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实验小鼠腺病毒检验方法
目的 通过ELISA、EIA和IFA3种小鼠腺病毒检测方法观察实验小鼠在敏感性和特异性方面的比较.方法 通过观察实验小鼠分别在ELISA、EIA和IFA3种检测方法后的血清抗体程度来检验其敏感度和特异性.结果 感染1周后ELISA阳性年高,为8/10,EIA为7/10,IFA为6/10,三者差异无统计学意义,P＞0.05:2周后3种方法阳性率均为100%;3周以后,ELISA的抗体增长的幅度和抗体平均滴度高.结论 3种检测病毒方法比较,ELISA敏感性好,特异性强.
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小鼠腺病毒检验方法例析
目的 用IFA、ELISA及EIA三种小鼠的腺病毒检测方式进行实验研究,观察其各自的特异性与敏感性.方法 进行IFA、ELISA及EIA三种小鼠腺病毒检测方法,完成检测的操作及抗原的制备,并比较各自的实验数据等.结果 在感染一周之后,IFA达到7/10,ELISA的阳性率为三者之达到8/10,EIA为6/10,三种实验结果的比对没有统计学的意义,其中P>0.05.结论 对于小鼠腺病毒的检测比较,ELISA由于其高敏感性、强特异性及很好的重复性,适宜实验进行.
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重组痘病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其免疫原性分析
对牛痘病毒弱毒株表达的SARS冠状病毒纤突蛋白(Spike protein,S)的免疫原性进行分析与比较.以减毒痘病毒(WR株)为载体重组了SARS冠状病毒全长S基因(rWR-SARS-S).SDS-PAGE和Western blot试验表明,迁移率约为190kD的重组SARS S蛋白可在HeLa细胞中表达,而且可以被鸡抗SARS全病毒高免血清识别,具有特异免疫反应原性.进一步研究表明,rWR-SARS-S感染的细胞在IFA试验中可与鸡抗SARS的高免血清发生特异反应,具有良好的敏感性和特异性.以104PFU的rWR-SARS-S免疫BALB/c小鼠产生的抗体在间接ELISA试验中可以被S蛋白识别,产生特异抗原抗体反应.利用痘病毒表达的SARS冠状病毒S蛋白具有良好的抗原性和生物学活性,可替代SARS冠状病毒全病毒,为研究安全、敏感和特异的重组诊断抗原奠定了重要基础.
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ELISA与IFA检测鸡血清ALV-A/B特异性抗体相关性比较
为了研究ELISA和IFA检测鸡血清中ALV-A/B特异性抗体的相关性,将A/B亚群禽白血病病毒接种到DF1细胞上,用ELISA检测过的鸡血清作为一抗进行IFA检测,比较ELISA检测的S/P值与IFA检测的血清效价之间的相关性.结果表明ELISA检测鸡血清中ALV-A/B抗体的S/P值与IFA检测ALV-A/B的血清效价之间存在显著正相关(r=0.974 35;P＜0.001).由此可推测ELISA检测鸡血清的S/P值与IFA检测的血清效价之间存在显著相关性,且呈正相关.IFA检测血清阳性率与ELISA检测结果完全一致,因此当血清样品数量少时,可用IFA检测替代ELISA检测,既节约检测成本也提高了检测的准确性.
关键词： A/B亚群禽白血病病毒 ELISA IFA Pearson相关 -
长白山地区蜱类和鼠类中查菲埃立克体感染调查及16S rRNA序列分析
目的 了解东北林区啮齿动物和蜱类查菲埃立克体感染情况.方法 采用巢式PCR和间接免疫荧光方法检测长白山林区野鼠和蜱中查菲埃立克体DNA及野鼠查菲埃立克体抗体.对DNA阳性扩增产物测序,进行同源性分析.结果 PCR检测各种蜱共97组,其中13组阳性,阳性率13.40％.不同蜱种中,全沟硬蜱、森林革蜱查菲埃立克体阳性率分别为20.83％和10.0％,嗜群血蜱(14组)和长角血蜱(5组)均为阴性;检测野鼠共132只,阳性19只,阳性率14.39％.其中,集安与宽甸野鼠查菲埃立克体阳性率分别为7.58％和21.21％,差异有统计学意义(x2=3.9348,P＞0.05).荧光抗体试验检测鼠血清75份,E.c抗体阳性10份,阳性率13.33％.对鼠和蜱标本阳性扩增产物测序并作同源性比较,蜱株、鼠株与查菲埃立克体美国株、韩国株及我国云南株、新疆株核苷酸序列同源性为99.69％～100.00％,聚类分析显示检测株与查菲埃立克体参考株同处一个分支,与日本株及埃立克体属其它成员差异较大.结论 长白山林区野鼠和蜱类查菲埃立克体感染普遍,全沟硬蜱和森林革蜱为主要媒介,野鼠为重要宿主动物.表明该地区存在单核细胞埃立克体病的自然疫源地.
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糖尿病视网膜病变患者视网膜激光光凝术后眼底荧光造影联合虹膜荧光造影检查的应用价值
目的：讨论糖尿病视网膜病变患者视网膜激光光凝术(PRP)后眼底荧光造影(FFA)联合虹膜荧光造影(IFA)检查的应用价值。方法选取2014年10月—2015年9月间于该院治疗的PRP术后糖尿病视网膜病变患者共80例(148眼),所有患者均行基础视力、裂隙灯显微镜及FFA联合IFA检查。对比分析两组患者行基础裂隙灯显微镜检查及FFA联合IFA检查对视网膜及眼底周围血管的影响情况。结果 IFA检查结果显示148眼中出现24例非增生性虹膜改变,19例增生性虹膜病变,4例青光眼,101例未出现糖尿病视网膜病变；FFA检查结果显示,148眼中出现30例视网膜无灌注区,53例视网膜内出现了新生血管,40例出现了黄斑水肿,21例玻璃体积血；裂隙灯未能发现非增生性视网膜病变。 IFA检查较裂隙灯更为灵敏(χ2＝7.364,P<0.05)。结论 FFA联合IFA在PRP术后糖尿病视网膜病变检查中具有良好的应用价值,值得临床推广使用。
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猴B病毒抗体不同检测方法的比对
目的 猴B病毒(monkey B virus,BV),也称猴疱疹病毒I型(Cercopithecine herpesvirus 1),是重要的人兽共患病原.根据国家标准,猴B病毒作为抗原检测抗体,但由于生物安全问题,抗原制备受到很大限制,因此使用替代抗原进行抗体血清学检测并进行比对验证.方法 应用2种ELISA方法(抗原分别为BV和HVP2)和1种免疫酶法EIA方法(抗原为HSV-1)对本实验室135份送检恒河猴血液样品进行筛查,对阳性及可疑样品再以免疫荧光法IFA和Western blot方法(抗原为HSV-1)以及以HSV-1 gC1纯化糖蛋白为抗原的免疫印迹方法验证.结果 HVP2-ELISA、BV-ELISA和HSV-1-EIA阳性检出率分别为32.6%、37.8%和34.8%;3种方法检测结果一致的样品占91.1%(123/135),阳性结果可被IFA和WB确证;可疑样品12份,33.3%(4/12)的样品经验证检验为阳性.结论 与BV抗原相比,替代抗原HSV-1的敏感性和特异性较HVP2更为接近;阳性样品及可疑样品的确证检验应使用多种方法,避免漏检.
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大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法比较
目的 比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno- fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异.方法 仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证.结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%(3/227)被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被 WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%.结论 三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA.WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法.
关键词： 仙台病毒 ELISA IFA Western blot -
金标法在流行性出血热抗体快速检测中的应用
流行性出血热(epidemic hemorrhagic fever,EHF)是一种发病急、病情重、病死率高的急性病毒性传染病,该病的早期诊断是其正确防治的关键.目前国内外检测EHF病人IgG及IgM抗体,大都用间接免疫荧光法(IFA),但该法需用荧光显微镜等特殊设备,在基层应用受到一定的限制.本实验采用金标试剂快速检测EHF病人血清中的特异性IgG及IgM抗体,并与IFA法作了比较,现将结果报告如下.
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云南健康人群巴尔通体感染的血清学评估
目的了解巴尔通体(Bartonella)在云南健康人群中的感染情况.方法以间接免疫荧光抗体测定法(IFA)对30份有可疑鼠类接触史的云南健康人血清行以抗Bartonella Elizabethae等9种不同巴尔通体抗原的IgG和IgM抗体水平测定.结果有5份血清对4种抗原发生反应,其中1份抗B.elizabethae IgG阳性(1:128);其他为抗Neotoma IgG(1:128)或IgM及抗A1IgM(≥1:32)阳性.结论巴尔通体感染存在于人群中,考虑目前临床众多不明原因发热患者及一些临床疑难杂症与B.elizabethae及其他鼠传巴尔通体的感染有关,有必要在云南乃至全国范围内进行巴尔通体人群感染状况的进一步调查,对病人的治疗提出行之有效的科学的方法.
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大鼠泰泽氏菌套式PCR方法的建立和初步应用
根据秦泽氏菌rDNA序列设计出二对特异引物,以标准菌RJ株和大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌纯化的DNA为模板,进行套式PCR反应.结果用外引物扩增,泰泽氏菌和大肠杆菌均出现625 bp的反应带,其它细菌无反应带;而用内引物第二次扩增,只有泰泽氏菌出现196 bp的特异扩增带.将PCR方法应用于人工免疫抑制的SD大鼠,检出率为30%(9/30),同时将此30份血清用间接免疫荧光法(IFA)进行检测,结果未检出阳性样品.结果提示,套式PCR方法具有特异性强、敏感性高,简便快速的特点.
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应用快速免疫层析法检测恙虫病特异性IgM、IgG及总抗体
目的建立快速免疫层析法检测恙虫病特异性IgM、IgG及总抗体,并对其敏感性和特异性进行评价.方法以胶体金标记纯化的基因工程重组抗原,在玻璃纤维上预包被金标记的纯化抗原(Au-Ag)和鼠IgG,在硝酸纤维素膜上检测线处包被羊抗人μ链、羊抗人IgG或重组抗原;在对照线处包被羊抗鼠IgG,组装成检测试纸.在试纸条的玻璃纤维上加待检血清,再滴加2滴反应液.观察金标抗原释放后NC膜上检测线和对照线的反应情况,检测线和对照线同时出现红色条带判为阳性,仅对照线出现红色条带判为阴性,对照线未出现条带为无效试验.结果间接免疫荧光法IFA检测IgG和金标免疫层析法检测IgM、IgG、总抗体的敏感性分别为88.1%,92.3%,90.9%和98.6%;特异性分别为96.0%,94.7%,94.7%和93.3%.结论金标免疫层析法可替代传统方法用于检测恙虫病东方体特异性抗体.
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杆状病毒表达SARS冠状病毒核蛋白抗原性的研究
目的对杆状病毒表达SARS冠状病毒NP抗原性进行分析与比较.方法利用SDS-PAGE、Western-Blot 和ELISA证明重组核蛋白(rSN)在昆虫细胞获得高效表达,具有特异免疫反应原性.结果表达rSN的昆虫细胞裂解、稀释后直接包被ELISA板,来检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,敏感性稍高于Vero细胞培养的全病毒(OD分别为2.8和0.6),与健康人血清不发生特异反应 (OD值为0.01);表达rSN昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,同样表现了良好的敏感性和特异性.结论昆虫细胞表达rSN有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的诊断抗原,应用于ELISA和IFA血清学检测.
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福建省环状病毒感染的血清学检测及临床意义探讨
目的 探讨福建省人群环状病毒的自然感染状况及临床上具有发热、关节痛、皮疹等症状患者之间的关系。方法 采用间接免疫荧光试验(IFA)对202例林区正常人血清及126例病人血清或脑脊液进行环状病毒IgG和IgM抗体检测，以北京地区20例健康人血清为对照。结果 202例林区正常人血清中环状病毒IgG抗体阳性率为35.6％(72／202)，126例病人血清或脑脊液中IgG抗体阳性率为31.7％(40/126)，IgM抗体阳性率为16.7％(21/126)。21份阳性血清分别经流行性乙型脑炎JBV和辛德毕斯病毒IgM检测，仅1份疑似JBV阳性，其余结果 均为阴性。北京地区20例健康人血清环状病毒IgM检测均为阴性。结论 福建省人群中存在环状病毒感染；环状病毒可导致发热、关节痛、皮疹等临床表现。
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2004年大连市部分餐饮从业人员3种衣原体病原的血清抗体调查
[目的]了解大连市部分人群肺炎衣原体、沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体感染情况.[方法]2004年采用免疫荧光(IFA)方法进行肺炎衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体抗体检测.[结果]肺炎衣原体、沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体IgA的阳性率分别为51.69%(46/89)、20.22%(18/89)、3.37%(3/89);肺炎衣原体、沙眼衣原体IgA阳性率在性别和年龄分布上差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]研究对象不同程度地存在3种衣原体的感染.
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应用Guthrie卡改良IFA检测弓形虫抗体IgG
目的为获取诊断先天性弓形虫病有效、廉价的实验方法,我们应用Guthrie卡改良了常规IFA法检测弓形虫抗体IgG.方法分别观察了干血滴与新鲜血滴、干血滴与新鲜血清的检测效果.结果各组之间无显著性差异.结论提示改良IFA的敏感性与常规IFA无并差别.
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上海市流动人员疟疾血清流行病学调查
目的了解外来流动人员的疟疾抗体水平和相关影响因素,进而提出针对性防治措施. 方法以居住在上海市浦东、闵行2区6个镇的外来流动人员为调查对象,开展问卷调查和血清学调查,以本地户籍居民为对照.结果共调查流动人员2 732人,IFA阳性率为3.81%,按来源地流行状况分组显示,各组间疟疾IFA阳性率差异有显著性,其中来自高疟区IFA阳性率为8.10%,明显高于其它发病组(发病率＜1/万);显示IFA阳性率与当地上报发病率基本一致.上海市本地居民IFA阳性率为1.36%与外来流动人口阳性率间差异有非常显著性;外来流动人员中阳性者主要集中在17～54岁和小学、初中学历且来沪居住时间短于5年人群. 结论来自较高疟区的流动人员输入可能时低疟区的流行带来潜在威胁,应加强对外来流动人员的疟疾监测.
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大连市餐饮服务人员呼吸道感染血清学调查
公共场所(宾馆、饭店)服务人员的工作特点是在环境相对密闭的空间频繁接触各类流动人员,环境通风较差,加之中央空调的使用,容易发生呼吸道感染性疾病.本研究旨在通过血清流行病学的方法检测该人群呼吸道病原微生物的感染情况,为疾病的预防和控制提供科学依据.
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巴贝西虫实时荧光PCR检测方法初步建立及牡丹江市无偿献血者中巴贝西虫流行情况调查
目的 建立一种筛查多种可感染人巴贝西虫(包括Babesia.microti,B.divergens,B.venatorum,Babesia.sp EU1,Babesia_sp._XXB/ Hangzhou等)的实时荧光PCR检测方法;用实时荧光PCR和间接免疫荧光检测(IFA)2种方法分别对牡丹江市无偿献血者血样进行核酸和血清学检测,评估其对当地输血安全的风险.方法 从GenBank下载我国可感染人巴贝西虫的18S rRNA基因序列,并根据序列共同部分设计引物,用引物验标准质粒并优化实验条件,建立实时荧光PCR检测方法.将1 971份无偿献血者的血液标本离心,使其分离成红细胞和血浆2个部分:1971份红细胞标本混样(10份/pool),用已建立的实时荧光PCR进行核酸检测,阳性混样池再拆分检测;其中1 000份血浆标本用IFA法进行B.microti IgG检测.结果 经琼脂糖凝胶电泳和一代测序验证,标准质粒构建成功且实验条件已经优化,成功建立了实时荧光PCR检测方法,重复性良好,低检测下限为9.69×102 copies/mL;1 971份红细胞样本巴贝西虫核酸检测结果均为阴性;1000份血浆样本B.microti IgG血清学检测结果显示共13例阳性(阳性率1.3％),其中8例(0.8％)滴度为1∶64,5例(0.5％)滴度为1∶128.结论 本研究成功建立了一种筛查多种感染人巴贝西虫的实时荧光PCR核酸检测方法;标本检测结果显示牡丹江地区有既往B.microti感染,提示巴贝西虫已经对该地区血液安全造成一定威胁,但风险大小有待进一步评估.
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肾综合征出血热患者病后和人群疫苗接种后远期免疫学效果研究
目的了解肾综合征出血热(HFRS)疫苗接种人群和HFRS患者病后的远期(5年以上)免疫学效果.方法采用间接免疫荧光试验(IFAT)检测血清HFRS特异性IgG抗体,1:20为阳性.对接种组人群抗体滴度＜1:320者,强化免疫1针,15d后静脉采血,同样方法检测IgG抗体.结果接种组人群95例,抗体阳性率100%,GMT 40.29;强化免疫人群59例,GMT 71.13;疫苗接种组人群在强化免疫前后GMT有显著性差异(P＜0.01).HFRS患者55例,抗体阳性率100%,GMT 97.87;疫苗接种与否对患者病后的血清特异性IgG抗体水平无显著影响.近9年免疫人群的年发病率为16.38/10万,对照人群为73.92/10万,年均保护率77.84%.结论HFRS疫苗的远期免疫学和流行病学效果较好;HFRS患者病后具有较持久的免疫力.
关键词： HFRS 几何平均滴度(GMT) IFA HFRS灭活疫苗
