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基于血清蛋白组学初步探讨脑心通胶囊防治心脑血管疾病的作用机制
步长脑心通胶囊具有益气活血,化瘀通络的作用,临床广泛用于冠心病、心绞痛、脑卒中等心脑血管疾病的治疗,其预防的药效物质基础及可能作用机制尚不明确.该实验取C57BL/6小鼠20只,雌雄各半,按体重随机分为对照组(生理盐水)和脑心通组.适应性喂养7d后开始给药,连续灌胃3d,末次给药后1h,心尖取血,每组取6只制备血清蛋白样品,进行双向凝胶电泳,图像分析,质谱检测,筛选并鉴定差异表达蛋白,对差异蛋白进行生物信息学分析.脑心通胶囊给药组与对照组差异表达蛋白24个,其中与对照组相比,上调12个,下调12个.差异蛋白所参与的通路涉及细胞凋亡信号通路,血管内皮生长因子信号传导通路等,其中vasohibin-1是血管生成的负反馈调节因子,Western blot结果证实脑心通胶囊可使vasohibin-1蛋白表达降低,与双向电泳结果一致.脑心通胶囊给药组血清蛋白表达有差异,差异蛋白的主要作用靶位为内皮细胞、炎症细胞及血小板等,这些蛋白的改变提示脑心通胶囊在一定程度上可以改善冠心病及缺血性脑血管疾病,为脑心通胶囊未病先防的分子机制研究提供了潜在的生物标志物.
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SELDI蛋白指纹技术在肿瘤早期诊断中的应用
血清蛋白组学模式诊断技术是一种新型的蛋白组学平台,在此平台上通过高维质谱所获得的蛋白指纹图谱可用做疾病的诊断标准.此技术在早期肿瘤的检测中具有巨大应用前景.目前发现通过SELDI蛋白指纹技术所获得的生物标记物,大多数是在特异性肿瘤微环境中所产生的低分子质量蛋白碎片.通过多种肿瘤的检测表明,其敏感性和特异性均优于传统的肿瘤标记物,对某些肿瘤的敏感性已达100%,特异性也超过95%,因而在肿瘤早期诊断和早期预警中具有重要临床应用价值.
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二噁英慢性低剂量暴露对雌性SD大鼠血清蛋白的影响
目的 对慢性低剂量暴露于2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(TCDD)的雌性SD大鼠血清蛋白改变进行研究,对TCDD毒性效应作进一步阐述.方法 雌性SD大鼠随机分为3个染毒组和1个对照组[(n=8只/组,0 ng/(kg·d)、20 ng/(kg·d)、50 ng/(kg·d)、125ng(kg·d)],灌胃染毒29周,采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱技术对大鼠血清进行蛋白组学研究,寻找差异蛋白点,并对其肝脏进行组织病理学检测.结果 上调的蛋白包括补体C4,载脂蛋白A-Ⅳ前体和低分子量的激肽原前体;触珠蛋白和补体C3仅在染毒组大鼠凝胶中被识别,而对照组未见;而α-抑制因子Ⅲ前体只在对照组的胶上被识别.肝脏组织病理学检测显示染毒组大鼠肝脏出现肝细胞的脂肪变性、空泡形成、肝细胞坏死等改变,并且随染毒剂量的增加严重程度增加.结论 慢性低剂量染毒使得血清蛋白谱发生改变,所改变的蛋白质与TCDD的免疫毒性、肝毒性、氧化应激等效应有关.血清差异蛋白可为TCDD毒作用分子标志物的筛选提供依据.
关键词： 2 3 7 8-四氯二苯并二噁英 血清蛋白组学 基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱 双向电泳 -
结直肠癌肝转移血清蛋白指纹图谱诊断模型的建立及临床应用
目的:检测结直肠癌肝转移、结直肠癌和健康人血清中蛋白质质谱,筛选特异的生物标记物,构建结直肠癌肝转移血清蛋白指纹图谱的早期诊断模型.方法:利用表面增强激光解析/电离-飞行时间-质谱( SELDITOF-MS)技术检测76例血清标本的蛋白质质谱,其中结直肠癌肝转移8例,结直肠癌无肝转移58例,健康人10例.运用支持向量机(SVM)和判别分析法处理数据、建立和评估诊断模型.结果:(1)留一法交叉验证区分结直肠癌肝转移与健康人的诊断模型,训练集和测试集的敏感性和特异性均达到100％；(2)留一法交叉验证区分结直肠癌肝转移与结直肠癌无肝转移组的诊断模型,训练集敏感性和特异性均达到100％,测试集的敏感性87.5％,特异性98.28％；(3)留一法交叉验证区分结直肠癌肝转移组和对照组的诊断模型,训练集的敏感性、特异性分别为100％、98.53％,测试集的敏感性、特异性分别为75.0％、97.06％.结论:SELDI技术结合生物信息学分析工具,是筛选和鉴定结直肠癌肝转移候选标志物的非常有效方法,建立的诊断模型为结直肠癌肝转移的早期临床诊断尤其是定性诊断提供了新手段.
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一维凝胶电泳图谱数字化定量比较法的建立及验证
目的 探讨凝胶定量软件Quantity One用于血清差异蛋白质组学研究的可行性.方法 运用凝胶成像系统中的定量软件Quantity One对各电泳图上的各条带进行定量分析,将图形结果转换为数据结果;用上述技术分别对健康体检者和肝癌病人各32份除高丰度蛋白的血清电泳图进行分析,验证该研究方法的可行性.结果 两组间有10个条带差异具有统计学意义(P＜0.05).通过文献检索,其中9条找到相对应分子量的HCC标志物.结论 凝胶定量软件Quantity One可量化处理电泳条带的分子量和灰度;一维凝胶电泳技术可用于血清差异蛋白初期比较研究.
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去除血清中高、中丰度蛋白方法的优化
目的:通过比较和优化血清样品制备方法,建立简便、灵敏的去除血清中高、中丰度蛋白的方法.方法:运用盐析法、有机溶剂法和亲和层析柱法去除血清中高、中丰度蛋白,经蛋白浓度测定和SDS-PAGE电泳分析,比较3种方法对高、中丰度蛋白去除效果及小分子蛋白的保留和分布情况.结果:乙腈沉淀法能去除血清样品中90%左右的高、中丰度蛋白,同时可残留更多15 ku以下的小分子蛋白;盐析沉淀法和亲和层析柱法均能去除血清样品中大部分高、中丰度蛋白,但所得的15 ku以下的小分子蛋白少于乙腈沉淀法所得到的相应蛋白.结论:用1.2倍体积乙腈沉淀法处理血清样品可去除绝大部分高、中丰度蛋白,同时收获更多的15 ku以下的小分子量蛋白.
