首页 > 文献资料
-
祛痰活血颗粒对NAFLD模型大鼠脂肪组织AQP-7,p38MAPK表达的影响
目的:探讨祛痰活血颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的作用,并探讨其相关的作用机制.方法:40只SD大鼠随机分成正常组(6只),模型组(34只);除正常组外,采用高脂饮食诱导的方法诱导NAFLD大鼠模型,确认造模成功后,将剩余模型组(30只)随机分为5组,每组6只,分别为模型组,祛痰活血颗粒高、中、低剂量组(10,5,2.5 g·kg-1),SB203580组(3 mg·kg-1),分别予以灌胃祛痰活血颗粒及腹腔注射p38MAPK抑制剂SB203580,连续干预4周.苏木素-伊红(HE)及油红O染色观察肝脏病理变化;试剂盒测定血清甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),肝脏TG;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测脂肪组织水通道蛋白7(AQP7)及p38分裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK) mRNA表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝脏游离脂肪酸(FFA),脂肪组织AQP7和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,血清TG,TC,AST,ALT和肝脏TG,FFA明显升高,脂肪组织中AQP7 mRNA及AQP7含量表达降低,p38MAPK mRNA及p-p38MAPK含量升高(P＜0.05);与模型组比较,祛痰活血颗粒和SB203580可减轻NAFLD大鼠肝脏脂肪变性程度;明显降低NAFLD大鼠的血清TG,TC,AST,ALT,肝脏TG,FFA(P ＜0.05);各中药组和SB203580组大鼠脂肪组织AQP7 mRNA和AQP7含量表达明显升高,p38MAPK mRNA和p-p38MAPK含量明显降低(P＜0.05).结论:祛痰活血颗粒能减轻或者逆转肝脏的脂肪变性,其机制可能与抑制脂肪组织p38M APK活化、上调AQP7表达,增加甘油人血代谢,减少进入肝脏的FFA,从而降低肝脏TG蓄积有关.
-
高表达水通道蛋白7的脂肪细胞的脂代谢的研究
目的 研究高表达AQP7的3T3-L1脂肪细胞的脂代谢变化.方法 构建高表达的AQP7的3T3-L1脂肪细胞,测定AQP7mRNA和AQP7蛋白表达的变化,以及脂代谢指标甘油和脂肪酸的变化.结果 与对照组比较AQP7mR-NA和AQP7蛋白表达明显增加差异有统计学意义(P<0.01),培养基中甘油的水平也升高差异有统计学意义(P<0.05),脂肪酸的水平无变化差异有统计学意义(P>0.05).结论 高表达的AQP7蛋白,可显著减少脂肪细胞内甘油,减少脂肪细胞体积,减轻胰岛素抵抗.
-
自发2型糖尿病模型OLETF大鼠脂肪组织水通道蛋白7表达水平的研究
目的:观察水通道蛋白7在白发糖尿病模型OLETF大鼠不同糖尿病病程的皮下和附睾脂肪组织中的表达,探讨AQP7与肥胖糖尿病的关系.方法:OLETF大鼠组分为未治疗组(OLETF组)及盐酸二甲双胍治疗组(OLETF/M组).观察不同周龄时大鼠的体重、血清甘油三酯、胆固醇、甘油、葡萄糖耐量实验血糖与胰岛素以及皮下和附睾脂肪组织AQP7 mRNA和AQP7蛋白含量的变化.Realtime PCR测定AQP7 mRNA水平,Western blotting测定AQP7蛋白含量.结果:随周龄增加,肥胖、血脂紊乱加重,胰岛素抵抗明显,血糖增高.OLETF组皮下脂肪AQP7 mRNA及蛋白表达为逐渐上调趋势,附睾脂肪AQP7 mRNA及蛋白表达先上调后下调,皮下脂肪AQP7 mRNA及蛋白表达上调幅度大于附睾脂肪AQP7.盐酸二甲双胍改善了OLETF/M组大鼠的脂代谢和糖代谢紊乱,且OLETF/M组皮下及附睾脂肪组织AQP7 mRNA及蛋白表达上调幅度均低于OLETF组.结论:皮下及附睾脂肪组织的AQP7在肥胖和糖尿病的发生发展中起一定作用.
-
水通道蛋白7基因多态性及单倍型与肥胖的相关性研究
目的 探讨水通道蛋白7(AQP7)基因多态性及单倍型与肥胖的相关性.方法 将1559例流调人群按WC分为肥胖组和非肥胖组(对照组).应用PCR及直接基因测序方法对AQP7基因SNP-1123和SNP-953位点进行基因分型,并构建单倍型.结果 肥胖组和对照组SNP-1123和SNP-953基因型频率差异无统计学意义,而-1123C/T等位基因频率差异有统计学意义(P＜0.05).性别分层后女性-1123CC型与-1123XT(CT+TT)型比较,发生肥胖风险增加(P＜0.01,OR=1.48,95％ CI:1.12～1.97)；两组中女性SNP-1123T-SNP-953A单倍型肥胖风险减少(P＜0.01,OR=0.71,95％CI:0.56～0.92).结论 女性中,AQP7基因SNP-1123CC型可能增加患肥胖风险；女性SNP-1123T-SNP-953A单倍型可能减少患肥胖风险.
-
妊娠期糖尿病与体质量指数的研究新进展
妊娠期糖尿病(GDM)为糖尿病的特殊类型,对母体和胎儿都有不利的影响,GDM孕妇的体质量指数(BMI)较正常孕妇的BMI均高,且以脂肪组织增多为主,具有更强的胰岛素抵抗,并且胰岛β细胞分泌降低是GDM发病的重要环节.肥胖与水通道蛋白7蛋白转运甘油的通道影响着三酰甘油的代谢.GDM发病也与趋化素、重组人脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4脂肪因子关系密切.
关键词： 妊娠期糖尿病 体质量指数 水通道蛋白7 趋化素 重组人脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4 -
加压素对大鼠内耳水通道蛋白7表达的影响
目的 观察加压素对大鼠内耳水通道蛋白7(AQP7)表达的影响,探讨加压索引起膜迷路积水发生机制中水通道的作用.方法 大鼠腹腔注射精氨酸加压素50 μg/kg,每天1次,共1周.采用大鼠eDNA芯片技术显示加压素注射前后大鼠内耳mRNA表达强度变化.使用RT-PCR技术测量加压素注射前后大鼠内耳AQP7 mRNA表达水平变化.结果 基因芯片筛选出大鼠内耳水通道蛋白差异表达基因AQP7,RT-PCR显示AQP7 mRNA表达显著减少.结论 加压素可能引起内淋巴囊AQP7表达减少,影响内淋巴液吸收,引起Corti器钾离子循环通路水渗透性下降,影响内淋巴液循环,从而导致膜迷路积水.
-
3T3-L1脂肪细胞水通道蛋白7对胰岛素信号通路的影响
目的 探讨3T3-L1脂肪细胞水通道蛋白7(AQP7)的表达对胰岛素信号通路的影响,寻求改善胰岛素抵抗的新途径.方法 体外培养3T3-L1脂肪细胞,以油红O染色鉴定分化成熟的脂肪细胞.以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理脂肪细胞,检测葡萄糖代谢能力以及培养基中甘油浓度的变化;同时分别用荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分析AQP7的表达水平.以腺病毒为载体高表达AQP7,检测胰岛素信号通路上胰岛素受体底物1(IRS-1)、蛋白激酶B(PKB)及其磷酸化蛋白水平的改变,从而阐明AQP7表达与胰岛素抵抗的关系.用SPSS 17.0软件进行统计学分析,两组计量资料的比较用独立样本t检验,多组计量资料的比较用单因素方差分析.结果 TNF-α作用分化成熟的脂肪细胞24h构建胰岛素抵抗模型,与空白对照组比较,葡萄糖代谢水平下降50％,甘油浓度减少35％,而AQP7 mRNA及蛋白水平分别下调了75％和28％,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).在胰岛素抵抗状态下,胰岛素刺激下的PKB磷酸化蛋白(p-PKB)、IRS-1酪氨酸632磷酸化蛋白(p-tyr632)及IRS-1总蛋白表达受到抑制,而IRS-1丝氨酸307磷酸化蛋白(p-ser307)异常升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).以腺病毒为载体转染脂肪细胞高表达AQP7,随着AQP7表达上调,可逆转TNF-α的这些作用.结论 AQP7可能参与胰岛素抵抗的分子机制,高表达AQP7对改善胰岛素抵抗的基因治疗有一定的指导意义.
-
水通道蛋白7与胰岛素分泌和胰岛素抵抗的关系
水通道蛋白(AQPs)是一类介导水跨细胞膜转运的膜蛋白〔1〕,迄今已在哺乳动物中共发现了13种AQPS(AQP0 ~12)〔2〕.依据AQPS的通透性,研究者将其分为AQPS、水甘油通道蛋白和超 AQPS 3个亚族.其中,AQPS仅能对水进行高度选择性转运,水甘油通道蛋白除对水具有通透性以外,还可介导甘油、尿素等小分子的跨膜运输,而超AQPS的功能还不清楚.AQP7属于水甘油通道蛋白一族,其在维持机体能量平衡和糖稳态中起重要作用.本文就AQP7在胰岛素分泌中的作用及与胰岛素抵抗(IR)的关系进行综述.
-
高表达AQP7改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的机制研究
目的 探讨脂肪细胞中水通道蛋白7(AQP7)表达与胰岛素抵抗的关系.方法 培养3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化为成熟的脂肪细胞,并用地塞米松(DXM)处理建立胰岛素抵抗模型.构建Ad-AQP7重组腺病毒,转染胰岛素抵抗的脂肪细胞,检测AQP7表达水平的改变与脂肪细胞甘油释放水平、葡萄糖代谢能力以及磷酸化PKB表达改变的关系,从而阐明AQP7改善胰岛素抵抗的可能机制.结果 100 nmol/L DXM作用分化成熟的脂肪细胞诱导胰岛素抵抗,48 h后p-PKB水平和葡萄糖消耗量明显减少(P＜0.01),为胰岛素抵抗的佳状态.胰岛素抵抗状态下AQP7 mRNA和蛋白水平明显减少(均P＜0.01).Ad-AQP7腺病毒转染胰岛素抵抗的脂肪细胞72h,随着AQP7表达增加,培养基中甘油释放浓度增加,胰岛素刺激下的p-PKB水平呈现同样上升趋势,并且葡萄糖代谢能力得到明显改善.结论 AQP7可能参与胰岛素抵抗的分子机制;高表达AQP7可改善胰岛素抵抗,其机制可能与PKB信号通路改善有关.
-
高脂膳食对雄性肥胖大鼠肾周脂肪水通道蛋白7表达的影响
目的：观察高脂膳食诱导肥胖模型大鼠肾周脂肪水通道蛋白7mRNA的表达情况，探讨其在肥胖发生中的作用。方法：将48只雄性SD大鼠随机分为对照组和造模组，分别喂基础饲料和高脂饲料。8周末造模组按体重筛选出高脂膳食诱导肥胖模型大鼠（DIO组）继续高脂喂养至20周。于第8周和第20周分别处死一批大鼠，计算Lee’s指数、肝/体比和脂/体比，检测血脂水平，实时定量聚合酶链反应测定肾周脂肪水通道蛋白7 mRNA表达水平。结果：8周末，DIO组大鼠体重、Lee’s指数、肝/体比、脂/体比和血清TG含量明显高于对照组（P<0.01或P<0.05），喂养至20周，上述指标均进一步明显增高（P<0.01），血清TC和LDL-C水平也升高（P<0.01或P<0.05）。DIO组肾周脂肪组织水通道蛋白7 mRNA表达水平于8周明显上调（P<0.01），20周下调（P<0.05）。结论：肾周脂肪组织水通道蛋白7可能在不同程度肥胖中发挥不同作用。
关键词： 肥胖症 水通道蛋白7 脂肪 实时荧光定量聚合酶链反应 大鼠 -
大鼠AQP7基因重组腺病毒载体的构建及其在3T3-L1脂肪细胞中的表达
目的:构建携带大鼠AQP7基因的腺病毒载体,并检测其在3T3-L1脂肪细胞中的表达.方法:采用RT-PCR方法,从大鼠脂肪组织中扩增克隆大鼠AQP7基因,插入到穿梭质粒中获得重组质粒pDC316-AQP7.PCR、酶切鉴定后,重组穿梭质粒和骨架质粒经脂质体2000转染293细胞出毒产生重组腺病毒.经PCR进行鉴定,转染293细胞扩增并纯化,半数组织培养感染剂量(TCID 50)方法测定腺病毒滴度.体外转染分化成熟的3T3-L1细胞,用Western blot方法检测AQP7的表达水平.结果:PCR、酶切及测序证实重组穿梭质粒构建正确.同时成功构建AQP7重组腺病毒,并制备出高滴度的病毒保存液,可以有效转染3T3-L1细胞.结论:成功构建了含大鼠AQP7基因的重组腺病毒载体且其可以在3T3-L1细胞中有效表达,为今后更好地研究AQP7在肥胖发生发展过程中的调控机制奠定了基础.
-
高脂诱导胰岛素抵抗大鼠对不同脂肪组织水通道蛋白7的影响
目的 研究胰岛素抵抗大鼠不同脂肪组织水通道蛋白7(AQP7)的表达水平,探讨AQP7与脂肪组织发生胰岛素抵抗的关系.方法 20只雄性SD大鼠随机分为对照组(CG)和高脂喂养诱导胰岛素抵抗模型组(IRG).观察两组大鼠体重变化,检测TG、TC、HDL-C、LDL-C、甘油、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)及脂肪因子的水平,同时比较皮下脂肪和附睾脂肪组织AQP7 mRNA、蛋白以及不同脂肪组织蛋白激酶B(PKB)及磷酸化蛋白的表达水平.结果 至12周末,IRG组较CG组血清LDL、FBG、FINS、IL-6、TNF-α及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显升高(P＜0.05或0.01),而HDL、脂联素水平下降(P＜0.05).对mRNA和蛋白检测发现,在IRG组中内脏脂肪组织AQP7表达水平高于皮下脂肪组织,并且较CG组升高.在IRG组中内脏脂肪组织PKB磷酸化蛋白表达水平较皮下脂肪表达下降,并且较CG组下降.结论 内脏脂肪组织AQP7的异常表达,可能与胰岛素抵抗的发生有关.
-
水甘油通道蛋白在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达及意义
目的 研究水甘油通道蛋白(aquaglyceroporins)AQP3、AQP7、AQP9基因在油酸钠诱导的脂肪变性肝细胞模型中的表达变化及其意义.方法 以常规培养的人肝癌HepG2细胞为对照,采用油酸钠诱导HepG2细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪变性肝细胞模型,利用油红O染色及细胞内甘油三酯含量测定检测肝细胞脂肪变性程度,并分别于0、12、24、48 h采用实时荧光定量PCR与Western blot方法检测水甘油通道蛋白AQP3、AQP7、AQP9基因的表达.结果 油红O染色观察及肝细胞内甘油三酯含量测定显示HepG2细胞在油酸钠处理12 h后即开始出现脂肪变性,随着刺激时间延长,脂肪变性程度逐渐加重,肝细胞内甘油三酯含量在48 h组(79.76±0.75)较0h组明显升高(P＜0.05).模型组中,AQP3mRNA水平12h时表达开始减低,48 h时(0.39±0.08)表达低,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05)；AQP7mRNA表达与对照组相比略有升高,差异无统计学意义(P＞0.05)；而AQP9 mRNA表达水平自12 h(1.59±0.11)即开始增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).模型组中,AQP3蛋白水平12 h时表达开始减低,24、48 h组[ (0.016±0.002),(0.012±0.001)]与对照组相比差异具有统计学意义(P ＜0.05)；AQP7蛋白表达与对照组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)；AQP9蛋白水平12 h表达开始增高,24、48 h[(0.050 ±0.002)、(0.079 ±0.002)]组与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 肝细胞脂肪变性模型中水甘油通道蛋白AQP3表达下调、AQP9表达上调、AQP7表达无明显差异,提示不同亚型的水甘油通道蛋白可能通过不同的机制参与了肝细胞非酒精性脂肪变性.
