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贝类中诺如病毒的研究进展
从贝类中诺如病毒的污染现状、检测组织靶点、病毒浓缩方法及效率、检测方法有效性等多个方面评述贝类中诺如病毒的研究现状、进展、急需解决的问题和未来的发展方向,以期为制定诺如病毒检测技术标准及我国贝类进出口贸易提供参考.
关键词： 诺如病毒 贝类 检测靶点 病毒浓缩 反转录-聚合酶链反应 -
模拟水样中甲肝病毒超滤浓缩和 PEG浓缩方法的比较
目的：比较模拟水样中甲肝病毒（ HAV）超滤浓缩和PEG浓缩方法，为水中HAV检测提供参考。方法向模拟水样中接种已知量的HAV，分别选用Millipore和Sartorius公司的100KD和50KD孔径的微孔超滤管及终浓度为10％聚乙二醇（PEG）-1M氯化钠（NaCl）沉淀的方法对模拟水样进行浓缩，采用荧光定量RT-PCR方法检测浓缩后的病毒量，用SPSS21.0对数据进行统计学分析。结果采用同一孔径不同厂家的超滤管浓缩病毒无统计学差异（P＝0.25，P＝0.532），对浓缩后的CT值及回收量进行分组比较，结果均表明不同处理方法有统计学差异（ P＝0.000＜0.05，P＝0.000＜0.05），其中50KD组浓缩病毒回收率为（94.57±16.26％），100KD组浓缩病毒回收率为（52.37±14.75％），10％PEG-1.0MNaCl沉淀病毒回收效率为（63.5±8.45％）。结论超滤和PEG沉淀两种方法均可用于水样中HAV浓缩，超滤管浓缩病毒操作简便，耗时更短，选择合适孔径可以提高HAV病毒回收率，本实验中50KD超滤管HAV回收率高于100KD；PEG更适用处理大体积样本。
关键词： 甲肝病毒 病毒浓缩 PEG浓缩 超滤 荧光定量RT-PCR -
不同标本中甲型肝炎病毒核酸检测方法的建立及应用
目的 建立水、贝类、血液及唾液中甲型肝炎病毒核酸RT-PCR检测方法.方法 加入一定量甲肝病毒到贝类、水、血液及唾液标本中,贝类经研磨后,PEG沉淀浓缩;水直接经PEG沉淀浓缩;以上标本及血液、唾液标本用Trizol试剂提取核酸,套式RT-PCR检测甲肝病毒核酸.引物位于甲肝病毒结构区VP1-2A区.结果病毒培养液中能检测到0.1 TCID50甲肝病毒;水、血清及唾液中能检测到1TCID50甲肝病毒;毛蚶中能检测到1-10TCID50甲肝病毒.某地甲肝病毒污染的水及患者血清标本中检测到了甲肝病毒核酸,并进行了序列分析比对.结论 本研究建立的不同标本中甲型肝炎病毒核酸RT-PCR检测方法,敏感、特异、快速,具有广泛的应用价值,将为甲肝的溯源研究及分子流行病学研究打下理论基础及提供技术支撑.
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树鼩粪便中病毒三种浓缩方法的效果比较
目的 比较树鼩粪便中病毒的三种浓缩方法,评价各方法的浓缩效果,为病毒浓缩方法的佳选择提供依据.方法 将指示病毒(树鼩呼肠孤病毒,tree shrew's reovirus,TRV)加入经离心过滤处理后的野生树鼩粪便上清中,采用PEG(聚乙二醇,polyehhylene glycol)沉淀结合超声分离法、铁离子絮凝的化学方法和GBviroFast病毒浓缩试剂盒对树鼩粪便上清分别进行浓缩,经实时荧光定量PCR技术对指示病毒进行绝对定量,比较各方法的浓缩效果.结果 TRV病毒悬液的载量为1.34E+ 05;铁离子絮凝的化学方法浓缩的TRV载量为1.86E+ 04,浓缩效率为49.57％;GBviroFast病毒浓缩试剂盒浓缩的TRV载量为0.98E+ 04,浓缩效率为26.12％;PEG沉淀结合超声分离法浓缩的TRV载量为2.30E+ 03,浓缩效率为6.13％.结论 三种方法均能浓缩粪便上清中低浓度的肠道病毒,铁离子絮凝方法佳,GBviroFast病毒浓缩试剂盒其次,PEG结合超声分离效果差.
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聚乙二醇沉淀法在流感病毒气溶胶检测中的应用
目的 初步探讨聚乙二醇(PEG)沉淀法对流感病毒气溶胶的浓缩效果.方法 于2012年12月-2013年1月随机选取南京市5家商场超市和3家综合医院,采集室内可能含流感病毒的气溶胶样品,气溶胶经过不同的吸收液浓缩量、PEG-6000和NaCI加入量进行浓缩后提取RNA,以一步法逆转录巢式PCR检测甲型流感病毒.结果 当PEG-6000和NaCI终浓度为7％和2.9％(m/V)浓缩10、20 ml吸收液以及PEG-6000和NaC1终浓度为14％和5.8％(m/V)浓缩10ml吸收液时,甲型流感病毒的阳性检出率分别为17.5％,60％,30％,差异有统计学意义(P=0.008).结论 PEG沉淀法可应用于流感病毒气溶胶的浓缩,并利于流感病毒的检出.
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荷电材料在医药卫生方面的应用
荷电材料是一类新型功能材料.正电性荷电材料表面带有较强的正电荷,对负电性的细菌、病毒和细菌内毒素有较强的亲和作用.本文介绍了将纤维、颗粒、微孔滤膜及深层滤器等各种形式的荷电材料用于纯水与药液除细菌内毒素、血液除菌、败血症治疗以及饮水中病毒浓缩回收等技术,分析了应用前景.
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水体病毒浓缩条件的优化
病毒浓缩条件的优化是水环境病毒污染监测及灭活去除效率评价的基础,本文开发了在待浓缩水样中预先加入钠化蒙脱石吸附病毒以增加其沉降性能,并在优化絮凝条件下用聚合氯化铝絮凝沉淀蒙脱石钠的水体病毒浓缩方法.该方法对人为污染的脊髓灰质炎病毒(Poliovirus 1, PV1)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、大肠杆菌噬菌体(Phage of Ecoli, E.cp)在闽江水、生活污水、自来水中分别有高于84.3%的浓缩回收率,说明该浓缩方法具有较广泛的适用性和应用前景,可为水体病毒污染监测及灭活去除评价提供一个简便、回收率高、成本低的浓缩方法.
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基于阳离子膜滤芯的环境水体病毒浓缩方法效果评价
目的 本研究评价和优化基于阳离子膜滤芯的环境水体病毒浓缩方法,为监测环境水体中的病毒提供方法依据.方法 采用基于阳离子膜滤芯NanoCeram的膜吸附洗脱法作为初级浓缩手段,结合有机絮凝和超滤法,从大体积初始水量中浓缩目标病毒.预实验评价不同有机絮凝条件对病毒基因拷贝数回收和病毒滴度的影响.结果 随着有机絮凝牛肉浸膏洗脱液pH值的上升,回收病毒的基因拷贝数存在下降趋势(β=41.59,P＜0.01).采用2种浓缩流程回收4种水体中的目标病毒,成组t检验显示两者差异有统计学意义(t=2.261,P＜0.05).当调节有机絮凝洗脱液pH值为2.0时,水源水中脊髓灰质炎病毒的回收率高达到7.87％.结论 本研究建立的方法可作为今后环境水体常规监测的有效手段.
关键词： 水体 病毒浓缩 脊髓灰质炎病毒 Real-time定量PCR法 -
HBV血液大样本浓缩核酸检测方案研究
目的 采用实时荧光定量检测方法,验证病毒浓缩的效率以及病毒浓缩对检测的影响.方法 模拟48人份样本混和后浓缩提取HBV DNA,聚乙二醇沉淀法进行病毒浓缩,进行HBV DNA实时荧光定量PCR检测,并分析浓缩效率及检测水平.结果 10 mL样本中HBV病毒浓缩的效率近90％,病毒检测水平优于100 copies/mL.结论 大样本混样后病毒浓缩效率理想,能有效提高病毒的检出度及血液安全并降低检测成本.
