双侧纹状体不对称,而VP患者却非如此.结论99mTc-TRODAT-1 SPECTDAT显像对鉴别VP与PD是一种可靠的方法.
关键词： 多巴胺转运蛋白 血管性帕金森综合征 帕金森病 单光子发射计算机断层扫描
