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杜仲皮、杜仲雄花醇提取物对模型小鼠气道变应性炎症的影响
目的 观察杜仲皮、杜仲雄花醇提物对鸡卵清蛋白(OVA)所致小鼠气道变应性炎症的影响,探讨其作用机制.方法 实验第0、7日,OVA腹腔注射致敏,继而滴鼻激发21 d,建立小鼠气道变应性炎症模型.实验小鼠随机分为正常组、模型组、杜仲皮醇提物组(杜仲皮组)、杜仲雄花醇提物组(杜仲雄花组)和地塞米松组,各给药组给予相应药物灌胃.肺组织行HE、PAS染色,观察支气管及周围肺组织病理改变,ELISA检测小鼠血清 OVA-IgE、白细胞介素(IL)-4、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-13水平,免疫组化检测小鼠肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)表达,流式细胞术检测小鼠外周血 Th17+细胞表达,RT-PCR 检测小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、IL-6 mRNA表达.结果 模型组小鼠肺组织可见嗜酸性粒细胞及其他炎症细胞浸润,支气管痉挛,黏液分泌增加,杜仲皮组和杜仲雄花组小鼠肺组织病理明显改善.与正常组比较,模型组小鼠血清OVA-IgE、IL-4、IL-13水平升高,IFN-γ水平降低(P<0.05,P<0.01),肺组织ICAM-1、VEGF、MMP9表达增强,TIMP1表达降低(P<0.01),外周血IL-17+细胞增加,肺组织TNF-α、IL-6 mRNA表达均升高(P<0.01);与模型组比较,杜仲皮组和杜仲雄花组小鼠血清OVA-IgE、IL-4、IL-13水平明显下调(P<0.01),ICAM-1、VEGF表达明显下调(P<0.05,P<0.01),TIMP1表达升高,外周血IL-17+细胞降低,肺组织IL-6 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),杜仲皮组还可诱导IFN-γ分泌(P<0.01),下调TNF-α mRNA表达(P<0.05),杜仲雄花组MMP9表达明显下调(P<0.05).结论 杜仲皮、杜仲雄花醇提物可能通过降低模型小鼠OVA-IgE产生,抑制Th2类细胞因子分泌,下调Th17细胞,抑制促炎细胞因子表达,对气道变应性炎症有一定抑制作用.
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杜仲雄花中三萜类化学成分研究
该研究采用正相硅胶柱色谱,反相柱色谱(RP-18),凝胶色谱(Sephadex LH-20)以及重结晶等多种分离纯化手段,从杜仲雄花中分离得到9个化合物,通过化合物的理化性质和光谱数据鉴定其结构分别为:3-oxo-12-en-ursane-28-O-α-L-arabinofuranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside(1),2α,3β-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid(28→1)-β-D-glucopyranosyl ester(2),熊果酸(3),α-香树脂醇(4),熊果醇(5),3-O-乙酰基熊果酸乙酸酯(6),3-O-乙酰基齐墩果酸(7),白桦脂酸(8),白桦脂醇(9).其中化合物1为新化合物,化合物2,4～7为首次从该科植物中分离得到.采用MTT法对所分离的9个化合物进行抗肿瘤活性测试,结果表明仅有化合物3对K562和HepG2细胞显示出一定的抗肿瘤活性,其余化合物对所选的2种细胞均无明显活性.
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杜仲雄花中黄酮类化学成分及其抗氧化活性研究
目的 研究杜仲Eucommia ulmoides雄花的黄酮类化学成分,并进行抗氧化活性筛选.方法 运用硅胶、SephadexLH-20和ODS等各种色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和谱学数据鉴定化合物结构,并运用DPPH自由基和H2O2诱导PC12细胞凋亡实验测定其抗氧化活性.结果 从杜仲雄花95％乙醇提取物中共分离得到10个黄酮类化合物,分别鉴定为柚皮素(1)、槲皮素(2)、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(3)、异槲皮苷(4)、江户樱花苷(5)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1→2)-p-D-葡萄糖苷(6)、山奈酚-3-O-β-D-(6”-O-乙酰基)-β-D-葡萄糖苷(7)、芦丁(8)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(9)、紫云英苷(10).结论 化合物1、5、6、9为首次从杜仲雄花中分离得到;活性测试结果表明化合物2～4、6、8具有较强的抗氧化活性,能明显抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡.
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杜仲雄花生长发育动态及活性成分量变化
目的 建立杜仲Eucommia ulmoides雄花6种活性成分的测定方法,分析杜仲雄花生长发育动态及活性成分的变化规律.方法 采用超声法进行提取,采用A1C13比色法测定总黄酮,采用HPLC法测定其他6种成分,色谱柱为Thermo hypersil gold柱(250 mm× 4.6 mm,5μm),以甲醇-0.5％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长:206nm (0～15 min)、236 nm (15～55 min)、255 nm (55～100min);体积流量1.0 mL/min.结果 花径、花高、鲜质量、干质量、雄蕊长度和雄蕊数均在盛花期达到大值;总黄酮、绿原酸以及活性成分总量均以花蕾期高,始花期低;桃叶珊瑚苷量总体呈下降趋势;京尼平苷酸量花蕾期低,至盛花期达到高值,末花期有所下降;京尼平苷、异槲皮苷和紫云英苷量均以盛花期高,始花期低.结论 花期对杜仲雄花形态、产量、活性成分量及质量均有很大影响,为杜仲雄花质量控制及相关产品开发提供了重要依据.
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HPLC法同时测定杜仲雄花中5种活性成分
目的 采用HPLC法测定不同产地杜仲雄花中5种活性成分的量.方法 采用Thermal hypersil (250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(B)-0.5％磷酸水溶液(C)为流动相,梯度洗脱;检测波长为206 nm(0 ～15 min),236 nm (15 ～55 min);体积流量1.0 mL/min.结果 桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、车叶草苷、京尼平苷分别在0.395 ～ 11.85 μg、0.481 ～ 14.43 μg、0.416 ～ 12.48 μg、0.48～14.4 μg、0.481 ～ 14.43 μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.5％ ～ 98.3％.结论 该方法简便快捷重复性好,可用于杜仲雄花的质量控制.
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杜仲雄花HPLC指纹图谱及成分积累规律的研究
目的 建立杜仲雄花的HPLC指纹图谱,分析杜仲雄花中成分的积累规律.方法 采用Ameritech C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,甲醇-0.05％磷酸溶液梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长238 nm.结果 对不同日期采集的杜仲雄花的指纹图谱进行评价,生成对照指纹图谱,确定了22个共有峰.杜仲雄花的成分积累规律为京尼平苷酸含有量花蕾期低,至盛花期高.绿原酸含有量花蕾期高,始花期低,末花期上升.京尼平甘含有量始花期低,盛花期高.结论 杜仲雄花的盛花期是兼顾质量和产量的佳采摘期.
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杜仲雄花茶对高脂乳剂小鼠血脂水平的影响
目的:探讨杜仲雄花茶对高脂血症的预防保健作用.方法:将50只昆明小鼠随机分为5组,分别为空白对照组、高脂血症模型组、洛伐他汀对照组、杜仲雄花给药高剂量组和杜仲雄花给药低剂量组,按标准给药饲养 30 d后,测定每组个体动物的胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL-C),低密度脂蛋白(LDL-C).结果:与对照组比较,模型组动物血浆中的TC、TG、LDL-C升高,HDL-C降低.与模型组相比,杜仲雄花给药高剂量组的TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高.结论:杜仲雄花茶能在一定程度上预防高脂乳剂所引起的小鼠血脂升高.
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聚酰胺-大孔树脂联用富集杜仲雄花总黄酮
目的：寻找一种有效富集杜仲雄花总黄酮的方法并对工艺条件进行初步摸索。方法样品溶液以聚酰胺吸附，水洗除杂。将除杂后的聚酰胺加于大孔吸附树脂柱顶部，以乙醇洗脱富集总黄酮。结果聚酰胺与 D-101树脂联合应用能很好的富集杜仲雄花总黄酮。佳工艺条件为浸膏与聚酰胺比为1∶3，浸膏与树脂比为1∶10，以体积分数为60％乙醇洗脱，收集洗脱液6 BV 。富集物总黄酮收率可达86．76％，黄酮纯度为55．27％。结论该方法优于目前常用黄酮富集，且工艺简单，树脂再生容易，具有良好的应用前景。
关键词： 杜仲雄花 总黄酮 富集工艺 聚酰胺 - 大孔树脂结合法 -
杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花的药效学比较研究
目的 比较杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花在抗炎、镇痛、抑菌、免疫调节等药效学方面的作用.方法 分别设杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花水提取物高、低剂量组,采用免疫器官称重法、二甲苯致小鼠耳肿胀试验、醋酸致小鼠扭体试验、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌体外抑菌试验,分别评价杜仲不同部位水提取物的免疫调节、抗炎、镇痛、抑菌作用.结果 杜仲不同部位水提取物均可提高脾脏及胸腺指数,且杜仲雄花高剂量组的提高作用更明显,差异均有统计意义(P＜0.05或P＜0.01);杜仲不同部位水提取物可不同程度抑制小鼠耳肿胀,其中杜仲雄花高剂量组抑制作用强,差异有高度统计意义(P＜0.01);杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花的高剂量组均能减少小鼠的扭体次数,且杜仲雄花高剂量组小鼠扭体次数减少更明显,差异有高度统计意义(P＜0.01);杜仲雄花水提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的抑菌浓度低,有较好的抑菌作用.结论 杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花在各药效上的作用功效各不相同,合理使用其用药部位是今后研究的方向.
