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双重病因对新生儿高胆红素血症发生率影响探讨
目的:探讨存在葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏和新生儿溶血病(HDN)双重病因对新生儿高胆红素血症发生率的影响.方法:按检验操作规程对足月健康新生儿脐血进行G6PD和HDN血型血清学检验,对存在G6PD缺乏和HDN病因的新生儿调查其高胆红素血症发生率.结果:①G6PD缺乏组、HDN病因组、G6PD缺乏与HDN双重病因组的患儿高胆红素血症发生率均极显著高于正常对照组的新生儿(P＜0.01);②存在G6PD缺乏和HDN双重病因的患儿高胆红素血症发生率极显著高于G6PD缺乏组和HDN病因组的患儿(P＜0.01).结论:存在G6PD缺乏和HDN双重病因的患儿红细胞溶血破坏的几率增高,其发生高胆红素血症的可能性更大.
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人G6PD T279A和T279S两种突变子的体外构建
目的:构建葡萄糖6磷酸脱氢酶(Glucose 6-phosphate dehydrogenase,G6PD)T279A和T279S两种突变子.方法:以Genbank No X03674为参考序列设计并合成引物、以含G6PD基因的质粒(Philip JMason博士惠赠)为模板,PCR扩增获得G6PD野生型基因片段,琼脂糖凝胶电泳后回收PCR产物,连接、转化构建克隆质粒pMD18T-G6PD;酶切pMD18T-G6PD质粒、电泳后回收目的基因片段,连接、转化构建含G6PD野生型基因的重组质粒pAL-G6PD;设计并合成含有突变序列的引物,以pAL-G6PD为模板,体外扩增获得G6PD835-海口(835A→G,T279A)和835-中国-1(835 A→T,T279S)突变子.结果:酶切后经电泳鉴定表明获得与预期大小相符的pMD18T-G6PD质粒,EcoRI和Hind Ⅲ双酶切获得与预期大小相符的pAL-G6PD,测序结果与参考序列完全一致.0.8%的琼脂糖凝胶电泳鉴定,并定量pAL-G6PD单链DNA浓度约为200ng/uL.经测序鉴定并与参考序列比对结果表明获得了G6PD的T279A和T279S两种突变子.结论:成功构建了G6PD的T279A和T279S两种突变子,为下一步原核表达、生化性质以及酶动力学等研究奠定了基础.
关键词： 葡萄糖6磷酸脱氢酶 葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症 定点突变 聚合酶链反应 -
应用荧光法筛查葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症
目的探讨荧光法筛查新生儿葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症中的实用性.方法新生儿出生72 h后采足跟血,滴在规定的滤纸上,采用荧光法测定G6PD活性水平,同时与荧光斑点法、G6PD/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酸(6PGD)比值法进行比较.并且检测3 706例新生儿G6PD正常水平及筛查临界值(cut off值).结果该方法低检测限为0.52 U/gHb,批内平均变异系数(CV)为9.8%,批间平均CV为11.1%,高、中、低3个浓度的平均回收率为96.4%.实验结果与目前国内筛查使用的荧光斑点法的符合率为97.5%,和G6PD/6PGD比值法的符合率为100%.筛查cut off值建议定为2.7 U/gHb.结论荧光法适用于新生儿G6PD缺乏症的筛查.
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全自动新生儿疾病筛查系统的性能评价
目的 对全自动新生儿疾病筛查系统(GSP)进行性能评价.方法 按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP15-A2文件的要求,对新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)、先天性肾上腺皮质增生症(CAH)、苯丙酮尿症(PKU)和葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症4种疾病筛查的对应检测指标——促甲状腺素(TSH)、17-羟基孕酮(17-OHP)、苯丙氨酸(Phe)和G6PD进行检测,评价GSP的精密度、正确度、线性范围等,并与目前临床常规使用的荧光酶免疫分析法(TSH、17-OHP)和荧光法(Phe、G6PD)进行比对.结果 GSP检测TSH、17-OHP、Phe、G6PD批内不精密度和总不精密度均在厂商要求的范围内;与美国疾病预防控制中心(CDC)新生儿筛查室间质评样本靶值的偏移为-8.37%~12.96%,均<1/2允许总误差(TEa).线性回归方程的截距b为0.83~1.69,r2>0.95,达到厂商声明的线性要求(r2≥0.90).GSP与荧光酶免疫分析法和荧光法的一致性非常好(Kappa值分别为0.83、0.73、0.93和0.97,P<0.001),检测结果高度相关(r值分别为0.97、0.94、0.99、0.91,P<0.001).结论 GSP的精密度、正确度、线性范围均达到了厂家声明的检测性能,可用于临床检测.
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两种方法测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的对比研究
目的 比较荧光法和紫外分光光度法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G16-PD)活性的性能与应用价值.方法 通过荧光法和紫外分光光度法两种方法 对质控品准确性和精确性的检测以及对1 200名足月健康新生儿G-6-PD活性的检测,比较两种方法 使用的合理性.结果 荧光法和紫外分光光度法对G-6-PD质控品的检测无明显差异(P>0.05);两种方法 筛查的临界值均为2.8 U/gHb.结论 两种方法 可以作为临床新生儿G-6-PD活性检测的重要方法 推广使用,同时临床可以将G-6-PD活性临界值定为2.8 U/gHb,作为筛查G-6-PD缺乏症的参考依据.
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葡萄糖-6磷酸脱氢酶活性对珠蛋白生成障碍性贫血的辅助诊断价值
目的 探讨葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G-6PD)活性对珠蛋白生成障碍性贫血(地贫)的辅助诊断价值及其适用范围.方法 采用琼脂糖凝胶血红蛋白电泳和(或)地贫基因检测、血常规、血清铁蛋白、G-6PD活性测定筛选940例儿童样本,将其分为3组(A组820例为单纯地贫患儿,B组40例为单纯缺铁性贫血(IDA)患儿,C组80例为健康对照组),并对其G-6PD值进行相关统计分析.结果 血红蛋白H(HbH)病、重型β地贫、中间型β地贫、IDA、轻型β地贫、α复合β地贫、轻型α地贫的G-6PD活性水平分别为(35.23±7.11)、(34.95±10.72)、(26.64±10.85)、(23.86±7.68)、(19.89 4-5.99)、(18.65±6.67)、(16.75±5.49)NBT单位,与健康对照组比较均有显著性差异(Pa＜0.05).G-6PD值辅助诊断HbH病及重型β地贫优的临界点为25.75 NBT单位,ROC曲线下面积(Az)为0.903,灵敏度和特异度分别为83.1%、85.1%.αα/-α37和αα/-α-42二种静止型α地贫G-6PD值分别为(14.61±4.19)和(13.14±3.99)NBT单位,17M杂合子和41-42M杂合子2种轻型p地贫G-6PD水平分别为(18.77±6.81)和(22.94 4-7.43)NBT单位,经统计学分析无显著性差异(P＞0.05).结论 G-6PD活性对地贫的辅助诊断有一定价值,但有其适用范围,适用于HbH病及重型B地贫,不适用于地贫基因类型的鉴别.
关键词： 珠蛋白生成障碍性贫血 葡萄糖6磷酸脱氢酶 辅助诊断 -
清远地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的筛查分析
目的:探讨分析粤北清远地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症筛查的结果和筛查的重要性.方法:清远地区各县市医院采集新生儿出生后3～5天的足跟血,滴在滤纸片上风干送到本院新生儿筛查中心进行检测.采用荧光斑点法测定G6PD活性水平,初筛阳性患儿电话召回采集外周血用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酸(6PGD)定量比值法进行验证检测.结果:2016年清远地区筛查新生儿总数为57815人次,G6PD缺乏症初筛阳性3568人次,阳性率为6.17％(3568/57815);其中男性1986人次,占55.7％(1986/3568),女性1582人次,占44.3％(1582/3568).全年共召回初筛阳性患儿1085例,定量比值法验证阳性数为1066人次,符合率为98％(1066/1085),其中男性659例,符合率100％,检出率为60.7％(659/1085);女性426例,其中407例阳性,符合率为95.5％(407/426),检出率为37.5％(407/1085),19例阴性,占1.8％(19/1085).结论:本地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症发生率高,并且男性高于女性;对新生儿早期进行G6PD缺乏症的筛查,可以降低患高胆红素血症的风险,对预防新生儿核黄疸的发生有重要意义.
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1 720例新生儿脐血G6PD筛查报告
目的 了解南宁市区新生儿G6PD缺乏的发生率,探讨预防和早期治疗新生儿高疸红素血症及急性溶血症的方法.方法 新生儿脐血标本1 720份,用四氮唑蓝(NBT)定量法进行检测.结果 G6PD缺乏195份,缺乏率为11.34%,其中男13.36%(126/943),女8.88%(69/777),男性G6PD缺乏率高于女性(P＜0.01).结论 采用新生儿脐血筛查G6PD,取血方便,简单,能有效早期检出G6PD缺乏患儿,结果准确,在新生儿遗传性疾病筛查中得到广泛应用.
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母体乙肝病毒感染与新生儿黄疸关系的临床研究
目的 探讨母体乙肝病毒感染与不同类型新生儿黄疸的关系.方法 385例病理性黄疸新生儿患者根据母体乙型肝炎抗原阳性与否分为肝炎组与非肝炎组,比较两组患儿溶血性黄疸与G-6PD缺乏症黄疸比例,并比较不同黄疸类型情况下,两组患儿胆红素水平差异.结果 (1)母体乙型肝炎抗原阳性者52例,乙型肝炎抗原阴性者333例.肝炎组与非肝炎组乙型新生儿溶血病,G6PD缺乏症以及其他原因导致溶血发生率分布情况差异有统计学意义(x2=385.000,P＜0.001).乙型肝炎抗原阳性组G6PD缺乏症阳性率为34.6%,乙型肝炎抗原阴性组G6PD缺乏症阳性率为22.5%.两组患儿新生儿溶血病阳性率差异相对比较小,分别为50.5%与42.3%.(2)G6PD缺乏症患儿中,母体乙型肝炎抗原阳性组高总胆红素水平与乙型肝炎抗原阴性组差异有统计学意义(t=4.672,P＜0.01).非G6PD缺乏症溶血,如新生儿溶血病与其他类型黄疸,母体乙型肝炎抗原阳性患儿组高总胆红素水平与乙型肝炎抗原阴性组无显著差异(P＞0.05).结论 新生儿黄疸中,母体乙型肝炎抗原阳性者新生儿G-6PD缺乏症发生率高,并与G-6PD缺乏症病情有关.
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G6PD缺乏对新生儿高胆红素血症患儿心肌酶的影响
目的：研究葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏是否会加重新生儿高胆红素血症患儿的心肌损伤从而影响患儿血液中心肌酶的水平。方法选取2012年10月至2013年11月在我院出生的新生儿黄疸患儿190例，经检查后分组，将其中139例高胆红素血症患儿分为观察组，余51例生理性黄疸患儿分为对照组；观察组患儿根据G6PD是否正常再分为观察Ⅰ组79例(G6PD正常)和观察Ⅱ组60例（G6PD缺乏)，抽血检测所有患儿总胆红素(TBIL)、葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)以及肌酸激酶同工酶(CK-MB)，并对检测结果进行比较分析。结果观察组中139例患儿的平均血清TBIL含量[(269.7±31.3)μmol/L]明显高于对照组[(186.5±19.8)μmol/L]，两者比较差异具有统计学意义(P<0.05)；观察组患儿血清中AST、LDH、CK、CK-MB等心肌酶的平均含量均明显高于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)；观察Ⅱ组患儿与观察Ⅰ组患儿胆红素水平含量比较差异无统计学意义(P>0.05)，但观察Ⅱ组患儿AST、CK、CK-MB、LDH等心肌酶的平均含量均明显高于观察Ⅰ组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论高胆红素血症可以对心肌细胞造成损伤从而引起心肌酶水平的变化，新生儿高胆红素血症患儿的心肌酶升高程度与其黄疸水平呈正相关；G6PD缺乏可增强高胆红素血症对心肌细胞造成的损伤。
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地中海贫血和G6PD缺乏症联合检测在产前检查中的应用价值
目的 探索地中海贫血和G6PD缺乏症联合检测在产前检查中的应用价值.方法 抽取2012年1月至2015年12月3 659对产前检查夫妇(共7 318例),采用平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)进行地中海贫血初筛,对地中海贫血初筛阳性者进行基因检测,同时采用酶速率法检测G6PD活性.结果 7 318例受检者中,地中海贫血的检出率为9.67%(708/7 318),男性占5.16%(378/7 318),女性占4.51%(330/7 318);G6PD缺乏症的检出率为6.96%(509/7 318),男性占3.67%(269/7 318),女性占3.29%(240/7 318),其中地中海贫血合并G6PD缺乏症者的检出率为0.61%(45/7 318),男性占0.34%(25/7 318),女性占0.27%(20/7 318),占地中海贫血患者的6.36%(45/708).地中海贫血合并G6PD缺乏者的MCV、MCH高于单纯地中海贫血患者,差异有统计学意义(P<0.05),单纯G6PD缺乏症者MCV和MCH与健康人比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 深圳是地中海贫血和G6PD缺乏症者的高发区,其发生率男性高于女性;G6PD缺乏可影响MCV、MCH地中海贫血筛查的敏感性.产前进行地中海贫血和G6PD缺乏症联合检测,有助于避免重型地中海贫血患儿的出生和对新生儿溶血症的干预,对提高出生人口的素质有重要的意义.
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地中海贫血和葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏联合检测在孕前检查中的临床价值
目的 探讨地中海贫血和葡萄糖6磷酸脱氢酶(glucose 6 phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏联合检测在孕前检查中的临床价值.方法 选取2010年10月至2012年10月孕前检查夫妇2 816例,采用地中海贫血一管筛查法检测地中海贫血,采用G6PD比值法检测G6PD缺乏,采用单管多重聚合酶链反应(growth associated protein-polymerase chain reaction,GAP-PCR)法检测α-THal基因,采用反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)检测β-THal基因.结果 地中海贫血患者的溶血百分比明显低于正常人,G6PD缺乏患者的G6PD活性明显小于正常人,α-THal基因+β-THal基因地中海贫血患者溶血百分比明显低于α-THal基因患者和β-THal基因患者,α-THal基因+β-THal基因G6PD缺乏患者G6PD活性明显小于α-THal基因患者和β-THal基因患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).β-THal基因地中海贫血患者溶血百分比低于α-THal基因患者,β-THal基因G6PD缺乏患者G6PD活性小于α-THal基因患者,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 地中海贫血和G6PD缺乏联合检测在孕前检查中具有重要的临床价值,可提高疾病诊断的准确率.
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新生儿高胆红素血症病因分析
目的了解本地区新生儿发生高胆红素血症的主要病因.方法按全国临床检验操作规程,对出生后1周内发生高胆红素血症的279名患儿做葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)定量测定和HDN血型血清学检验.结果在279名患儿中,G6PD缺乏的有52名(18.64%),G6PD缺乏的男性患儿显著多于女性(X2=4.41 P＜0.05);母子ABO血型不合的HDN有77名(27.6%),母/子血型O/A(B)二种组合的患儿HDN发病率极显著多于母/子血型A(B)/B(A)4种组合的患儿(X2=29.49 P＜0.01);母子Rh血型不合的HDN有1名(0.36%).结论G6PD缺乏和母子ABO血型不合所致的HDN是本地区新生儿发生高胆红素血症的主要病因.
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新疾病模式生物斑马鱼G6 PD酶活性的动态研究
目的：观察不同发育时期的斑马鱼胚胎、成年斑马鱼不同组织的G6PD酶活性及g6pd mRNA的表达。方法：收集受精后24 h（24 hpf）、48 hpf、受精后5 d（5 dpf）及15 dpf的野生型斑马鱼胚胎，同时收集成年斑马鱼的脑、肌肉、鳃、皮肤、眼睛及肠等组织，运用改良 G6PD定量比值法和RT-PCR法检测上述胚胎或组织的G6PD酶活性及g6pd mRNA表达水平。结果：G6PD 酶活性、g6pd mRNA 表达水平在24 hpf、48 hpf、5 dpf 及15 dpf比较，差异无统计学意义（ P﹥0.05）；在成年斑马鱼的脑、肌肉、鳃、皮肤、眼睛及肠等不同部位组织比较，差异也无统计学意义（ P﹥0.05）。结论：野生斑马鱼G6PD酶活性、g6pd mRNA表达水平不受胚胎发育时期和组织部位的影响。
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标本存放对葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)活性的影响
葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)定量测定作为诊断G6PD缺乏症的有效方法,已受到检验工作者的广泛重视.为了进一步保证检验结果的质量,笔者对健康体检标本测定G6PD活性后,将标本分别在室温(16～25 °C)及冷藏(4～6 °C)保存,测定其不同时间内G6PD的活性变化,结果报道如下.
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秃疮花提取物对红细胞氧化性溶血的抑制机制
目的 探讨秃疮花提取物对鼠红细胞氧化性溶血的影响及其机理.方法 以H2O2诱导体外鼠红细胞发生氧化性溶血,以乙酰苯肼引发小鼠体内溶血性贫血,观察不同浓度或剂量秃疮花对鼠红细胞溶血率,细胞形态、小鼠体内红细胞、白细胞数量,血红蛋白含量,血浆丙二醛含量,以及红细胞内各种抗氧化酶活性的影响,并分析其作用机理.结果 外秃疮花提取物对H2O2诱导的鼠红细胞溶血的抑制率可达78%.小鼠腹腔注射秃疮花提取物后,与模型组比较,红细胞数目增加,血红蛋白含量提高,白细胞数目减少,血浆丙二醛含量降低,四项指标均接近正常组(腹腔注射DLF 1.5 g/(kg·d),红细胞数目为8.49×1012/L);损伤小鼠腹腔注射秃疮花提取物后,红细胞内超氧化物歧化酶活性和血浆总抗氧化力无明显改变,而过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性显著提高,葡萄糖6磷酸脱氢酶活性上升极显著(较损伤组提高44.7%).结论 秃疮花提取物在体内外可分别抑制由H2O2和乙酰苯肼引发的鼠红细胞氧化性溶血,效果明显.小鼠腹腔注射秃疮花提取物后,红细胞内抗氧化酶活性普遍提高,提示秃疮花提取物通过增强红细胞的自由基清除能力而使细胞膜免受氧化性损伤,其中葡萄糖6磷酸脱氢酶活性的上升尤为显著,据此推测秃疮花提取物有可能通过抑制乙酰苯肼对葡萄糖6磷酸脱氢酶的干扰而缓解鼠红细胞的氧化性溶血.
