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BRAF及其细胞外信号调节激酶1/2信号通路蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义
目的:研究BRAF基因及其丝裂原活化蛋白/胞外信号调节激酶的激酶(mitogen-activated protein/extracellular signal-regulated kinase kinase,MEK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路与甲状腺乳头状癌发生的相关性及部分作用机制.方法:收集73例散发的甲状腺乳头状癌患者及16例同期甲状腺瘤患者(对照组)的临床资料及标本.采用免疫组织化学和免疫印迹法检测两组标本组织中的大鼠肉瘤蛋白(rat sarcoma,RAS),BRAF,MEK1/2和ERK1/2表达状况.结果:甲状腺乳头状癌组RAS,BRAF,pMEK1/2和pERK1/2表达水平明显高于甲状腺瘤组(P＜0.05或P＜0.01)；甲状腺乳头状癌患者RAS,BRAF,pMEK1/2和pERK1/2表达与肿块大小、淋巴结转移以及临床分期相关(P＜0.05或P＜0.01).结论:RAS,BRAF,pMEK1/2及pERK1/2可能与甲状腺乳头状癌发生及其淋巴结转移、临床分期相关；BRAF可能通过激活MEK/ERK信号通路而发挥其生物作用.
关键词： BRAF 大鼠肉瘤蛋白 MEK1/2/ERK1/2通路 甲状腺乳头状癌 -
BRAF基因突变与甲状腺乳头状癌的相关性
目的:探讨BRAF基因突变与甲状腺乳头状癌的相关性.方法:采用PCR和测序技术,对73例散发的甲状腺乳头状癌患者和16例甲状腺瘤患者组织BRAF基因突变进行筛查.结果:甲状腺乳头状癌组中42例存在突变;而在甲状腺瘤组中未发现突变.BRAF突变与甲状腺乳头状癌的淋巴转移以及临床分期间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:BRAF基因突变与甲状腺乳头状癌发生及其淋巴结转移、临床分期相关.
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结直肠癌KRAS、BRAF及PIK3CA基因突变状态分析
目的：检测结直肠癌组织KRAS、BRAF及PIK3CA基因突变状态，分析突变与临床特征的关系。方法收集结直肠癌手术切除或穿刺活检标本177例，提取DNA经探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应扩增后，检测KRAS、BRAF及PIK3CA基因的突变状态，分析结直肠癌组织中3个基因间突变的内在关系，并分析KRAS突变与临床特征的关系。结果 KRAS基因突变率为37．9％，以Gly12Val突变多，占总突变率的32．8％；BRAF基因突变率为4．0％；PIK3CA突变率为14．1％，以E542K突变多，占总突变率的36．0％。BRAF基因突变者共7例，全部为KRAS和PIK3CA野生型的患者；PIK3CA基因突变者共25例，其中19例（76．0％）与KRAS存在共同突变。结论结直肠癌患者KRAS基因突变率较高，KRAS基因突变与淋巴结转移和肿瘤进展相关。联合检测KRAS、BRAF及PIK3CA基因对指导临床制定个体化治疗有重要意义。
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结直肠癌患者肿瘤组织中KRAS、NRAS和BRAF基因各亚型突变状况分析
目的：分析结直肠癌患者肿瘤组织中 KRAS、NRAS和BRAF基因各亚型突变状况。方法选取我院2014年6月至2015年6月期间就诊并经病理学检查确诊的结直肠癌患者82例作为本次研究对象，常规石蜡包埋组织，并使用甲醛固定，提取DNA组织，采取实时荧光定量PCR技术测定石蜡组织中KRAS基因、NRAS基因和BRAF基因突变情况。结果本组82例患者中，有34例（41.46%）检测到KRAS基因突变，其中12密码子突变26例（31.71%），包括G12A 点突变4例（4.88%）、G12C 点突变4例（4.88%）、G12D点突变12例（14.63%）、G12S点突变3例（3.66%）、G12V点突变2例（4.88%）、G12R点突变1例（1.22%）；有8例（9.76%）检测到KRAS基因13密码子突变，均为G13D点突变；有4例（4.88%）检测到NRAS基因突变，其中12密码子突变2例（2.44%），包括G12D点突变1例（1.22%）、G13D点突变1例（1.22%），检测到61基因突变2例（2.44%），包括Q61H点突变1例（1.22%）、Q61R点突变1例（1.22%）；有3例（3.66%）检测到BRAF基因突变，均为V600E点突变。结论 KRAS基因在结直肠癌患者中的突变率较高，虽然NRAS基因和 BRAF 基因突变率较低，但临床不容忽视。通过KRAS基因、NRAS基因和BRAF基因检测，为临床结直肠癌患者的治疗提供重要参考信息。
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Kras、Nras、Braf基因突变联合检测在转移性大肠癌中的意义
目的 探讨大肠癌Kras、Nras、Braf基因突变与临床病理特征及预后的意义.方法 应用实时荧光定量PCR TaqMan探针法检测90例大肠癌患者Kras、Nras、Braf基因突变.结果 90例大肠癌标本中33例(36.7%)检测到Kras12、13、61密码子基因突变,4例(4.4%)检测到Nras12、13、61密码子基因突变,6例(6.7%)检测到Braf V600E基因突变.在有无淋巴结转移及远处转移的患者,Kras基因突变差异有统计学意义(X2=7.220、8.720,P<0.01).在不同的性别、年龄、肿块大小、浸润深度、分化程度,Kras基因突变均差异无统计学意义(P>0.05).Kras、Nras、Braf基因野生型患者的3年生存率均高于突变型(P<0.01),无淋巴结转移和远处转移组患者的3年生存率明显高于伴淋巴结转移和远处转移组(P<0.01).Kras与Nras、Braf基因突变无明显负相关性.结论 联合检测Kras、Kras、Braf基因突变对转移性大肠癌的治疗及预后评估具有重要的意义.
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胰腺癌中EGFR、KRAS、BRAF基因突变状况分析及意义
目的:检测胰腺癌组织EGFR、KRAS、BRAF基因突变状况,为胰腺癌EGFR靶向治疗研究奠定基础.方法:提取胰腺癌及胰腺良性病变石蜡组织切片中基因组DNA,PCR扩增EGFR 18、19、21外显子片段,KRAS2、3外显子片段,BRAF15外显子片段,采用直接测序法检测其突变状况.结果:32例胰腺癌患者中有24例患者存在KRAS基因突变,10例良性病变组织均未发现突变,两者差异具有统计学意义(x2=14.57,P=1.35× 10-4),其中22例12密码子突变(G12D14例,G12V8例)；2例61密码子突变(Q61L).所有检测样本中未见BRAF突变.共3例EGFR突变,其中包括1例19外显子突变(de1746-750),2例21外显子突变(L858R),10例良性病变组织未见突变.结论:在胰腺癌中KRAS基因突变可能为EGFR通路失调的主要原因,其次是EGFR突变,BRAF突变未见.
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甲状腺乳头状癌BRAF基因突变与超声及病理特征相关性研究
目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)超声征像、病理特征与BRAF基因突变间的相关性.方法 回顾性分析247例行甲状腺切除术经病理证实为PTC患者的超声征象、病理特征及BRAF基因突变等参数,计算BRAF基因突变率,分析对比BRAF基因突变阳性与阴性患者间的超声征象与病理特征之间的关系.结果 247例患者中147例出现BRAF基因突变,突变率为57.9％.甲状腺微小癌组BRAF基因突变发生率低于PTC组(43.7％vs.70.8％,χ2=18.362,P<0.001);PTC中BRAF基因突变阳性与阴性者间超声征象比较差异均无统计学意义(P均>0.05).BRAF基因突变与甲状腺腺体外侵犯(χ2=7.954,P<0.05)、中央区淋巴结转移(χ2=10.772,P<0.05)以及较高的肿瘤分期(χ2=4.361,P<0.05)有关.结论 BRAF基因在PTC中突变率较高,且与其病理特征有关,而与超声征象特点无关.术前进行BRAF基因突变检测对其进行风险分层,有助指导制定PTC的手术路径.
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甲状腺癌相关基因BRAF的临床研究新进展
甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma-PTC)是常见的甲状腺恶性肿瘤,目前研究提示BRAF-T1799A突变与PTC的发生、发展密切相关.本文结合目前BRAF-T1799A在PTC发病、风险分级、临床管理、手术方式的选择,术后放射性碘消融治疗及随访等相关研究,综述BRAF-T1799A突变在PTC的发病、诊断、治疗、预后方面的临床前景.
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结直肠癌组织K-ras、BRAF及PIK3CA基因突变的检测及其与临床病理特征的关系
目的:探讨结直肠癌组织K-ras、BRAF及PIK3CA基因突变的检测及其与临床病理特征的关系.方法:选取150例结直肠癌患者,收集结直肠癌患者肿瘤组织标本,提取DNA进行PCR扩增,观察结直肠癌患者K-ras、BRAF及PIK3CA基因的突变率,并分析其与患者年龄、性别、肿瘤位置、TNM分期等临床病理特征之间的关系.结果:150例结直肠癌患者中,检测到K-ras基因突变率为32％(48/150);BRAF基因突变率为8％(12/150);PIK3CA基因突变率为12％(18/150);3种目的基因与患者TNM分期的关系,发现BRAF基因突变与患者TNM分期无明显关系(P＞0.05),而K-ras与PIK3CA基因突变与患者TNM分期存在明显关系(P＜0.05),随着患者TNM分期的提高,患者基因突变的情况明显增多;3种目的基因与患者的性别、年龄、肿瘤位置等病理学指标无明显关系(P＞0.05).结论:对K-ras、BRAF及PIK3CA基因进行分析,K-ras、PIK3CA突变率明显大于BRAF的突变率,K-ras、PIK3CA基因突变是结直肠癌中的常见生物学事件,可能参与了结直肠癌的发生,而BRAF基因突变可能不是结直肠癌发生的主要分子机制,K-ras、PIK3CA与直肠癌患者的TNM分期存在密切的关联.
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Survivin、BRAF、Notch1在甲状腺良恶性肿瘤中的差异表达及其与血清指标的关系
目的:研究Survivin、BRAF、Notch1在甲状腺良恶性肿瘤中的差异表达及其与血清指标的关系.方法:将在本院就诊的100例甲状腺癌患者和100例甲状腺腺瘤患者纳入研究,采用Real-timePCR和Western-blot检测肿瘤组织中Survivin、BRAF、Notch1的表达情况,采用酶联免疫吸附法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量.结果:甲状腺癌组织中Survivin、BRAF、Notch1的mRNA和蛋白水平均高于甲状腺腺瘤组织,且TNM分期越差,Survivin、BRAF、Notch1的表达量越高;甲状腺癌患者血清中VEGFA、VEGFB、VEGFC的含量均高于甲状腺腺瘤患者;多元线性回归显示,VEGFA、VEGFB、VEGFC均与Survivin、BRAF、Notch1呈正相关.结论:甲状腺癌组织中Survivin、BRAF、Notch1呈高表达,且与血清中血管新生指标VEGF具有良好的相关性.
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BRAF V600E和PD-L1蛋白表达在甲状腺乳头状癌中的临床意义
目的:研究甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中BRAF V600E与程序性死亡因子配体1(programmeddeath ligand 1,PD-L1)蛋白表达,探讨其与PTC临床特征的相关性.方法:随机收集2015至2017年重庆医科大学附属第一医院128例PTC患者作为研究对象,收集40例甲状腺癌旁正常组织患者作为对照.采用免疫组化检查BRAF V600E蛋白和PD-L1蛋白的表达.结果:PTC中BRAFV600E蛋白阳性率为67.9％(87/128),明显高于正常组(x2=11.693,P=0.000);单因素卡方检验分析BRAF蛋白阳性与患者年龄≥45岁(x2=22.345,P=0.000)、甲状腺包膜侵犯(x2=4.643,P=0.031)关系密切.而PD-L1在PTC中阳性率为57.8％(74/128),明显高于正常组织(x2=9.812,P=0.000);单因素卡方检验分析PD-L1蛋白阳性与PTC患者年龄≥45岁(x2=44.390,P=0.000)、淋巴结转移状态(x2=28.584,P=0.000)及甲状腺包膜侵犯(x2=12.895,P=0.000)显著相关.多因素logistic回归分析显示BRAF蛋白的表达与患者患者年龄≥45岁(OR=3.003,95％CI=1.218～7.404,P=0.017)、甲状腺包膜侵犯(OR=12.341,95％CI=3.944～38.620,P=0.000)关系密切,PD-L1蛋白表达与患者患者年龄≥45岁(OR =6.667,95％CI=2.668～16.657,P=0.000)、淋巴结转移(OR=3.987,95％CI=1.592～9.987,P=0.003)和甲状腺包膜侵犯(OR=4.249,95％CI=1.447～12.478,P=0.008)关系密切.进一步分析显示,BARFV600E蛋白阳性的PTC中PD-L1阳性率为75.8％(66/87),明显高于BARF蛋白阴性PTC中PD-L1阳性率19.5％(8/41) (Kappa=0.520,P=0.000).提示在甲状腺乳头状癌中,BRAF蛋白与PD-L1蛋白表达存在一致性.结论:BRAF蛋白阳性的PTC中,PD-L1免疫抑制分子存在过量表达,BRAFV600E蛋白和PD-L1蛋白的共同过量表达与患者更差的预后相关.
关键词： 甲状腺乳头状癌 BRAF 程序性死亡因子配体1 蛋白表达 -
甲状腺癌的相关基因BRAF、RET、RAS研究新进展
针对甲状腺癌发病率逐年上升问题,基于大量国内外参考文献,对影响甲状腺癌的相关基因展开一系列研究分析,研究结果表明BRAF、RET、RAS相关基因是导致甲状腺癌发生 、发展的主要因素,相关基因的类型 、突变 、重排等因素均对甲状腺癌有较大影响.本文就甲状腺癌的相关基因研究新进展展开综述,为临床诊断甲状腺癌提供决定性信息,为甲状腺癌患者的个体化治疗方案提供科学依据.
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甲状腺乳头状癌伴和不伴桥本甲状腺炎患者的BRAF V600E突变及侵袭性研究的meta分析
目的 评估桥本甲状腺炎(HT)与甲状腺乳头状癌(PTC)患者的BRAF突变率和侵袭性.方法 使用计算机检索中国期刊全文数据库 、万方数据库 、中文科技期刊数据库,以及PubMed等英文数据库,收集包含PTC,HT和BRAF突变等相关关系的中英文文献,应用RevMan5.3软件对数据进行meta分析.结果 共纳入文献10篇,涉及PTC病例4265例.meta分析结果显示:与PTC组相比,PTC合并HT组的BRAF突变率,甲状腺外侵犯率和淋巴结转移率显著降低(P<0.05);当BRAF突变存在时,PTC合并HT组的甲状腺外侵犯率仍然显著低于PTC组(P<0.05),但是两组的淋巴结转移率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 与不合并HT的PTC患者相比,合并HT的PTC患者表现出较低的BRAF突变率和侵袭性,即使是在BRAF阳性突变存在时,HT仍能在一定程度上阻碍PTC的进展和侵袭性.
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结直肠癌组织中EGFR、BRAF和K-Ras基因的表达及其临床意义
目的 检测血管内皮生长因子受体(EGFR)、BRAF及K-Ras在结直肠癌组织中的表达情况并探讨其在结直肠癌发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学SP法检测136例结直肠癌及其相应癌旁正常结直肠组织中EGFR、BRAF和K-Ras基因的蛋白表达情况,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系.结果 136例结直肠癌组织中EGFR、BRAF及K-Ras蛋白均有表达,阳性率分别为70.59％ (96/136)、50.74％(69/136)及47.48％(66/136),均高于其相应在癌旁正常结直肠组织中的表达阳性率[分别为35.29％(48/136)、16.18％ (22/136)及19.52％ (27/136)],虽然K-Ras的蛋白表达阳性率在二者之间的差异无统计学意义(P＞0.05),但EGFR和BRAF在结直肠癌组织中的蛋白表达阳性率均明显高于其在癌旁正常结直肠组织中的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).EGFR表达与肿瘤的TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.05),BRAF表达与肿瘤的TNM分期有关(P＜0.05),而K-Ras在结直肠癌组织中的蛋白表达与肿瘤的TNM分期、分化程度及淋巴结转移均无关(P＞0.05).相关性分析结果显示EGFR、BRAF及K-Ras基因的蛋白表达之间均无相关性(P＞0.05).结论 EGFR、BRAF过表达可能与结直肠癌的发生、发展有关,但K-Ras作用尚不明确,抗EGFR、BRAF靶向治疗对结直肠癌患者可能有益.
关键词： 结直肠癌 血管内皮生长因子受体 BRAF K-RAS 免疫组织化学 -
KRAS与BRAF基因在胃肠间质瘤中的突变情况及临床意义
目的 检测KRAS与BRAF基因在胃肠间质瘤(GIST)中的突变情况并探讨其在伊马替尼耐药中的意义.方法 回顾性选择2002-2012年期间在北京大学肿瘤医院就诊的519例GIST患者,其中381例c-kit或PDGFRA突变型GIST,119例c-kit或PDGFRA野生型GIST,19例含伊马替尼耐药前后配对标本病例;检测全部肿瘤组织的KRAS外显子2与BRAF外显子15的突变情况,并收集突变患者的临床特征与生存状况.结果 KRAS基因在119例c-kit或PDGFRA野生型GIST中突变率为1.7％(2/119),突变类型分别为G12D与G12C;BRAFV600E突变率也为1.7％ (2/119);在c-kit或PDGFRA突变型GIST与19对耐药前后GIST配对标本中均未能检测到KRAS与BRAF基因错义突变.2例KRAS基因突变的GIST患者中1例伊马替尼原发耐药,另l例伊马替尼治疗仅获得8个月的无进展生存期;2例BRAF基因突变患者均接受肿瘤完整切除,1例中危患者术后未接受辅助治疗,截至末次随访时间获得47个月的无复发生存,另1例高危患者接受伊马替尼辅助治疗2年,截至末次随访时间,已获得7年无复发生存.结论 野生型GIST患者可发生KRAS与BRAF基因低频率的突变,KRAS基因突变可能与伊马替尼原发耐药有关;继发耐药患者中未见新发的KRAS与BRAF基因突变.
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EGFR、Kras、BRAF在喉鳞癌中的表达及临床意义
目的:探测EGFR及Ras-Raf信号通路在喉鳞状细胞癌组织中的表达,探讨其在喉癌发病机制中的意义.方法:采用免疫组化SP法检测58例喉鳞癌组织及20例癌旁正常的喉黏膜组织中的EGFR、Kras、BRAF的表达,分析它们与喉鳞癌临床病理因素之间的相关关系.结果:EGFR、Kras、BRAF在喉癌组织中的阳性表达率,分别为74.14%(43/58),25.86%(15/58)和39.66%(23/58),在癌旁黏膜中的阳性表达率,分别为40%(8/20),15%(3/20),15%(3/20),EGFR、BRAF在喉癌组织中的表达高于在癌旁黏膜中的表达,差异有统计学意义(P＜0.05),Kras在喉癌组织与癌旁黏膜中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).EGFR、BRAF分别与组织学分化、淋巴结转移和/或预后相关(P＜0.05);Kras与临床病理因素无关(P＞0.05);三者之间无相关性(P＞0.05).结论:喉鳞癌组织EGFR、BRAF的过表达可能与喉癌的发生发展有关,Kras与喉癌的关系尚不明确;Ras-Raf信号通路中,抗EGFR、BRAF靶向治疗对喉癌患者有益,而抗Kras对喉癌的靶向治疗效应有待进一步研究.
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脑胶质瘤中Ki-67、Kras和Braf蛋白的表达及临床意义
目的:了解Ki-67、Kras和Braf蛋白在脑胶质瘤中的表达状况,并探讨其临床意义.方法:免疫组织化学SP法检测81例手术切除脑胶质瘤组织的Ki-67、Kras和Braf蛋白表达情况.分析Kras、Braf和Ki-67蛋白的表达与临床病理学参数之间的关系.结果:胶质瘤中Ki-67蛋白表达阳性率为54.3％,在1、2、3、4级胶质瘤中分别为0、37.0％、65.4％、73.9％,各组间差异显著(P＜0.05),但其表达与患者性别、年龄无明确相关关系(P ＞0.05)；Kras蛋白表达阳性率为53.1％,Braf蛋白表达阳性率为61.7％,二者表达与肿瘤病理分级及患者性别、年龄无关(P＞0.05).Kras与Braf蛋白表达间无明确相关关系(P＞0.05),且二者表达均与Ki-67表达无明确相关关系(P＞0.05).结论:Ki-67蛋白表达与胶质瘤的恶性程度呈正相关,检测Ki-67的表达可能会有助于判断胶质瘤的恶性程度；胶质瘤中Kras与Braf蛋白表达相互独立的发现提示胶质瘤存在多种发病机制.
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原发性肝癌中 KRAS 及 BRAF 基因突变及其临床意义
目的：检测原发性肝癌患者血浆中的 KRAS 与 BRAF 基因突变机率及特征，研究与疾病进展的相关性及对治疗的意义。方法：收集肝癌患者血液（51例），观察组25例，为肝癌伴肝外转移患者；对照组26例，为病灶局限于肝脏的肝癌患者。所有的患者抽取外周血10ml，从血样中游离 DNA，采用人类 KRAS ／NRAS 基因突变联合检测试剂盒及人类 BRAF 基因 V600E 突变检测试剂盒分别对 KRAS 基因和 BRAF 基因突变进行检测，并分析基因突变机率及与其突变特征。结果：51例肝癌患者中，伴肝外转移患者 KRAS 基因突变率（24％，6／25）明显高于无肝外转移患者 KRAS 基因突变率（0％，0／26；P ＜0．05）；肝癌患者中 BRAF 基因突变率为0％（0／51）。结论：本研究表明肝癌患者 KRAS 基因会发生明显的突变，且肝癌伴肝外转移患者，KRAS基因突变频率明显增加。未检测出 BRAF 基因突变或 BRAF 基因突变率较低。
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BRAF基因序列特异性shRNA质粒载体的构建
目的 构建BRAF基因序列特异性的短发卡RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)质粒载体.方法 根据文献已发表的BRAF基因序列,设计合成3条BRAF特异性的shRNA编码序列(其中一条shRNA特异性针对黑素瘤中常见的BRAF V599E错义突变设计)和一条与人基因组无同源性的阴性对照shRNA编码序列.将退火后的双链shRNA编码序列重组于pGenesil-1质粒中,进行双酶切和测序鉴定.结果 双酶切显示shRNA编码序列被成功插入pGenesil-1质粒中,测序结果证实插入片断与设计序列完全一致.结论 所设计的shRNA编码序列被正确插入质粒骨架,成功构建了BRAF基因序列特异性的shRNA质粒载体.
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新疆维吾尔族、汉族结直肠癌患者中KRAS及BRAF基因突变差异及其与预后的关系研究
目的：探讨新疆维吾尔族（维族）、汉族结直肠癌伴肝转移患者中 KRAS基因及 BRAF基因突变差异及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择新疆医科大学第一附属医院2005年1月－2010年12月收治的100例新疆维、汉族结直肠癌伴肝转移患者，应用PCR及Pyrosequencing测序法检测分析 KRAS基因及 BRAF基因突变情况，分析其与临床病理特征和预后的关系。结果维、汉族结直肠癌伴肝转移患者的 KRAS与 BRAF基因突变率分别为28％（28／100）与5％（5／100）。50例汉族患者中KRAS基因突变18例，BRAF基因突变2例；50例维吾尔族患者中KRAS基因突变10例，BRAF基因突变3例。原发肿瘤组织学分级、区域淋巴结转移、脉管瘤栓、肝外侵犯或转移、KRAS和BRAF为结直肠癌的预后影响因素（P ＜0．05）；多因素分析显示，脉管瘤栓（P ＝0．035）、KRAS基因（P ＝0．001）为结直肠癌的独立的预后因素。结论在新疆维、汉族结直肠癌伴肝转移患者中，脉管瘤栓及KRAS基因具有主要的预后价值。积极检测KRAS基因，可望延长患者生存期。
