首页 > 文献资料
-
一例狂犬病病例的实验室诊断及其启示
目的 通过1例人狂犬病病例的实验室确诊探讨人狂犬病病例实验室诊断的可行性及其对狂犬病防控的意义.方法 对存活疑似人狂犬病病例的唾液、脑脊液、血清标本采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)进行实验室确诊;通过RFFIT对密切接触个例血清抗狂犬病病毒中和抗体进行检测.结果 病例唾液标本用RT-PCR方法检测获得狂犬病病毒核蛋白、RNA聚合酶基因预期扩增片段,序列测定和分析进一步证实为狂犬病病毒.病例血清标本经RFFIT检测抗狂犬病病毒中和抗体阳性.1名病例密切接触者按照狂犬病暴露进行暴露后预防处置,血清抗狂犬病病毒中和抗体检测为阳性.结论 1例疑似人狂犬病病例经实验室诊断确诊为狂犬病病例,实验室检测结果对指导个案处置有现实意义.
关键词： 狂犬病 反转录-聚合酶链反应 快速荧光灶抑制试验 实验室诊断 -
快速荧光灶抑制试验检测暴露后人群接种狂犬病疫苗的免疫学效果
目的 调查暴露后人群接种狂犬病疫苗(Rabies Vaccine for Human Use,RabV)的免疫学效果.方法 122例暴露后,病例接种RabV后应用快速荧光灶抑制试验检测抗体产生情况.结果 3剂免疫后抗体阳性率达99.1％,5剂免疫后抗体阳性率为100％；不同性别病例抗体几何平均滴度差异无统计学意义.青少年接种RabV的应答较快,中老年接种RabV的应答较慢.结论 对要确定是否需要接受RabV加强接种以建立一个可接受的暴露前免疫状态,对有免疫缺陷等身体状况特殊者,有必要检测接种RabV后的中和抗体,对未产生抗体者应及时补充免疫,确保免疫学效果.
-
快速荧光灶抑制试验对我国部分肾综合征出血热毒株及病人血清的分型研究
目的:探讨肾综合征出血热(HFRS)毒株及病人血清分型方法.方法:快速荧光灶抑制试验(RFFIT).结果:6株来自黑线姬鼠和病人的毒株,其免疫血清对Ⅰ型标准株76-118的中和效价较Ⅱ型标准株(UR)高4～256倍;而另6株来自褐家鼠和大白鼠的毒株,包括Gou3和K24的免疫血清,对Ⅱ型标准株UR的中和效价高于Ⅰ型76-118株8～128倍;被检的所有毒株和病人血清都能准确地分型.结论:RFFIT具有快速、简便、特异和准确灵敏的特点,不仅可检测中和抗体,且适用于HFRS病毒血清学分型.
-
人二倍体细胞狂犬病疫苗免疫8年后加强免疫效果研究
目的 揭示人二倍体细胞狂犬病疫苗(human diploid cell rabies vaccine,HDCV)免疫8年后加强免疫的效果.方法 选取参加过冻干HDCV临床Ⅲ期全程免疫的对象60例,在初次免疫8年后进行单剂加强免疫.观察加强免疫后的不良反应情况,在加强免疫前和加强免疫后14 d分别采集血清,采用快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测狂犬病病毒中和抗体(rabies virus neutralizing antibody,RVNA).对加强免疫前后的RVNA阳性率和几何均值(geometric mean titer,GMT)进行比较.结果 54例受试者完成随访和RVNA检测.受试者在加强免疫后30 min及随访15 d期间未发生不良反应.加强免疫前和加强免疫后RVNA阳性率为51.85％ (28/54)、96.30％ (52/54).加强免疫前和加强免疫后RVNA的GMT为1.42 IU/ml、30.61IU/ml.结论 冻干HDCV免疫8年后单剂加强免疫效果良好.
关键词： 狂犬病 人二倍体细胞狂犬病疫苗 快速荧光灶抑制试验 中和抗体 -
狂犬病疫苗和人狂犬病免疫球蛋白联合应用早期免疫效果分析
目的 揭示狂犬病疫苗和人狂犬病免疫球蛋白(human rabies immunoglobulin,HRIG)联合应用早期免疫效果.方法 采用快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测观察对象血清狂犬病病毒中和抗体(rabies virus neutralizing antibodies,RVNA),比较狂犬病III级暴露人群联合使用狂犬病疫苗和HRIG后第0、1、7、14、45天的RVNA水平,进一步分析不同性别、年龄组、接种方案免疫效果的差异和变化趋势.结果 在免疫后的相同时间,不同性别、年龄组、接种方案之间比较,各组血清阳转率(seroconversion rate,SCR)差异无统计学意义,在第14天均能达到100％阳转率;前14天的RVNA效价波动曲线存在多种方式,既有逐步上升,也有快速上升和快速下降的不同现象.结论 狂犬病疫苗和HRIG联合应用后,前14天的RVNA动态曲线呈现多样性,在此期间不能从RVNA水平证实全部观察对象得到有效保护.
-
狂犬病病毒抗体胶体金检测试剂实际效能评价
目的 评价狂犬病病毒抗体胶体金(colloidal gold,CG)检测试剂的实际效能.方法 采用狂犬病病毒抗体CG检测试剂和快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测狂犬病免疫球蛋白系列稀释品和狂犬病疫苗免疫人群血清样品,比较2种方法检测狂犬病病毒抗体定性结果的一致性,率的比较采用四格表卡方检验.结果 对狂犬病免疫球蛋白稀释品,狂犬病病毒抗体CG检测试剂的检出限高于6.53 IU/ml而低于9.53 IU/ml;对血清样品,狂犬病病毒抗体CG检测试剂的检出限高于2.80 IU/ml而低于3.30 IU/ml.CG和RFFIT检测血清狂犬病病毒抗体的阳性率分别是26％和67％,差异具有统计学意义(x2=13.66,P=0.000).以RFFIT检测结果为金标准,狂犬病病毒抗体CG检测试剂在实际检测中存在假阴性结果,但是不存在假阳性结果.结论 狂犬病病毒抗体CG检测试剂灵敏性差,实际应用时应注意漏检现象.
-
基于狂犬病病毒CVS-11假病毒的中和抗体检测新技术及初步应用
目的：建立一种可替代快速荧光灶抑制试验( RFFIT法)的简易高通量狂犬病病毒中和抗体( RVNA)检测技术。方法我们构建了表达荧光素酶报告基因与CVS-11包膜蛋白的狂犬病病毒假病毒,建立了狂犬病病毒中和抗体检测技术(改良RFFIT方法),与标准RFFIT方法结果平行比较,并进一步应用于北京地区宠物犬与饲养人群血清中和抗体检测。结果改良RFFIT方法与标准RFFIT方法平行检测的46份待检血清与5份阴性参比血清,符合率为100%,且使用CVS-11假病毒测得的样品RVNA数值与标准RFFIT所得数值高度相关(n=46, r=0.94, P<0.0001)。改良RFFIT方法用于北京地区宠物犬与饲养人群血清中RVNA滴度测定,均为阳性,其平均IU值为33.01 IU/ml。结论基于狂犬病病毒CVS-11假病毒的中和抗体检测技术简易高效,可替代传统RFFIT方法。本研究中北京地区宠物犬与饲养人群91份样本均可检出明显的狂犬病病毒保护性中和抗体。
-
人狂犬病病毒抗体检测技术研究进展
人狂犬病病毒中和抗体(rabies virus neutralizing antibody,RVNA)检测的标准方法是小鼠脑内中和法(mice neutralizationtest,MNT)和快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT).酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)、胶体金(colloidal gold,CD)法是MNT、RFFIT替代性检测方法.改良RFFIT包括结果判读自动化和以表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组狂犬病病毒替代CVS-11.优秀的ELISA试剂检测结果与RFFIT高度一致.CG试剂在检测灵敏性方面有待提高.持续改进人狂犬病病毒抗体检测方法仍然具有现实意义.
-
抗狂犬病病毒中和抗体效价快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的建立及应用
目的 建立抗狂犬病病毒中和抗体效价的快速荧光灶抑制试验(RFFTT),验证其与小鼠脑内中和法(MNT)的相关性,并用于马抗狂犬病病毒血清(ERIG)和人狂犬病免疫球蛋白(HRIG)及狂犬病疫苗免疫后血清中和抗体效价的测定.方法 待测血清或免疫球蛋白在96孔板中作3倍系列稀释,与能感染80%～95%细胞量的攻击病毒混合后,37℃体外中和1h,接种BSR细胞,培养24 h后荧光染色,荧光显微镜下读取结果.用建立的RFFTT法与MNT法同时标定狂犬病免疫球蛋白国家标准品,并检测ERIG和HRIG以及疫苗免疫后血清样品的抗狂犬病病毒中和抗体效价,以比较两种方法的精密度和相关性.结果 采用MNT法和RFFTT法检测我国抗狂犬病免疫球蛋白国家标准品的GMT分别为21.4和23.8 IU/ml,两种方法的变异系数分别为62.3%和13.3%;两个实验室用RFFIT法测定我国国家标准品的结果分别为21.71和23.81 IU/ml.两种方法测定ERIG和HRIG及疫苗免疫后血清中和抗体效价的结果差异无统计学意义,相关系数为0.976.两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性.结论 RFFIT法可替代MNT法检测抗狂犬病病毒中和抗体效价.
-
胸腺肽联合狂犬病疫苗接种对机体产生γ-干扰素、白细胞介素-2和中和抗体影响的研究
目的:观察胸腺肽联合狂犬病疫苗接种对机体γ-干扰素、白细胞介素-2和中和抗体产生的影响.方法:Ⅱ级以下狂犬病暴露人群100例随机分为两组:疫苗组50例,单用狂犬疫苗2.5 U,常规免疫程序接种;胸腺肽组50例,给予50 mg单剂量肌肉注射+狂犬疫苗2.5 U,常规免疫程序接种.在注射前(D0)、注射7 d(D7)、注射6个月(M6)、注射12个月(M12)测定外周血淋巴细胞总数及γ-干扰素、白细胞介素-2水平,注射7 d、注射6个月、注射12个月测定中和抗体水平.结果:外周血淋巴细胞总数两组间无差异;胸腺肽组在注射后7 d白细胞介素-2水平和γ-干扰素水平均高于疫苗组(P<0.05); 胸腺肽组在注射后7 d中和抗体产生量高于疫苗组(P<0.05).结论:加用胸腺肽组注射后7 d中和抗体水平高于单用疫苗组,但6个月和12个月的抗体含量没有差异;两组接种后体内白细胞介素-2和γ-干扰素水平皆增高,白细胞介素-2增加的程度和抗体的产生量呈正相关.
-
狂犬咬伤者接种狂犬病疫苗的效果观察
丽水市2008-2011年共有20例被狂犬和野生动物鼬獾咬伤,其中13只暴露动物脑组织标本经本中心实验室应用病原学(DFA)和分子生物学(RT-PCR)方法均检测到狂犬病病毒,送中国疾病预防控制中心(疾控中心)病毒所复核后结果一致.20例暴露者经规范伤口处理,并接种某国产狂犬病疫苗,为了测定接种对象在暴露治疗后的抗体水平从而判定疫苗的免疫效果,采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)[1]检测被接种者血清狂犬病病毒抗体滴度水平,现报告如下.
-
狂犬病病毒中和抗体检测快速荧光灶抑制试验的建立
RFFIT是WHO推荐的检测狂犬病病毒中和抗体的标准实验方法[1],美国疾病预防控制中心狂犬病实验室、法国巴斯德研究所狂犬病实验室等国际知名狂犬病研究机构都采用该方法进行狂犬病病毒中和抗体检测,保护水平的中和抗体效价应≥0.5 IU/ml.
-
人抗狂犬病病毒IgG抗体3种检测系统的可比性研究
目的 对比人抗狂犬病病毒IgG抗体定量测定酶联免疫试验(ELISA)试剂盒Autobio RABV-IgG ELISA、快速荧光灶抑制试验(RFFIT)以及BIO-RAD公司生产的PLATELIATM RABIESⅡKIT,检测狂犬病疫苗免疫后人血清抗狂犬病病毒IgG抗体水平的差异.方法 收集狂犬病疫苗免疫前、免疫后临床血清样本共110份,使用RFFIT确定阳性标本(≥0.5 IU/ml)46份、阴性标本(＜0.5 IU/ml)64份,分别用Autobio RABV-IgG ELISA及PLATELIATMRABIESⅡKIT同时对人抗狂犬病病毒IgG抗体进行测定,对比3种检测系统对人抗狂犬病病毒IgG抗体检测结果的阴性符合率、阳性符合率及一致性.结果 PLATELIATM RABIESⅡKIT与RFFIT的符合率为92.7％;Autobio RABV-IgG ELISA与RFFIT的符合率为91.8％,与PLATELIATM RABIESⅡKIT的符合率为97.3％.结论 3种检测系统之间呈现良好的符合率,Autobio RABV-IgG ELISA可用于人抗狂犬病病毒IgG抗体检测.
-
郑州市狂犬疫苗接种人群免疫效果分析
目的 了解河南省郑州市狂犬病暴露后人群接种狂犬疫苗的群体免疫效果.方法 收集狂犬病暴露人群免疫前和免疫后血清标本,以快速荧光灶抑制试验(RFFTT)检测抗狂犬病病毒中和抗体(RVNAs),采用SPSS 17.0软件进行统计学分析.结果 RFFIT检测结果及统计学分析显示,2份免疫前血清RVNAs＞0.5 IU/ml,免疫后血清RVNAs呈阳性;狂犬疫苗免疫前后RVNAs差异有统计学意义(Z=-7.009,P=0.000),免疫后血清阳转率在性别和年龄方面差异无统计学意义(Z=-1.287,P=0.18和x2=2.606,P=0.626);免疫后RVNAs与接种者性别差异有统计学意义(Z=-2.229,P=0.026),与接种者年龄差异无统计学意义(x2=6.197,P=0.185);RVNAs水平与免疫后年限差异有统计学意义(x2=18.654,P=0.000).结论 河南省郑州市狂犬病暴露后人群狂犬疫苗总体免疫效果良好,免疫前RVNAs＞ 0.5 IU/ml的个体应引起关注.
关键词： 狂犬病 暴露后免疫 快速荧光灶抑制试验 抗狂犬病病毒中和抗体 -
血清稀释条件对快速荧光灶抑制试验结果的影响
目的：对比不同倍比稀释条件稀释血清对快速荧光灶抑制试验（ RFFIT）结果的影响，以指导RFFIT在狂犬病防控中的应用。方法：采集65个健康个体和40个狂犬病暴露后预防处置（ PEP）个体的血清标本，分别进行3倍和5倍倍比稀释，采用RFFIT检测抗狂犬病病毒中和抗体（ RVNA）水平。结果：3倍倍比稀释时，RVNA检测结果显示：65个健康个体中，63人＜0．50 IU／mL，2人≥0．50 IU／mL；40个PEP个体均≥0．50 IU／mL。5倍倍比稀释时，RVNA检测结果显示：65个健康个体均＜0．50 IU／mL；40个PEP个体中，34例≥0．50 IU／mL，6例＜0．50 IU／mL，这6例PEP个体在3倍倍比稀释时RVNA呈弱阳性，效价在0．50～1．00 IU／mL。结论：以5倍倍比稀释条件稀释血清进行RFFIT检测时灵敏度降低，但是检测结果更能反映个体实际免疫状态，可能更有利于指导狂犬病PEP措施。
关键词： 抗狂犬病病毒中和抗体 快速荧光灶抑制试验 暴露后预防处置 -
改良抗体结合试验的建立和在灭活狂犬病疫苗效价检测中的应用
目的 对抗体结合试验(ABT)进行改进并将其用于灭活狂犬病疫苗效力的测定.方法 将快速荧光灶抑制试验(RFFIT)与ABT方案融合,在疫苗样品稀释、剩余中和抗体检测、结果计算方面进行改进,形成改良抗体结合试验(M-ABT);应用M-ABT对10种灭活狂犬病疫苗随库存时间增加疫苗效力改变的情况进行检测.结果 M-ABT可以在28 h内完成,比ABT节省2 d,检测结果与人用狂犬病疫苗效价测定法(NIH)基本等效;10种疫苗随着库存时间增加疫苗效力下降.结论 M-ABT法能够成功建立,并用于灭活狂犬病疫苗效力检测效果较满意.
-
新型抗狂犬病病毒核蛋白抗体进行RFFIT检测效果评估
目的 评价自主研发的荧光标记抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体用于快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的效果.方法 将狂犬病病毒核蛋白的一段线性表位肽与KLH耦联后免疫Balb/c小鼠制备的高效价单克隆抗体抗-RVNP-Mcl,经浓缩、纯化、异硫氰酸荧光素(FITC)标记用于RFFIT检测,以Millipore公司DFA5100为对照试剂,对200例人血清进行平行RFFIT检测,将结果进行统计学分析.结果 两种抗体检测结果的线性相关分析显示相关系数(r)=0.980;两种抗体检测定性结果一致率为96.83%,卡方检验显示两种抗体检测定性结果差异无统计学意义(χ2 =0.098,P>0.05),发生定性结果不一致的6例(3.00%)血清两种抗体检测结果均小于1 IU/mL;68例两种抗体检测结果均小于或等于1 IU/mL的血清样品中有6例(8.82%)发生结果定性不一致,其余样品均未发生不一致的情况.结论 使用荧光标记抗-RVNP-Mcl与DFA5100进行RFFIT检测时结果高度一致,荧光标记抗-RVNP-Mc1可供RFFIT检测使用.
-
采用快速荧光灶抑制试验对一种狂犬病病毒抗体竞争性ELISA检测法的评价
目的 以快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测结果为标准,确定竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血清样品中狂犬病病毒抗体的能效.方法 对100份人血清样品采用RFFIT检测狂犬病病毒中和抗体,采用竞争性ELISA检测狂犬病病毒抗体,分析两种方法检测结果的相关性和一致性.结果 经回归分析,两方法检测结果之间有线性关系,回归方程=2.320+0.333X,相关系数r=0.504;经χ2检验,两种方法阳性检出率差异无统计学意义(χ2 = 3.70,P>0.05),两种方法有相关性(χ2 = 16.50,P<0.05);经Scheffé可信区间法分析,RFFIT不同检测值范围内ELISA阳性检出率之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 本组评价的竞争性ELISA与RFFIT检测结果之间有相关性,但一致性较差,还需要进一步改进.
-
狂犬病病毒中和抗体检测试剂盒的效果评价
目的：应用快速荧光灶抑制试验（RFFIT ）对狂犬病病毒中和抗体检测试剂盒的检测效果进行评价。方法用RF‐FIT和狂犬病病毒中和抗体检测试剂盒分别对135份人血清和164份动物血清进行狂犬病病毒中和抗体（RVNA ）效价检测，应用SPSS22．0分析两种检测方法所得结果的相关性和一致性。结果两种方法所得结果的阳性检出符合率为99．33％（297／299）；两种方法对动物血清和人血清的检测结果之间有较好的直线相关关系，相关系数分别为0．897和0．941；同一份标本的重复性检验显示，试剂盒检测方法具有较好的稳定性。结论狂犬病病毒中和抗体检测试剂盒可以用于人和动物血清狂犬病病毒中和抗体的检测。
