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缺血再灌注后心肌细胞缝隙连接通讯改变与其凋亡及坏死的关系
目的:了解不同缺血再灌注时间心肌细胞缝隙连接通讯改变情况,分析心肌细胞缝隙连接通讯与心肌细胞坏死、凋亡的关系以及卡维地洛、庚醇的干预作用.方法:实验于2004-10/2005-03在中日友好医院临床研究所完成.取培育7 d心肌细胞缺氧30 min后换用正常含糖的DMEM培养基培养1,2,3,6 h,造成再给氧损伤.给药方案:分为三组;未用药组,庚醇组,卡维地洛组.庚醇用DMEM(含5%的小牛血清)配成1,2 mmol/L的浓度,卡维地洛配成0.001 g/L的浓度,分别加入药物于受试细胞,培养细胞30 min后再做相关实验.未用药组不加药.采用细胞划痕技术,在倒置荧光显微镜下直观地观察不同组别、缺氧再灌注不同时间罗氏黄经过缝隙连接流通情况.利用流式细胞仪观察缺氧再灌注不同时间细胞凋亡情况.结果:①在缺氧30 min时心肌缝隙连接通讯明显下降,荧光仅传至划痕附近第二列细胞,正常细胞荧光则传至四列以外的细胞.再供氧1 h时恢复到第三列,以后逐步恢复到正常.运用庚醇后传导明显减慢荧光仅传至第二列细胞,缺氧和再供氧时传导也无明显变化.运用卡维地洛后传导改变不明显.②正常和缺血30 min时凋亡指数差异无显著性(P＞0.05),再供氧1 h凋亡指数为27.4%,与正常相比差异显著(P＜0.01).坏死的心肌细胞在再供氧2 h后差异有显著性(P＜0.01).运用卡维地洛、庚醇后凋亡指数在再灌注1 h时分别较未用药组减少了55.11%,21.53%.③培养7 d的心肌细胞搏动频率为(120±18)次/min,缺氧30 min时,搏动减弱,次数为(56±16)次/min,再供氧1 h时,搏动次数为(118±22)次/min,两者差异显著(P＜0.01).加入浓度为2 mmol/L的庚醇后,心肌细胞搏动明显减弱,约为(64±20)次/min,差异显著(P＜0.001).加入0.001 g/L卡维地洛搏动次数也有不同程度的减低(P＜0.05).在缺氧再灌注过程中,两个干预组搏动次数变化不大.结论:心肌细胞在缺氧时缝隙连接通透性减低,庚醇、卡维地洛也有不同程度的降低缝隙连接通讯的作用.庚醇、卡维地洛通过改变缝隙连接通讯以及其他方面的作用来减少心肌细胞的死亡和凋亡.
关键词： 心肌细胞凋亡 缝隙连接通讯 划痕标记染料示踪技术 卡维地洛 庚醇 -
应用划痕标记染料示踪技术检测草苁蓉甲醇提取物对大鼠肝癌细胞功能的影响
目的:通过划痕标记染料示踪实验,初步筛选出对大鼠肝癌细胞GJIC功能有较强恢复和促进作用的草苁蓉甲醇提取物药物终浓度.方法:大鼠肝癌细胞随机分为5个组:分别为1个对照组、4个实验组.4个实验组加入草苁蓉甲醇提取物药物终浓度分别达到0.25g/L、0.5g/L、0.75g/L、1.0g/L.结果:大鼠肝癌细胞经草苁蓉甲醇提取物(BR)0.75g/L、1.0g/L作用48h后的细胞中,荧光染料出现在划痕的附近细胞内至划痕以外的5～6列甚至7～8列细胞内,半定量为((｜)),形成连片状的荧光染色,荧光亮度明显增加,细胞间染料传输功能显著增强.结论:通过划痕标记染料示踪实验,初步筛选出草苁蓉甲醇提取物0.75、1.0g/L对细胞GJIC功能有较强恢复和促进作用.
关键词： 划痕标记染料示踪技术 草苁蓉甲醇提取物 大鼠肝癌细胞 检测 -
缺氧再复氧对心肌细胞缝隙连接通信影响的研究
目的 研究不同缺氧再复氧时间心肌细胞缝隙连接(Gap junction,GJ)通信改变情况,以及庚醇(Heptanol,HT)对GJ通信的影响.方法 利用荧光染料Lucifer yellow CH(LY)不能透过细胞膜,但可以经过细胞GJ在细胞间进行传递的特点,采用细胞划痕技术,在倒置荧光显微镜下直观地观察不同组别、缺氧再灌注不同时间LY经过GJ流通情况,及HT干预后GJ通信改变情况.结果 在缺氧30 min时心肌GJ通信明显下降,荧光仅传至划痕附近第二列细胞,正常细胞荧光则传至四列以外的细胞.再供氧1 h时恢复到第三列,以后逐步恢复到正常.运用HT后传导明显减慢荧光仅传至第二列细胞,缺氧和再供氧时传导也无明显变化.培养7 d的心肌细胞搏动频率为(120±18)次/min,缺氧30 min时,搏动减弱,次数为(56±16)次/min,再供氧1 h时,搏动次数为(118±22)次/min,两者差异显著(P＜0.01).当运用HT后心肌细胞搏动明显减弱,约为(64±20)次/min,差异显著(P＜0.001).在缺氧再灌注过程中,HT搏动次数变化不大.结论 心肌细胞在缺氧时GJ通透性减低,HT也有不同程度的降低GJ通信的作用.
关键词： 缝隙连接通信 划痕标记染料示踪技术 庚醇 -
烧伤后心肌细胞间隙连接通讯变化的机制研究
目的:探讨烧伤后心肌细胞间隙连接通讯(Gap junctional intercellular communication,GJIC)功能变化的病理生理机制.方法:采用缺氧、烧伤血清损伤培养心肌细胞模型,用划痕标记染料示踪技术检测GJIC功能,同时测定心肌细胞活力、胞浆游离钙及跨膜钙内流的变化.结果:缺氧及烧伤血清损伤后,心肌细胞活力明显降低,跨膜钙内流明显增加,同时伴胞浆游离钙浓度明显增加;正常心肌细胞培养后具有GJIC功能,LY荧光传递达划痕标记附近4列细胞.缺氧、缺氧加烧伤血清损伤后1h即出现GJIC功能传导阻滞.缺氧6h及缺氧加烧伤血清损伤3 h可出现荧光染料停滞在划痕线边沿细胞.结论:心肌GJIC功能保证心肌组织高度有序、同步收缩,烧伤后心肌细胞内钙稳态失控,GJIC功能障碍是导致心肌非均一性行为增强的病理基础.
关键词： 划痕标记染料示踪技术 细胞间隙连接通讯 钙 心肌细胞 烧伤
