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缺氧微环境对宫颈癌Hela细胞HIF-1α及VEGF-A表达的影响
目的:研究在缺氧微环境下人宫颈癌Hela细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子A(VEGF-A)的表达.方法:采用CoCl2构建Hela细胞体外缺氧微环境模型,使用CCK8法来检测细胞的增殖;使用实时荧光定量PCR法分别来检测HIF-1α和VEGF-A mRNA表达的变化;免疫细胞化学技术检测HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达.结果:CCK8检测结果发现,CoCl2诱导的缺氧微环境能降低Hela细胞的增殖活性,随着CoCl2浓度的增加其增殖活性逐渐降低,在150μmol/L时降到低,各浓度组间总体差异有统计学意义(F=10.118,P=0.001,P<0.05),在相同CoCl2浓度构建的缺氧微环境中,随着缺氧时间的延长,其细胞增殖活性逐渐降低,在12 h降至低,而后增殖活性增加,各时间组总体差异有统计学意义(F=9.727,P=0.002,P<0.005).实时荧光定量PCR结果发现同对照组比较,缺氧处理3 h,HIF-1α和VEGF-A的mRNA表达无明显差异(P=0.86,P=0.72,P>0.05);随着缺氧时间增加,HIF-1α的mRNA表达在12 h时达峰值,随后下降,各时间组比较差异有统计学意义(F=1.627,P<0.001).VEGF-A mRNA表达随着缺氧时间的增加逐渐增加,各时间组比较差异有统计学意义(F=7.407,P<0.001).HIF-1α和VEGF-A在mRNA表达水平上无相关性(r=0.647,P>0.05);免疫细胞化学检测发现,在150μmol/LCoCl2构建的缺氧微环境下,随着时间延长HIF-1α蛋白表达逐渐增加,在12 h达到峰值,而后下降(F=100.930,P<0.001);VEGF的蛋白表达随时间延长而逐渐增加(F=118.336,P<0.001).HIF-1α和VEGF-A在蛋白表达水平上呈正相关(r=0.892,P<0.05).结论:CoCl2诱导的缺氧微环境能使Hela细胞中HIF-1α的表达,促进其下游靶基因VEGF-A在mRNA及蛋白水平表达升高.
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肝再生过程中血管内皮生长因子C诱导LYVE-1+内皮细胞重建肝血窦
目的 探讨肝部分切除后,肝血窦重建的候选分子及机制.方法 肝脏部分切除后,用免疫组织化学染色法观察肝血窦重建过程.检测血管内皮生长因子A(VEGF-A)、VEGF-C、CD34、淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)的表达.结果 肝脏部分切除后,残留肝组织中VEGF-C均有表达.术后12h、第2天、第5天表达水平达到高峰;LYVE-1的表达与VEGF-C具有相似性,高峰期要比VEGF-C延迟1～2 d;VEGF-A只在肝再生早期及晚期表达;CD34阳性细胞集中分布于大的门静脉及其新生分支的周围.结论 在肝血窦重建中,VEGF-C诱导CD34阳性细胞表达LYVE-1,终分化为成熟的肝血窦内皮细胞.
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雷帕霉素对人淋巴瘤Raji细胞增殖、VEGF-A及HIF-1α表达的影响
目的:探讨雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji细胞体外增殖、VEGF-A及HIF-1α表达的影响及其临床意义.方法:不同浓度(0、10、50、100、250、500nmol/L)雷帕霉素对Raji细胞作用不同时间(24、48、72h)后,使用CCK8法检测细胞增殖的变化;采用蛋白质印记法(Western blot,WB)检测72h组不同浓度mTOR、VEGF-A、HIF-1α蛋白变化;采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测其mRNA的变化.结果:雷帕霉素对Raji细胞增殖具有显著抑制作用(P＜0.01);雷帕霉素处理72h后的Raji细胞,随着药物浓度增加,mTOR、VEGF-A和HIF-1 α蛋白明显减少(P＜0.01);雷帕霉素处理后的Raji细胞,随着药物浓度和作用时间的增加,mTOR、VEGF-A和HIF-1α的mRNA明显减少(P＜0.01);mTOR、VEGF-A及HIF-1α的mR-NA表达两两之间呈正相关性.结论:雷帕霉素通过mTOR通路,能明显抑制人淋巴瘤Raji细胞增殖过程,表现出明显的时间、剂量效应依赖关系;同时也可明显减少mTOR、VEGF-A、HIF-1α的mRNA的转录表达,减少p-mTOR、VEGF-A、HIF-1α等蛋白的翻译表达,从而抑制Raji细胞的生长及其血管新生.
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Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A在体外培养正常黑素细胞和不同黑素瘤细胞系中的表达
目的 检测Calcineurin/NFAT信号途径中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A分子在正常人黑素细胞和不同黑素瘤细胞系中的表达,初步探讨它们与黑素瘤发生、发展的关系.方法 选取正常人原代黑素细胞(MC)及来源于原位(WM793B)、侵袭性(LIBR)及转移性(SK-MEL-5)的黑素瘤细胞系,采用RT-PCR,Western blot检测四种细胞中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A的表达情况.结果 与正常人黑素细胞相比,在不同黑素瘤细胞系中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A 4个分子明显高表达.结论 Calcineurin/NFAT信号途径可能与黑素瘤的发生有关.
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ω-3多不饱和脂肪酸抑制小鼠视网膜新生血管的实验研究
目的:探讨膳食途径摄人ω-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)抑制小鼠视网膜新生血管的作用及其机制.方法:选取60只7日龄C57BL/6J小鼠随机分为3组:A组在正常环境中给予普通膳食饲养;B、C组是将小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为75％±2％的氧箱内饲养5d后转移至正常氧环境中饲养5d建立氧诱导视网膜病变模型,其中C组按体质量给予ω-3PUFAs 7.5mg/(kg·d)饲养,B组给予普通膳食饲养.分别于出生后17d时处死小鼠,铺片法计算视网膜新生血管相对面积,HE染色检测突破内界膜的血管内皮细胞核数目,GC-MS检测视网膜组织中ω-3PUFAs/∞-6PUFAs相对含量和比例,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)分析视网膜组织中过氧化物酶增殖活化受体-γ(preoxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)的mRNA表达.结果:出生后17d三组小鼠间新生血管面积及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数比较差异有统计学意义(F新生血管面积=20.45,P＜0.05;F内皮细胞核数=48.66,P＜0.05),新生血管面积A组与B组之间比较,差异有统计学意义(t=8.64,P＜0.05),C组与B组之间比较,差异有统计学意义(t=8.91,P＜0.05).HE染色法观察内皮细胞核数,A组与B组比较差异有统计学意义(t=38.51,P＜0.05);C组与B组比较差异有统计学意义(t=19.86,P＜0.05).三组小鼠视网膜ω-3PUFAs和ω-6PUFAs相对含量比较,差异有统计学意义(F=129.86、112.44,均P＜0.05),C组含量分别与A、B组比较,差异均有统计学意义(t=23.15、25.42;t=16.43、11.95,均P＜0.05);三组小鼠视网膜ω-3PUFAs/ω-6PUFAs比例、视网膜PPAR-γ mRNA表达、视网膜VEGF-A mRNA表达、视网膜VEGFR-2 mRNA表达比较,差异有统计学意义(F比例=10.30,FppAR-γ=138.24,FVEGF-A=69.12,FVEGFR-2=52.45,均P＜0.05),C组ω-3PUFAs/ω-6PUFAs比例与B组比较提高,差异均有统计学意义(P＜0.05);C组PPAR-γ mRNA表达水平明显高于B组,C组VEGF-A mRNA表达水平及VEGFR-2mRNA表达水平低于B组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:通过膳食途径摄入一定量的ω-3PUFAs,可能通过上调ω-3PUFAs/ω-6PUFAs比例,激活PPAR-γ,进而减少VEGF-A和VEGFR-2表达,抑制视网膜新生血管形成.
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双丹明目胶囊对糖尿病大鼠模型视网膜VEGF家族表达的影响
目的:观察双丹明目胶囊对糖尿病大鼠模型视网膜VEGF家族因子VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c蛋白表达的影响.方法:将40只雄性SD大鼠,采用随机数字法分为A空白组、B模型组、C双丹明目组、D阳性对照组4组,每组10只20眼.将B、C、D三组实验大鼠采用STZ 50 mg/kg的剂量一次性大鼠尾静脉注射法建立糖尿病视网膜病变大鼠模型,造模后1wk开始连续灌胃用药,灌胃后4wk,处死动物,免疫组化法检测视网膜组织中VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c的表达.结果:成模后用药第4wk,模型组、双丹明目组、阳性对照组视网膜中VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c蛋白表达平均灰度值均低于正常组,平均光密度均高于正常组,其中模型组与正常组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);双丹明目组、阳性对照组VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c表达的平均灰度值均高于模型组(P<0.05),平均光密度值均低于模型组(P<0.01).结论:双丹明目胶囊能明显降低VEGF家族中VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c在糖尿病模型大鼠视网膜中的表达,对其视网膜有一定的保护作用.
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VEGF-A在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨VEGF-A在子宫内膜癌组织中的表达及意义.方法 应用免疫组化SP法检测30例子宫内膜癌及30例正常子宫组织中VEGF-A的表达情况.结果 VEGF-A在子宫内膜癌组织中的阳性表达明显高于正常子宫组织,二者之间有统计学差异(P＜0.05),在癌组织中,VEGF-A与患者年龄无关,但与肿瘤分期、病理分级有关.结论 VEGF-A与子宫内膜癌的发生发展过程有关,可能作为子宫内膜癌诊断、转移和判断预后的主要指标.
