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血浆的新鲜程度对抗-HCV试剂检测结果影响的分析
目的:了解初次抗-HCV检测阳性或灰区标本多次复查后有反应性的比例.方法:酶联免疫吸附试验(ELISA),利用丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒测定40份抗一HCV阳性或者灰区的标本与之前初原始OD值进行比较,观察时间间隔对其测定结果的影响程度.结果:40份标本中第一次检测时有16份阳性(意①和科②均为阳性7份、意单独阳性6份、科单独阳性3份),24份灰区③(意和科均为灰区6份、意单独11份、科单独7份),经冷冻30-45天做第三次检测后40份有7份标本阳性(意和科均为阳性),4份灰区(意3份、科1份),29份标本阴性.
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应用微量稀释法测定消毒剂小抑菌 浓度方法的建立
目的 建立测定消毒剂小抑菌浓度(MIC)的微量稀释法.方法 采用微量稀释法,对部分消毒剂的MIC进行测定,并观察部分因素对测定结果的影响.结果 经对8株肺炎克雷伯菌临床分离株测试结果显示,三氯生有4株菌MIC值孵育48 h比24 h升高2倍,苯扎氯铵有1株菌MIC值升高2倍.继续对102株菌观察,西吡氯铵和醋酸氯己定也有MIC升高2倍的情况,只有十六烷基三甲基溴化铵MIC不发生变化.醋酸氯己定MIC基本不受所用肉汤培养基的影响,阳离子调节MH肉汤测定其余4种消毒剂MIC值为普通营养肉汤的2～4倍.利用OD600对无药物析出的醋酸氯己定和有药物析出的苯扎氯铵MIC进行判定和肉眼判读的结果完全一致.结论 初步建立了以OD600来判定消毒剂MIC值的96孔板微量肉汤稀释方法.
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不同水解温度、时间对细胞核产物与DNA含量检测的影响
目的 探讨水解产物变化趋势与染色效果的相关性以及两种不同染色方法达到佳染色效果的水解时间,为科研和临床的应用提供有价值的参考.方法 选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织,一部分制成恒定细胞数的肝细胞滴片,5N HCL水解后,紫外分光光度计扫描产物的大吸收峰波长,并检测该产物OD值的变化;另一部分肝组织制成肝细胞涂片,分别在室温和60℃温度下水解不同时间,应用改良和快速两种Feulgen法染色,图像分析仪检测和分析单个细胞核的DNA含量与倍体.结果 (1)肝细胞滴片水解产物扫描在260 nm处有大吸收波峰;(2)紫外分光光度计在室温和60℃水解温度下测得水解产物的量随着时间的延长逐渐增加;(3)同一大鼠在相同水解温度下,经过不同时间水解,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异:60℃水解温度下,IOD(5～7 min)>IOD(9～15 min)>IOD(1 min,20 min),室温水解温度下,IOD(50 min)>IOD(20～30 min,70～90 min)>IOD(5～10min,100 min).结论 HCL对细胞核的水解作用使DNA双链中糖苷键断裂,醛基暴露,碱基脱至HCL中,且量逐渐增加;HCL水解时间与染色的效果不成正比,两种Feulgen染色法存在各自较佳染色效果的时间段,分别为:快速法5～7 min,改良法20～90 min.
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ELISA法测定小鼠血清中流脑抗体效价
目的 采用酶联免疫吸附测定技术(ELISA)测定流脑疫苗效价,同时为提高效价测定的准确度,选定包被抗原佳工作浓度及待测血清佳稀释比,为疫苗效价测定提供科学依据.方法 分别以不同浓度C 群多糖抗原液为包被抗原,以稀释过的免疫小鼠血清为待测抗体,采用ELISA 间接测定法测定抗体效价,寻求包被抗原佳工作浓度;然后包被抗原在其佳工作浓度下包被酶标板,以不同稀释比的免疫小鼠血清为待测抗体,测定血清中抗体效价,寻求待测血清佳稀释比;后在包被抗原佳工作浓度及待测血清佳稀释比下,测定小鼠血清中流脑抗体的效价.同时检测该方法 的特异性、稳定性和重复性.结果 ELISA 测定流脑疫苗效价的包被抗原佳工作浓度及待测血清佳稀释比分别为160μg/mL 和1:4,同时该浓度下测定的免疫小鼠血清中流脑疫苗抗体效价为(1.274±0.003),阳转率为100%.说明该批疫苗产品合格(判定标准:阳转率≥ 90%).批内批间变异系数均＜ 7%,表明该测定技术具有良好的稳定性和重复性.结论 建立了一种灵敏、特异、简便易行的ELISA 法检测流脑疫苗效价,为流脑的预防、控制和诊断提供了一种技术手段.
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外用益肺止喘膏的平喘化痰实验研究
目的 研究益肺止喘膏的止咳化痰作用.方法 采用"浓氨水喷雾法"、"喷物致喘法"和"气管段酚红法"进行实验.结果 及结论益肺止喘膏对"浓氨水喷雾法"引起小鼠的咳嗽和"喷物致喘法"引起的豚鼠气喘反应有降低作用,并具有一定的化痰作用.
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HBsAg破坏试验载体法制片中温度及时间对HBsAg回收率的影响
目的比较两种温度制片及不同洗涤时间对载体上HBsAg含量的影响.方法用37℃、4℃两种温度制片载体经30min振荡洗涤或先经4、8、12h浸泡后再振荡洗涤,用ELISA法测定各自的OD值.结果 37℃制片HBsAg的回收率为88.69%,4℃制片为97.46%,两者之间有显著性差异(P＜0.05).两种载片经30min振荡洗涤和经4℃浸泡4h后再振荡洗涤,37℃HBsAg回收率为87.93%和93.93%,4℃为96.53%和98.47%.二者对应比较,有非常显著差异(P皆＜0.01).结论在载体法HBsAg破坏试验中,用4℃制片及载体经4h浸泡后再振荡洗涤,回收率效果好.
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血袋保养液在抗-HCV酶免试剂应用中的影响
目的 了解血袋内装保养液在国产抗-HCV酶免试剂应用中,对检测结果的影响程度.方法 取效期内使用的CPDA血袋保养液按1∶7比例混合抗-HCV低值阳性血清,在同一微板、同样加样手法条件下,平行做未稀释血清、稀释后血清、血袋保养液各20孔,重复及对照试验各做3孔.结果 血袋保养液对抗-HCV检测结果本底无影响,对低值阳性血清即弱阳性标本影响较大,在一定范围内可造成结果的漏检.结论 采集血液后留取血样标本或重验标本,应考虑到有无血袋内装保养液或其它溶液的影响,以减少结果的不准确性.
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体外培养肌腱细胞增殖与碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)的关系探讨
目的 探讨不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)对体外培养肌腱细胞增殖和量效关系的影响,并初步估计促增长的佳浓度.方法 免疫组化细胞定性,MTT法染色,在酶联免疫检测仪上测出不同浓度BFGF组吸光度OD均值. 结果与对照组OD均值相比:1.0、2.0、5.0、10、30、40、50 ng/ml BFGF组有显著性差异(P＜0.05);0.5、20 ng/ml BFGF组无显著性差异(P＞0.05).各组OD均值随BFGF浓度的增加,先逐渐增大(0～5.0 ng/ml),达到峰值后,又逐渐减少(5.0～50 ng/ml). 结论 1.0、2.0、5.0、10 ng/ml BFGF有促进肌腱细胞增殖作用;0.5和20 ng/mlBFGF对肌腱细胞增殖无明显作用;30、40、50 ng/ml BFGF有抑制肌腱细胞增殖作用.5.0 ng/ml是促肌腱细胞增殖佳BFGF浓度.
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4种提取口腔产黑色素细菌DNA方法的比较
目的 比较4种提取口腔产黑色素细菌中间普氏菌DNA的方法,即酚-氯仿法、溴化十六烷基三甲铵(CTAB)提取法、Chelex-100提取法及试剂盒.方法 分别记录OD260、OD230、OD280及OD340值;聚合酶链反应(PCR)电泳,检测提取DNA的浓度、纯度及对PCR反映体系的影响.结果 试剂盒及CTAB法去除黑色素比较差异无统计学意义(P＞0.05),两者与酚-氯仿及Chelex-100法比较差异有统计学意义(P＜0.05);CTAB法提取DNA的浓度及纯度的效果要优于试剂盒,差异有统计学意义(P＜0.05),PCR电泳条带清晰,无拖带.结论 CTAB法可有效去除黑色素及其他杂质,同时获得较高浓度的DNA样品;黑色素并不溶于氯仿/异戊醇混合液,对PCR反应体系有很大影响.
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栀子黄色素不同标准的合理性探讨
目的 测定不同厂家栀子黄色素样品,并探讨与日本栀子黄色素标准的合理性.方法 采用UV法测定样品色价、OD值.HPLC法的流动相A为水,B为乙腈,梯度洗脱;流速1.0 mL· min-1,柱温35 ℃,检测波长238 nm(0～20 min)、440 nm( 20 ～ 60 min).结果与结论 各产品中西红花苷的含量和色价具有相关性,栀子苷的含量与OD值的比率无明显的相关性,栀子苷和西红花苷的含量无对应关系,各项控制指标均提示日本标准更为合理.
