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基于“二维特征鉴别法”的巴西草药TANCHAGEM 真伪鉴别
目的：综合巴西草药 TANCHAGEM 的化学与遗传学信息对其进行质量控制。方法利用“二维特征鉴别法”，即 DNA 条形码技术联用 HPLC 技术的方法，鉴定巴西草药 TANCHAGEM 的基原，并测定其大车前苷的含量。结果 DNA 条形码初步鉴定巴西草药 TANCHAGEM 为车前科车前属 Plantago L.植物，且与中药车前草相似度达99%以上；巴西车前草、中药车前草中均含有2010年版《中华人民共和国》(一部)规定指标成分大车前苷，含量分别为0.1025%和0.1030%。结论巴西草药 TANCHAGEM 为巴西车前草，其大车前苷含量与中药车前草含量相近。本实验为车前草品种的质量控制、资源普查、新品种选育提供一定的参考依据。
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HPLC法测定前列康复胶囊中大车前苷、朝藿定C和淫羊藿苷
目的：建立同时测定前列康复胶囊中大车前苷、朝藿定C、淫羊藿苷的HPLC法。方法安捷伦Zorbax C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈–0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱；柱温35℃；检测波长为0～30 min，330 nm（测定大车前苷），30～50 min，270 nm（测定朝藿定C、淫羊藿苷）；体积流量1.0 mL/min。结果大车前苷、朝藿定C、淫羊藿苷分别在10.08～201.60 ng、18.43～368.60 ng、52.25～1045.00 ng线性关系良好；平均回收率分别为100.6%、97.2%、97.2%，RSD值分别为1.5%、1.3%、1.2%。结论该方法操作简单，重复性好，可有效的控制前列康复胶囊的质量。
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HPLC法测定复方前列舒丸中6个活性成分
目的：建立HPLC法同时测定复方前列舒丸中大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷6个活性成分的方法。方法采用安捷伦Zorbax C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈–0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱；检测波长为330 nm（0～20 min，测定大车前苷）、283 nm（20～40 min，测定柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷）、270 nm（40～50 min，测定朝藿定C、淫羊藿苷）；柱温为35℃；体积流量为1.0 mL/min；进样量为5μL。结果大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷在10.11～202.20、49.62～992.40、15.46～309.20、44.62～892.40、18.39～367.80、52.18～1043.60 ng与峰面积线性关系良好。大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷的平均回收率分别为97.4%、98.8%、99.5%、98.9%、97.2%、95.6%，RSD 值分别为0.83%、1.2%、1.4%、1.5%、1.5%、1.0%。结论该方法稳定可靠、简便易行，同时测定复方前列舒丸中大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷6个特征性成分，为全面控制复方前列舒丸的质量提供了参考。
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车前草提取工艺及大车前苷含量测定
[目的]通过实验方法研究分析车前提取工艺.[方法]采用L9 (34)重复正交试验设计方法,将车前草中大车前苷含量设定为检验和评价指标,逐一考察乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)、乙醇用量(D),分析各因素对车前草中大车前苷提取率影响,优选出车前草的佳提取工艺条件和相关参数.采用HPLC方法对车前草提取液中所含大车前苷含量进行测定.[结果]乙醇浓度、提取次数和提取时间,以及溶媒量对车前草中大车前苷提取都能产生较为明显的影响,作用大小可排序为:提取次数＞提取时间＞溶媒量＞乙醇浓度.增加提取次数也可使得大车前苷提取率更高.[结论]车前草醇提物,大车前苷是主要有效成分之一.
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车前草醇提物治疗肾草酸钙结石的作用及其机制
目的:观察车前草醇提物对大鼠肾草酸钙结石形成的影响,并探讨其初步作用机制.方法:采用1％乙二醇联合2％氯化铵诱导大鼠肾草酸钙结石模型.收集各组大鼠尿量;采用化学比色法,检测各组大鼠尿中尿草酸(Ox)、镁离子(Mg2+)、肌酐(Cr)含量,血清及肾组织中钙离子(Ca2+)、BUN、Mg2+、Cr含量;采用荧光实时定量PCR和蛋白印迹法,分别检测各组大鼠肾组织NOX4、bikunin、Nrf2、HO-1、NQO1和γ-GCS mRNA和蛋白表达水平.结果:与模型组相比,车前草醇提物能显著提高大鼠尿量,提高尿液Ox、Mg2+、Ca2排泄量,降低血清和肾组织中Ca2+、BUN、Mg2+和Cr含量;此外还能降低肾组织NOX4蛋白表达,提高肾组织bikunin、Nrf2、HO-1、NQO1及γ-GCS mRNA和蛋白表达水平.结论:车前草醇提物可通过促进尿液排泄和上调bikunin、Nrf2/ARE通路相关因子表达,抑制大鼠肾草酸钙结石的形成.
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热痹清颗粒的质量标准提升研究
目的:建立热痹清颗粒的质量标准.方法:采用薄层色谱法(TLC)对热痹清颗粒中知母、赤芍、忍冬藤、车前草进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对热痹清颗粒中马钱苷、芍药苷进行含量测定,色谱柱为Wondasil C18 (4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为236 nm(马钱苷)、230 nm(芍药苷),柱温为30℃.结果:TLC斑点清晰,分离度良好,阴性对照无干扰;马钱苷、芍药苷分别在各自进样量范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数均在0.999 9以上,平均加样回收率分别为100.04％和98.35％,RSD分别为1.46和1.64(n=6).结论:该方法快速、准确、专属性强,可作为热痹清颗粒质量控制的方法.
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车前草配方颗粒正交提取工艺的研究
目的:优选车前草配方颗粒的佳提取工艺.方法:采用正交设计L9(3 4),以大车前苷含量、出膏率为指标,以加水量、提取时间、提取次数为参数进行提取工艺的优选.结果:佳工艺条件为10倍量的水,回流提取3次,每次1.5h.结论:优选得到的工艺稳定、合理、可行.
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HPLC法同时测定车前草中4种成分的含量
目的:建立HPLC法同时测定车前草中大车前苷、毛蕊花糖苷、木通苯乙醇苷B和木犀草苷含量的方法.方法:采用Agilent TC-C18(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱;柱温30℃;流动相为甲醇(A)-0.1％甲酸溶液(B),梯度洗脱;流速1.0 mL/min;检测波长330 nm.并采用聚类分析和主成分分析对两种基原车前草进行比较.结果:在上述色谱条件下,大车前苷、毛蕊花糖苷、木通苯乙醇苷B和木犀草苷获得良好分离;质量浓度分别在2.29～458 μg/mL(r1=0.9999)、2.65～530 μg/mL(r2=0.9999)、1.35～270 μg/mL(r3=0.9999)、1.60～ 320 μg/mL(r4=0.9999)范围内呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为98.84％、98.97％、98.94％、99.34％.比较发现两种基原车前草中4种成分差异明显,聚类分析和主成分分析可以将两者分开.结论:该方法简便、准确,重复性好,可为车前草的质量控制提供实验依据.
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大车前草与车前草的有效成分比较
目的 比较大车前草及车前草中大车前苷、总黄酮的含量差异.方法 采用HPLC法测定大车前苷,色谱柱为DikmaDiamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸(18∶82),流速1 mL· min-1,检测波长330 nm,柱温30℃.以70％乙醇为提取溶剂,以木犀草素为对照品;采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮.结果 大车前苷0.09 ～11.22 μg与峰面积呈线性(r=0.999),加样回收率为100.64％(RSD=0.95％),测得4批大车前草中大车前苷的含量为0.09％ ～ 1.36％,6批车前草中大车前苷的含量为0.14％ ～ 2.40％.总黄酮4.248～50.976 μg·mL-1与吸光度呈线性(r=0.999),加样回收率为100.13％(RSD=1.55％),测得4批大车前草中总黄酮含量为1.03％ ～ 4.86％,6批车前草中总黄酮的含量为1.31％～4.98％.结论 两种车前草中大车前苷的含量有一定差异,总黄酮含量较高且差异不大,这可能是导致其药效差异的物质基础.
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藏药大车前草中大车前苷的定性和定量分析
目的:建立藏药大车前草药材的定性定量方法.方法:以大车前苷为指标性成分,以硅胶G为吸附剂,乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(18∶3∶1.5∶1)为展开剂,紫外光灯(365 nm)下检测,建立大车前草药材的薄层色谱鉴别方法.用高效液相色谱法进行含量测定,DIKMA Diamonsil C18色谱柱(250×4.6 mm 5μm);流动相为乙腈-0.1％磷酸(18:82),流速:1 mL/min;检测波长330 nm;柱温:30℃.结果:大车前草药材薄层色谱在紫外光灯(365 nm)下检识,大车前苷呈亮蓝色荧光斑点,斑点清晰,分离效果佳;高效液相色谱法含量测定大车前苷在0.09～11.22μg呈线性(r=0.999);加样回收率为100.64％(RSD=0.95％);测得4批大车前草中大车前苷的含量在0.094％～1.361％.结论:通过对4批大车前草中的大车前苷进行定性和定量分析,证明所建立的薄层色谱鉴别和高效液相色谱法含量测定方法简便可靠,准确度高,重复性好,为大车前草的质量标准建立提供了实验依据.
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HPLC法测定车前草中大车前苷和毛蕊花糖苷含量
目的:建立测定车前草中大车前苷和毛蕊花糖苷含量的色谱方法,用于指导车前草药材的质量控制.方法:在中国药典色谱条件的基础上,增加毛蕊花糖苷为指标性成分,改变流动相、柱温等条件,建立同时测定大车前苷和毛蕊花糖苷的含量测定方法.色谱柱:Waters Xbridge C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:0.05％三氟乙酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～35 min,12％B-→13％B;35～45 min,13％B-→15％B;45～50 min,15％B→17％B);流速:1 mL· min-1;柱温:40℃;检测波长:330 nm;进样量:10 μL.结果:大车前苷质量浓度在0.49～250 mg·L-1范围内,毛蕊花糖苷质量浓度在0.50～255 mg·L-1范围内,线性关系良好.在稳定性、精密度试验中,大车前苷的RSD分别为0.22％和0.36％,毛蕊花糖苷的RSD分别为0.15％和0.31％;在重复性试验中,车前和平车前中大车前苷的RSD分别为0.25％和0.45％,毛蕊花糖苷分别为0.20％和0.11％.采用改进后的色谱条件和药典色谱条件测定车前草中大车前苷的含量,P＜0.01,结果具有显著性差异;改进后的色谱条件对于大车前苷及其类似物具有更好的分离效果.结论:改进后的色谱条件结果准确,重复性好,可以用于车前草质量控制.
