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冠状病毒的生物学特性
冠状病毒属于巢状病毒目,冠状病毒科,冠状病毒属.成熟的冠状病毒直径约为60 nm~220 nm,电镜下呈日冕状或皇冠状,故命名为冠状病毒,分为3个抗原群:第Ⅰ群:猪传染性胃肠炎病毒、猪呼吸道冠状病毒、犬冠状病毒、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猫肠炎冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、人冠状病毒229E(HCoV-229E);第Ⅱ群:大鼠冠状病毒、大鼠涎泪腺炎病毒、牛冠状病毒(BCV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒、兔肠炎冠状病毒、北海鸥病病毒;第Ⅲ群:鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、兔冠状病毒、猴冠状病毒、豹冠状病毒、火鸡冠状病毒、人冠状病毒OC43(HCoV-OC43).
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猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及全基因组序列分析
采用ST细胞培养,免疫荧光、理化试验、中和试验、电镜观察等方法,从四川疑似猪腹泻病料中分离到1株猪传染性胃肠炎病毒,命名为SC-Y.分离株在ST细胞上盲传至第8代时可出现稳定的细胞病变,病毒滴度TCID50为10-3.664/0.05m1,中和指数为52.应用长链RT-PCR技术成功地扩增出了覆盖SC-Y株全长基因组的5个片段,通过BioEdit软件对测序结果进行拼接,确认SC-Y株基因组全长28 590bp,包括7个开放阅读框,基因组5非编码区长315nt,3'端非编码区长277nt.TGEV基因组系统进化树显示,SC-Y株与美国Purdue株可能来源于共同的祖先.
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猪传染性胃肠炎病毒n基因的原核表达及重组蛋白的免疫活性分析
猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的一种急性、高度接触性传染病,以呕吐、水样腹泻、脱水和对2周龄以内仔猪高度致死率为特征[1].
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猪传染性胃肠炎病毒致病机制的研究进展
猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)是引起仔猪严重腹泻的一种动物冠状病毒.本文就TGEV的基因组结构、主要结构蛋白及功能、病毒繁殖与复制、病毒受体、病毒变异以及病毒致病机制等方面的国内外研究进展和现状进行综述.这些资料有助于理解TGEV的分子生物学特性、遗传与变异规律,对新型疫苗的研发及抗病毒药物的筛选具有重要的理论价值.
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猪传染性胃肠炎的防治
猪传染性胃肠炎是由冠状病毒属的猪传染性胃肠炎病毒引起的一种急性、高度接触性的传染病.病猪和带毒猪是本病的主要传染来源.各种年龄猪均可感染发病,但症状轻微,并可自然康复.
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如何防治猪的传染性胃肠炎
病原:猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性传染性疾病.
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木犀草素对猪传染性胃肠炎病毒的抑制作用
目的:建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的体外培养方法,观察木犀草素对TGEV的抑制作用.方法:采用细胞培养法,通过结晶紫摄入量测定结合细胞病变作用(CPE),观察木犀草素在不同的加药方式下,对感染TGEV的猪睾丸(ST)细胞的保护作用.结果:TGEV病毒先吸附ST细胞再加入药液,先与TGEV病毒孵育再接种于ST细胞,或药液先与细胞孵育再用病毒感染等不同方式下,木犀草素在0.84~54.50 μmol/L浓度范围内,均能明显地提高细胞的存活数.另外发现TGEV感染ST细胞后随着给药时间的推迟,木犀草素抑制病毒增殖作用越弱.结论:木犀草素对体外培养系统中TGEV有较好的增殖抑制作用.
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减毒沙门氏菌递呈的TGEV S/N融合基因疫苗的口服免疫原性
目的 研究携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合基因的重组减毒沙门氏菌的口服免疫原性.方法 将真核质粒pVAX-S/N电转化鼠伤寒减毒沙门氏菌 SL7207,筛选获得疫苗菌株SL7207(pVAX-S/N).将菌株SL7207(pVAX-S/N)及对照组SL7207(pVAX-S)以1×109CFU/只灌胃免疫小鼠,测定免疫小鼠诱导的抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的血清IgG及肠道粘膜IgA抗体动态水平,同时测定42 d免疫小鼠的干扰素水平.结果 菌株SL7207(pVAX-S/N)构建成功,首免后2~6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌SL7207)的血清IgG,第4~6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的肠道粘膜IgA,SL7207(pVAX-S/N)诱导的IgG和IgA抗体高滴度均略高于SL7207(pVAX-S),但差异不明显(P>0.05).SL7207(pVAX-S/N)免疫42 d小鼠诱导的干扰素浓度为659.45 pg/mL,低于SL7207(pVAXD-S)组.结论 S/N融合基因疫苗SL7207 (pVAX-S/N)具有良好的口服免疫原性,但与SL7207 (pVAX-S)无明显差异.
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反义RNA抑制猪传染性胃肠炎病毒复制的研究
根据反义RNA作用原理,设计一条互补猪传染性胃肠炎病毒基因(26888-27184)区的反义RNA序列.将该序列与逆转录病毒表达载体构建成质粒PLXSN-N5',并与质脂体共转染PA317细胞,经G418(500μg/ml)筛选出稳定的产毒细胞克隆.取其上清液感染小鼠成纤维细胞NIH3T3,测定细胞克隆产生的假病毒滴度,用高滴度假病毒感染IBRS2细胞.提取被感染的IBRS2细胞总DNA和RNA,通过PCR和RT-PCR证明PLXSN-N5'整合到IBRS2细胞基因组.病毒感染细胞病变表明,反义RNA有明显抑制TGEV复制的作用.
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TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究
本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品.通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法.该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性.
关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 TaqMan探针 荧光定量RT-PCR -
检测猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR方法的建立
[目的]建立对猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,为该病的诊断和流行病学调查提供可靠的和敏感的手段.[方法]根据Genbank收录的TGEV-Miller毒株S蛋白的基因序列,设计合成一对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测TGEV的RT-PCR方法.[结果]两条引物扩增目的片段长度为1262bp.经测序分析,与Miller毒株的同源性为99.1%.[结论]该RT-PCR方法灵敏,可靠,具有很强的临床检测意义,可用于TGEV的快速诊断和流行病学调查.