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免疫抑制剂FK506对大鼠移植肢体Bcl-2与Bax mRNA表达及细胞凋亡的影响
背景:肢体移植过程中,细胞凋亡是引起移植物丧失功能的主要机制之一,严重时可导致移植失败.假设免疫抑制剂的作用与细胞凋亡有关.目的:观察免疫抑制剂FKS06对大鼠异体肢体移植模型Bcl-2 mRNA,Bax mRNA表达及细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-06/2006-11在哈尔滨医科大学附属第一医院实验动物中心实验室完成.材料:清洁级健康雄性SD受鼠及Wistar供鼠各56只.FK506为口本藤泽药品有限公司产品,批号100143G.方法:将供鼠右后肢自大腿上段离断,肝素盐水冲洗供肢内残血,对受鼠行右后肢原位异体移植建立损伤模型.造模后受体鼠随机分为两组:免疫抑制组注射FK506 1 mg/(kg·d),对照组不给予任何免疫抑制剂,28只/组.术后1,3,5,7d切取大鼠右后肢包含皮肤、皮下组织、肌肉、股动静脉的组织块待测.主要观察指标:RT-PCR法检测移植肢体Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达,应用细胞凋亡原位末端标记技术检测细胞凋亡情况.结果:56只模型鼠均进入结果分析.FK506注射3,5,7d,免疫抑制组Bcl-2mRNA的表达量显著高于对照组(t=7.18～21.20,P<0.01):Bax mRNA表达量显著低于对照组(t=3.35～14.01,P<0.01或0.05);细胞凋亡指数显著低于对照组(t=7.17～9.42,P<0.01).结论:FK506能使移植肢体中Bcl-2 mRNA表达增强,Bax mRNA表达减弱,抑制细胞凋亡的发生.
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大鼠异体肢体移植术后急性排斥反应外周血T淋巴细胞亚群变化
目的对大鼠同种异体肢体移植术后急性排斥反应阶段外周血T淋巴亚群的动态监测,以了解其变化与受者免疫状态之间的关系.方法在异体肢体移植术后1、3、5、7、9 d,运用流式细胞仪测试外周血T淋巴细胞亚群动态变化.结果术后1 d,外周血CD4+和CD8+细胞均明显增加,CD4+/CD8+比值与术前CD4+/CD8+比值差异不显著(P＞0.05),术后3 d,CD4+增加显著,CD8+增加不明显,CD4+/CD8+比值明显升高,与术前和术后1 d比较差异(P＜0.01),术后5～9 d,CD4+/CD8+比值仍维持较高水平.结论外周血CD4+/CD8+细胞比值系列变化可用于预测肢体移植急性排斥反应.
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大鼠异体肢体移植术后急性排斥反应中血管内皮细胞的凋亡变化
本研究旨在观察大鼠异体肢体移植术后急性排斥反应中血管内皮细胞的凋亡的情况,探讨血管内皮细胞凋亡机制在急性排斥反应中的作用,现将结果报道如下.
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胸腺内注射供体MHC抗原对同种异体肢体移植的影响
目的 探讨胸腺内注射异基因抗原对同种异体肢体移植存活的影响.方法 Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体.将SD大鼠随机分成3组,A组;自体肢体移植组；B组:异体肢体移植组；C组:胸腺内注射组.术后观察肢体的存活时间,并在术后7d进行移植肢体皮肤苏木精-伊红染色检查及血清IFN-γ细胞因子的检测.结果 C组肢体存活时间长于B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).组织学检查发现,C组出现的炎症排斥反应以及组织的改变明显较B组轻,与A组相接近.IFN-γ的检测,C组低于B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 胸腺内注射异基因抗原可以对异体肢体移植产生特异性免疫耐受作用.
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异体手移植
由于创伤、肿瘤切除或先天性原因所致的肢体缺失，往往使患者丧失劳动能力甚至丧失生活自理能力，给家庭和社会带来沉重的负担。为了克服部分障碍和弥补外观，可给患者佩戴假肢。下肢假肢可起到一定的行走、站立和负重的作用，可不同程度地解决生活上的难题；但对上肢假肢的功能要求更高、更复杂，即使是三维电子手也只能完成手部粗大的动作，难以适应生活与工作的需要。从理论上讲，目前解决肢体缺失这一世界性难题理想的方法是通过组织工程和克隆技术重新再造复合组织的肢体。但组织工程和克隆技术是21世纪基础研究的世纪性课题，在相当长的时间里尚难以过渡到临床。因此，国内外许多学者普遍认为解决肢体缺失这一临床难题，可能、直接的方法，首先将仍然是异体肢体（手）移植。 一、异体肢体（手）移植的提出、观念与成功 肾、心、肝、肺等内脏器官移植属于单一的组织移植，其移植技术目前较为成熟。但肢体却包括皮肤、皮下组织、肌肉、神经、血管、骨、骨髓等，由多种组织构成，故异体肢体移植属于复合组织移植［1］，其免疫排斥反应较为强烈。自20世纪60年代以来虽有实验研究但进展缓慢，主要原因是受制于较强的免疫排斥反应，同时在人们的观念中多认为肢体缺失的严重性不如心、肝、肾、肺等重要生命器官衰竭对人体的影响，因而对异体肢体移植的临床研究近乎无人敢于涉足。随着组织配型技术的发展、免疫抑制剂与降低免疫排斥反应综合措施研究的进展, 以及联合应用新免疫抑制剂治疗的动物异体肢体移植的长期存活［2,3］，以及自体肢体再植等令人鼓舞的结果［4,5］，为人体异体肢体移植尤其是异体手移植奠定了坚实的基础。另外，人们生活水平的提高和对生活质量的日益追求，肢体缺失的修复再造日益受到患者和医生的重视。人们对这一手术的观念亦发生了转变。
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异体肢体移植研究进展
异体肢体移植属于复合组织移植,各种不同成分有不同的抗原性.而且,如果发生排斥反应,各种成分的机制也不尽相同.由于在人们的观念中多认为肢体缺失的严重性不如心、肝、肾、肺等重要生命器官衰竭对人体的影响,同时由于所用药物有种种毒副作用,因而对异体肢体移植的临床研究一直近乎无人敢于涉足.但是,随着科学技术的发展和异体肢体移植在临床上取得的巨大成功[1、2],人们开始认识到异体肢体移植是可以成功的,而且这方面的基础研究也逐渐广泛开展.本文拟就异体肢体移植中免疫抑制剂的应用和免疫耐受的诱导两方面的进展作以下综述.
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供体脾细胞胸腺注射对大鼠肢体移植存活的研究
目的:通过大鼠肢体移植模型,旨在分析供体脾细胞注射对大鼠肢体移植中免疫耐受的诱导作用.方法:选择雄性Wistar和SD大鼠为供、受体,对照组为胸腺注射脾细胞培养液,实验组为供体脾细胞注射,进行了16例异体肢体移植动物实验.观察大鼠移植肢体排斥反应时间及存活时间.结果:对照组肢体平均存活时间为(9.38±1.92)d;实验组移植肢体存活时间为(15.38±2.97)d.结论:供体脾细胞胸腺注射大鼠肢体移植术后能够明显延长移植肢体的存活时间.
