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三七皂苷R1脑、血液微透析探针的体内外回收率分析
目的:建立三七皂苷R1脑、血液微透析探针的体内外回收率的测定方法,考察流速、药物质量浓度、探针使用次数对回收率的影响,并进行探针回收率体内稳定性研究,为三七皂苷R1的后续研究提供依据.方法:采用正透析法和反透析法进行三七皂苷R1脑、血液微透析探针体内、体外回收率的研究,采用LC-MS/MS测定微透析液中三七皂苷R1的质量浓度,计算探针回收率.结果:在流速为1.5 μL·min-时,三七皂苷R1脑、血液探针体内回收率在10 h内保持稳定,平均回收率分别为14.0％和33.2％;恒定质量浓度下,探针体内外回收率均随着流速(0.5,1.0,1.5,2.0,3.0μL· min-)的增加而减小,脑、血液探针的体外正透析法测得的回收率分别为(36.0±1.7)％,(23.5±1.6)％,(14.2±0.5)％,(8.0±0.7)％,(5.4±0.5)％和(61.6±2.6)％,(48.0±4.1)％,(33.0±2.8)％,(24.1±1.2)％,(18.9±1.1)％,正、反透析法所测得的探针体外回收率一致,且体内和体外回收率结果也一致;恒定流速下,三七皂苷R1质量浓度(50,200,500,1 000μg·L-1)对脑、血探针回收率均无影响;使用≤3次的探针,经过恢复处理后,仍能够保持较高的回收率.结论:反透析法测定的体外回收率与体内回收率一致,且与正透析法测定的体外回收率一致,说明反透析法能够作为研究三七皂苷R1回收率的测定方法;探针体内回收率在10h内保持稳定,说明微透析技术能够用于三七皂苷R1脑细胞间液药代动力学、血液药代动力学的同步研究.
关键词： 三七皂苷R1 微透析 探针回收率 药代动力学 液相色谱-串联质谱法 -
血液微透析技术分析阿魏酸口服给药后药代动力学过程
目的:应用血液微透析技术测定阿魏酸口服给药后药代动力学参数.方法:采用浓差法(增量法和减量法)考察探针回收率的日内稳定性及灌流速度、阿魏酸质量浓度、温度对探针回收率的影响,通过零净流量法测定阿魏酸体外回收率,并将结果与浓差法所测回收率进行比较.采用血液微透析法进行体内药动学研究,HPLC测定透析液中阿魏酸含量.结果:探针回收率日内稳定性良好;体外回收率与阿魏酸质量浓度无关,与灌流速度成指数型负相关;温度越高,回收率越高;利用零净通量法能准确地测定透析介质中阿魏酸含量及回收率;增量法、减量法及零净通量法测定的回收率一致.在2.5 μL·min-1流速下,体内平均回收率(28.69±1.95)％,口服给药后阿魏酸9.33 min达峰值,消除半衰期12.52 min.结论:微透析取样技术可用于阿魏酸的药动学研究,减量法可作为体内微透析研究中阿魏酸回收率的测定方法.
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氧化苦参碱体内外微透析回收率的研究
目的:研究氧化苦参碱浓度、灌流速度及试验方法对同心圆和线性两种微透析探针回收率的影响.方法:以氧化苦参碱为试验药物,分别测定药物不同浓度、不同灌流速度下,两种探针体外正向、反向回收率及体内反向回收率.结果:探针回收率均与药物浓度无关,与灌流速度成反比;两种探针各自的体外正向、反向回收率相似,且均大于体内反向回收率;同心圆探针的回收率大于线性探针.结论:探针回收率的测定是采用微透析研究药动学的重要试验,可为氧化苦参碱的体内药物浓度确定指明适用的方法.
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丹皮酚、丁香酚、胡椒碱经皮微透析体内外回收率的研究
建立活血止痛膏中有效成分丹皮酚、丁香酚、胡椒碱微透析体内外回收率校正方法,为其经皮药动学研究提供依据.利用高效液相色谱法测定透析液中丹皮酚、丁香酚、胡椒碱的浓度,并计算微透析探针回收率;研究浓度、校正方法对3种成分微透析探针回收率的影响,并考察探针吸附性、体内外回收率的稳定性和重复性.结果表明,以30％乙醇生理盐水作为灌流液时,探针对3种成分均无明显的吸附,短时间内即可从探针上被完全洗脱下来;在8h内,3种成分体内外回收率均能保持稳定;交替用含药溶液和空白灌流液灌流探针3次,3种成分体内外回收率基本不变.不同质量浓度丹皮酚(2.46～53.64 mg·L-1)、丁香酚(4.26～32.15 mg·L-1)和胡椒碱(5.75～45.87 nmg· L-1)体外回收率分别为(45.7±4.66)％,(41.3±3.96)％,(27.82±2.95)％,即3种成分的探针回收率对浓度没有依赖性;在相同条件下,零净通量法、透析法和反透析法所测得的探针体外回收率几乎相等.因此,采集部位药物的浓度可用体外测得的回收率或在体回收率进行校正.同时也证明了该研究建立的微透析方法可用于活血止痛膏的经皮药动学研究.
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阿魏酸、川芎嗪微透析脑探针回收率测定及影响因素研究
建立阿魏酸(FA)、川芎嗪(TMP)微透析探针的体内外回收率校正方法,考察影响回收率的因素,为进一步的体内微透析试验提供依据.运用高效液相色谱法测定微透析液中FA,TMP的含量,分别计算探针的回收率;利用浓度差法(增量法、减量法)分别考察流速、浓度、温度对FA,TMP微透析探针体外回收率的影响,并考察了探针体内回收率的稳定性.增量法和减量法在相同的条件下所测得的探针体外回收率近似相等;相同的条件下,FA,TMP探针体外回收率在流速为1～2.5μL·min-均随着流速增加而降低,在25 ～42℃均随着温度上升而增加;而在同一流速下,探针体外回收率与FA,TMP浓度均无关;此外,FA,TMP的探针回收率在4个浓度循环中的变化基本保持稳定,且均呈现出相似的变化趋势,表明浓度差法的日内重复性良好.脑探针在大鼠体内8h内的回收率可维持相对稳定,但不同的脑探针回收率之间存在一定的差异性,提示每次在体动物实验均需进行探针的回收率校正.微透析技术可用于FA,TMP的脑局部药代动力学研究,反透析法可作为体内同时研究FA,TMP探针回收率的测定方法.
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钩藤碱微透析探针回收率测定及影响因素研究
目的:考察体内外微透析探针回收率的稳定性和重现性,为进一步的体内微透析试验提供依据.方法:采用增量法和减量法考察浓度、流速对探针回收率的影响.结果:微透析探针回收率受流速影响较大,基本不受浓度影响,且体内回收率稳定性良好.结论:微透析技术可用于钩藤碱的体内药代动力学研究,反透析法可作为体内研究钩藤碱探针回收率的测定方法.
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酒石酸溴莫尼定体内外微透析回收率的研究
目的 研究酒石酸溴莫尼定浓度、流速对体内外自制微透析探针回收率的影响,为进一步的眼部微透析药动学试验提供依据.方法 以酒石酸溴莫尼定为模型药物,分别测定微透析探针在不同药物浓度、不同灌流速度时,体外正向、反向回收率及体内反向回收率.结果 微透析探针体内外回收率与药物浓度无关,与流速成反比.探针体外正向、反向回收率在1.0μL·min-时有差异,在2.0、3.0 μL·min-1时无明显差异;且均大于体内反向回收率.结论 自制微透析探针回收率稳定,可用于酒石酸溴莫尼定的眼部药动学研究.
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苦参碱体内外微透析回收率的研究
目的 研究药物浓度、灌流速度及实验方法对同心圆和线性2种微透析探针回收率的影响.方法 以苦参碱为实验药物,分别测定药物不同浓度、不同灌流速度下,2种探针体外正向、反向回收率及体内反向回收率.结果 探针回收率均与药物浓度无关,与灌流速度成反比;2种探针体外正向、反向回收率具有一致性,且均大于体内反向回收率;体内回收率同心圆探针大于线性探针.结论 对于苦参碱的药动学研究,体外正向透析法简便准确,测得的回收率可作为药物的探针回收率.
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LC-MS/MS测定乙酰谷酰胺、谷氨酸和γ-氨基丁酸的血、脑微透析探针体外回收率
目的 测定乙酰谷酰胺及其体内分解产物谷氨酸及γ-氨基丁酸的血、脑微透析的体外回收率,为乙酰谷酰胺在血液及脑内的药动学研究奠定基础.方法 采用LC-MS/MS测定血、脑微透析液中乙酰谷酰胺、谷氨酸及γ-氨基丁酸的浓度,计算探针回收率;考察不同灌流速度、不同药物浓度对探针体外正、反透析法回收率的影响.结果 3种检测成分血、脑探针的回收率均与流速成反比,与药物浓度无关,体外正、反2种透析法得到的探针回收率相近.同时,探针体外回收率在6h内保持稳定.结论 反透析法能够作为乙酰谷酰胺体内回收率的测定方法,微透析技术能够用于乙酰谷酰胺血、脑药动学的研究.
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延胡索乙素微透析探针回收率的体外研究
目的 建立延胡索乙素经皮给药微透析采样的体外回收率测定方法.方法 运用高效液相色谱法测定微透析体外透析液中延胡索乙素的含量,分别计算探针的回收率,利用增量法和减量法考察流速、浓度、温度对探针体外回收率的影响.结果 增量法和减量法所测得的探针体外回收率在相同的条件下近似相等;相同的条件下,探针体外回收率在流速为1～3 μL/min范围内随着流速增加而降低,在温度为25～47℃范围内随着温度上升而明显增加;同一流速下,探针体外回收率与延胡索乙素浓度无关.结论 建立了延胡索乙素经皮给药的微透析采样方法,终选择了流速为1.5 μL/min,取样时间间隔为20 min,温度为37℃,可用于延胡索乙素穴位及非穴位皮肤给药后皮肤药动学研究.
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基于LC-MS/MS技术的罗库溴铵微透析探针回收率测定的方法学研究
目的 建立罗库溴铵微透析探针回收率的测定方法,考察罗库溴铵在体外及SD大鼠体内探针回收率的稳定性和重现性,为进一步体内微透析试验提供依据.方法 采用LC-MS/MS技术测定透析液中罗库溴铵浓度,计算相应的探针回收率;采用增量法(正透析法)和减量法(反透析法)考察不同流速(0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 μL/min)、不同药物浓度(50、200、500 ng/mL)对体外探针回收率的影响.采用减量法测定SD大鼠体内的探针回收率,并与体外结果进行比较.结果 在相同条件下,探针体外回收率在流速为0.5～4μL/min范围内随着流速增加而降低;同一流速下,探针回收率与罗库溴铵浓度无关;增量法和减量法所测得的体外探针回收率在相同条件近似相等,且稳定性良好.减量法测得的SD大鼠体内探针回收率结果与体外相近.结论 微透析技术可用于罗库溴铵体内药物动力学研究,反透析法可作为罗库溴铵体内研究的探针回收率测定方法.
关键词： 罗库溴铵 微透析 探针回收率 液相色谱-串联质谱法 -
LC-MS/MS法测定脑透析液中人参皂苷Rg1浓度及对其体内和体外探针回收率的考察
目的：建立高效液相色谱串联质谱( LC-MS/MS )方法,用于测定脑透析液中人参皂苷Rg1的浓度,并基于该方法考察Rg1在体外及大鼠海马、脑室的体内探针回收率,为Rg1在大鼠脑内的药代动力学研究奠定基础。方法高效液相色谱采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2．1 mm ×50 mm,1．7μm),以甲醇-水为流动相,进行梯度洗脱,流速为0．4 mL · min-1。考察本方法的特异性、线性范围、精密度、准确度以及稳定性。分别采用将探针置于不同浓度标准溶液以及将探针植入对应脑区后通入不同浓度灌流液的方法,考察微透析探针对人参皂苷Rg1的体外以及体内回收率,并进一步比较两者间的差异。结果人参皂苷Rg1的保留时间为1．91 min,线性范围为0．1~50μg·L-1,日内、日间精密度( RSD)均小于15%。微透析探针对人参皂苷Rg1的体外回收率为(4．05±0．28)%,体内回收率为(26．96±4．45)%,且在9 h内稳定。结论 LC-MS/MS法准确、灵敏、重现性好,可用于大鼠脑微透析样品中人参皂苷Rg1的浓度测定。探针对Rg1的体外回收率可能受温度等多因素影响而低于体内回收率,因此体内回收率更接近体内透析环境和过程,是校正透析液浓度的可靠方法。
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环境温度对左旋多巴体外探针回收率的影响
目的 探索环境温度对左旋多巴体外探针回收率的影响程度. 方法 通过改变灌流液温度与左旋多巴标准溶液的温度,将微透析探针的环境温度分为3种状态:①室温状态:灌流液及左旋多巴标准液均为室温(约24℃);②常规状态:灌流液为室温,标准液温度为体温(约37℃);③体温状态:灌流液及标准液均为体温. 分别在3种状态下进行左旋多巴探针回收率测定,采用高效液相色谱电化学系统进行分析,分别计算左旋多巴的体外探针回收率. 结果 在室温状态下为探针对左旋多巴的回收率为( 17.5 ±1.73 )%,在常规状态下为( 28.3 ±2.01 )%,在体温状态为(45.4 ±4.82)%,不同环境温度组的LD探针回收率具有显著性差异(P<0.01). 结论 环境温度可显著影响体外探针回收率的测定结果.
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脑微透析技术及其在药动学研究中的应用
脑徽透析技术是根据小分子物质可顺浓度梯度自由扩散的原理发展而成的可连续、活体对脑内特定部位细胞外液中生物化学物质进行采集的新型采样技术.凭借自身优点,脑微透析技术越来越多地应用于药动学研究,展现了广阔的应用前景.本文简要综述脑微透析技术原理、特点及其在药动学研究中的应用.
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芒柄花素、芍药苷血液和脑在体微透析方法的建立
目的:建立芒柄花素、芍药苷血液和脑局部在体微透析方法.方法:采用增量法考察流速对芒柄花素和芍药苷回收率的影响,结合实际操作,确定流速和取样间隔;利用浓度差法(增量法和减量法)研究流速、浓度、温度对微透析探针体外回收率和损失率的影响,探讨反透析法用于探针体内回收率测定的可行性;将血液探针和脑探针分别植入大鼠颈静脉和脑纹状体,考察探针在10h内体内回收率的稳定性.结果:芒柄花素,芍药苷血液和脑探针体外回收率随着流速的增高而降低,综合考虑取样时间和取样体积,确定流速为1.5μL·min-1,取样时间间隔为20 min;在相同流速和温度下,探针增量法回收率RR与减量法损失率RL近似相等,且探针回收率与药物浓度无关,说明可用反透析法进行体内回收率的测定;在大鼠体内微透析回收率考察中,血液和脑探针10h回收率保持相对稳定,但不同探针相对回收率之间存在一定的差异性.结论:所建立的芒柄花素、芍药苷血液和脑微透析方法可用于大鼠体内和脑局部药动学研究,反透析法可作为同时研究芒柄花素,芍药苷探针体内回收率的测定方法.
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灌流液改性剂对环维黄杨星D微透析探针回收率的影响研究
目的 考察灌流改性剂对环维黄杨星D微透析探针回收率的影响,验证使用改性灌流液条件下微透析探针体外相对回收率与相对损失率的一致性,为体内微透析研究提供实验依据.方法 采用高效液相色谱法测定灌流液中环维黄杨星D含量,计算不同改性灌流液条件下微透析探针的体外相对回收率,优选合适的改性剂种类与用量,再分别采用增量法与减量法计算不同药物浓度水平下探针体外相对回收率与相对损失率,比较两者结果的一致性.结果 常规灌流条件下,乙醇作为灌流液改性剂对环维黄杨星D相对回收率提高较多,优选灌流液配比为30％乙醇-林格氏液.在2.53～10.12 μg·mL-1内环维黄杨星D体外相对回收率和相对损失率具有高度的一致性.结论 选择合适的灌流液改性剂可显著提高微透析探针相对回收率水平,对于同一根微透析探针环维黄杨星D体外相对回收率与外周液药物浓度无关,探针回收率可通过药物透过半透膜时的流失量来间接计算,结果较好地证明反透析法适合于环维黄杨星D微透析采样.
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吴茱萸碱和吴茱萸次碱体外微透析回收率的测定
目的:研究吴茱萸碱和吴茱萸次碱微透析探针体外回收率及传递率与流速、药物浓度之间的关系.方法:浓差法(正、反向透析法)考察流速及药物浓度对微透析探针的体外回收率和传递率的影响,以HPLC法测定微透析样品中EVO、RUT浓度.结果:探针体外回收率与传递率基本一致,均与灌流速度成反比,药物浓度对其影响不大.结论:在吴茱萸碱和吴茱萸次碱的药动学研究中,可采用反透析法作为探针回收率的测定方法.
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盐酸小檗碱微透析探针的体内外回收率实验研究
目的:研究微透析探针的体外回收率与灌流速度和盐酸小檗碱浓度之间的关系,确定回收率的校正方法.方法:利用高效液相色谱法测定透析液中盐酸小檗碱含量,采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.05 mol· L-1磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH为3.0)(35∶65),流速1 mL·min-1,检测波长346 nm,柱温30 ℃.计算不同灌流速度、不同盐酸小檗碱浓度时,正、反透析法测得的探针体外回收率.同时测定固定流速下,不同药物浓度时探针的体内回收率.结果:在体外回收率实验中,将盐酸小檗碱质量浓度定为5.0μg· mL-1,灌流速度分别为1、2和3μL· min-1时,透析法测得的回收率依次为(73.6±5.4)％、(60.4±5.8)％和(35.2±6.3)％;反透析法测得的回收率依次为(70.2±7.0)％、(62.6±4.7)％和(32.5±8.3)％.在体内回收率实验中,将灌流速度定为2μL· min-1,盐酸小檗碱灌流液浓度分别为0.1、0.5和5.0 μg·mL-1时,体内回收率依次为(51.4±3.5)％、(53.2±2.7)％和(52.6±2.4)％.探针回收率与盐酸小檗碱浓度无关,与流速成反比.体外回收率实验中,透析法与反透析法测得的回收率相近.结论:在用微透析法对盐酸小檗碱生物样品取样时,可采用反透析法对探针回收率进行校正.
