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聚合酶链反应-增强化学发光法快速检测结核杆菌的研究
目的建立聚合酶链反应-增强化学发光法(polymerase chain reaction-enhanced chemiluminecence,PCR-ECL)快速高灵敏度和高特异性检测结核杆菌的方法.方法以结核分支杆菌、牛分支杆菌特异性抗原Pab基因的419bp片段为靶序列,PCR体系经优化,直接酶标法标记探针,增强化学发光检测(ECL)进行分子杂交.结果 PCR体系对结核分支杆菌、牛分支杆菌、卡介苗的扩增为阳性,PCR体系灵敏度为5fg DNA分子.ECL体系灵敏度为0.5pg DNA分子.采用模拟痰样,可检至10个以下结核杆菌.结论建立了结核杆菌的PCR-ECL快速检测方法,整个过程可在一天半内完成.
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化学发光法检测CYP1A1基因多态性
目的建立增强化学发光法(enhanced chemiluminescence, ECL)检测CYP1A1基因多态性的方法. 方法实验方法同ELISA法,鲁米诺过氧化氢增强化学发光体系加入酶标板的每一个孔中,用单光子计数器检测其发光强度,即可鉴定样本基因型. 结果 30个标本的检测结果与ELISA相同,其灵敏度比琼脂糖凝胶电泳高1000倍,比ELISA法高10倍,辣根过氧化物酶标记DIG抗体的量为0.2mU,比ASA-ELISA法少,1 h杂交便可以判断标本的基因型,佳杂交时间为1.5～2 h,杂交温度为40～55℃. 结论该方法是一种更加灵敏和简便,极具发展前景的检测基因多态性的方法.
关键词： 基因多态性 增强化学发光 地高辛 辣根过氧化物酶标记抗地高辛抗体 生物素 -
增强HRP化学发光酶联免疫分析研究进展
本文综述了近几年增强化学发光分析中,辣根过氧化物酶/鲁米诺/增强剂/过氧化氢(HRP/luminol/enhancer/H2O2)体系中各种增强剂的发现发展过程及其广泛应用,通过罗列比较协同增强剂、增强液、代谢物增强剂等不同时期不同类型的增强剂,得出当今增强剂的研发规律,指出未来新型增强剂的研发方向.
关键词： 增强化学发光 HRP-Luminol-H2O2体系 增强剂 临床应用 -
增强化学发光酶免疫分析法建立及测定血清中的胃泌素
自1977年Halman第一次把化学发光与免疫测定结合起来后,化学发光免疫分析(CLIA)成为一种重要的检测手段.比传统的RIA和ELISA具有更多的优越性,如与RIA相比,没有放射性传染,不会对人体产生损害,操作方便等,与ELISA相比,具有灵敏度高,能较好定量及达到检测要求,然而由于不断研究结果表明,一般的化学发光体系(Luminol-H2O2-HRP)在应用于免疫分析中由于大分子空间位阻作用,灵敏度还是不够理想[1].在加入某些特定酚类物质时,可提高化学发光免疫灵敏度.本文采用对羟基联苯[2]增强的Luminol-H2O2-HRP体系作为免疫分析的终检测手段,建立一种新的增中化学发光免疫分析法.
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聚合酶链反应-增强化学发光检测结核分枝杆菌
目的探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光(ECL)检测结核分枝杆菌(MTB).方法同时应用聚合酶链反应(PCR)-ECL、PCR-比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本,比较结果.结果 PCR-ECL、PCR-比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%,其中PCR-ECL阳性率显著高于PCR电泳(P<0.05);对涂片阳性标本,阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%,差异无显著性(P>0.05);对涂片阴性标本,阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%,PCR-ECL阳性率高于PCR电泳(P<0.05).另外PCR-ECL、PCR-比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%,差异无显著性(P>0.05).结论 PCR-ECL灵敏度高,能提高临床标本MTB检出率,尤其是对涂片阴性痰标本,并且该方法操作简单,结果客观.
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电泳迁移率变动分析化学发光法检测T细胞NF-κB活性
目的:建立凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)化学发光法检测T细胞激活后核因子κB (NF-κB)活性的方法.方法:人外周血单个核细胞(PBMC)用抗CD3单克隆抗体(mAB)激活T细胞后,提取细胞核蛋白与生物素标记的NF-κB特异性探针结合,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,转移至正电荷尼龙膜,加链霉亲和素辣根过氧化物酶和化学发光底物后用X光胶片显影,检测NF-κB活性.结果:人PBMC用抗CD3 mAB刺激后15 min,明显可见NF-κB活化,30 min时达高峰,60 min时降低.结论:EMSA化学发光法检测转录因子活性是一种较简捷和高灵敏度的技术,可用于检测T细胞活化后NF-κB活性变化.
关键词： 免疫学技术 凝胶电泳迁移率变动分析 增强化学发光 核因子-κB T细胞 -
Western-blot检测蛋白表达的方法改进及初步应用
目的探讨Western-blotting-增强化学发光法(ECL)在分析细胞周期调控蛋白表达中的应用.方法采用K562细胞,制备细胞核,对电泳、封闭、结合、检测等关键步骤进行了实验条件的摸索和改进,并对我室研究苦参碱诱导K562细胞分化机制的细胞周期蛋白的表达进行了分析.结果 30μg核蛋白质即可检测到K562细胞中,均有不同程度的CyclinE、Cdlk2、CyclinD1、Cdk5表达.结论Western-blotting-ECL法特异性强、灵敏度高,是分析蛋白质表达较为理想的方法.
