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铝对大鼠脑内Aβ蓄积及α-分泌酶各亚型表达变化的影响
目的 探讨α-分泌酶在铝引起脑内β-淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)蓄积中的作用.方法 健康雄性SD大鼠32只,按体重随机分为4组,对照组(生理盐水组),低剂量组(0.4 mg/kg),中剂量组(0.8 mg/kg)和高剂量(1.2 mg/kg)组,每组8只.染毒结束后,采用ELISA检测大鼠皮质和海马Aβ的量.用Western-blot检测大鼠脑皮质和海马中α-分泌酶各亚型(ADAM9、ADAM10及ADAM17)的表达情况.结果 随染毒剂量的增高,皮质和海马内Aβ总量增高,与对照组相比,皮质内高剂量组Aβ总量(Aβ40和Aβ42总和)增高有统计学意义(P＜0.05),在海马内中、高剂量组Aβ总量增高有统计学意义(P＜0.05);其中Aβ40变化不明显,在皮质和海马内各染毒组与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);而Aβ42有显著增高,与对照组相比,皮质内高剂量组Aβ42增高,差异有统计学意义(P＜0.05),海马内低、中、高剂量组Aβ42增高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,各染毒组大鼠脑皮质ADAM9表达量差异无统计学意义(P＞0.05),在海马内中、高剂量组ADAM9表达量显著降低(P＜0.05);在皮质和海马内,ADAM10表达量在低、中、高剂量组均显著降低(P＜0.05),ADAM17表达量在脑皮质和海马内中、高剂量组显著降低(P＜0.05).结论 铝可以引起大鼠脑皮质和海马Aβ水平升高,α-分泌酶水平的降低是铝引起大鼠脑内Aβ蓄积的重要原因之一.
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三七总皂苷对快速老化SAMP8小鼠大脑α-分泌酶mRNA表达的影响
目的:研究三七总皂苷(PNS)对快速老化SAMP8小鼠大脑α-分泌酶mRNA表达的影响.方法:采用快速老化痴呆模型小鼠SAMP8,将其随机分为对照组、PNS高、低剂量组(200,100 mg· kg-1)和石杉碱甲组(0.3 mg·kg-1),每组8只,对照组给予相同容积的双蒸水灌胃.每天灌胃1次,连续给药2个月.通过实时荧光定量PCR法检测各组SAMP8小鼠大脑α-分泌酶( ADAM9,ADAM10,ADAM17) mRNA的含量.结果:对照组ADAM9 mRNA含量均低于PNS高剂量组和石杉碱甲组(P＜0.05)；低剂量组ADAM10 mRNA的含量低于对照组(P＜0.05)；PNS高、低剂量组和石杉碱甲组ADAM17 mRNA与对照组比较无显著差异.结论:PNS可以上调SAMP8小鼠脑内ADAM9 mRNA和下调ADAM10 mRNA的表达.
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黄芪总苷防治地塞米松诱导小鼠记忆障碍和对APP及β-分泌酶mRNA表达的研究
目的:探讨黄芪总苷(AST)对地塞米松(DEX)诱导小鼠记忆障碍的保护作用及对脑内淀粉样前体蛋白(APP)及其mRNA,α-分泌酶和β-分泌酶mRNA表达的影响.方法:将小鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、AST(10,20,40 mg·kg~(-1))组和阳性药(人参皂苷Rg_1,6.5 mg·kg~(-1))组.用DEX(5 mg·kg~(-1),ig,21 d)建立小鼠学习记忆损伤模型,各用药组于造模同时ig给予相应药物,模型组和对照组ig等容积蒸馏水.用Morris水迷宫方法测定小鼠学习记忆功能;用RT-PCR方法检测脑组织中APP、α-分泌酶和β-分泌酶mRNA表达;用免疫组织化学方法观察大脑皮质,海马CA1,CA3区APP表达.结果:与模型组比较,AST(20,40 mg·kg~(-1))能明显改善小鼠记忆功能(P＜0.05,P＜0.01);降低脑组织内APP,β-分泌酶mRNA的表达(P＜0.05),升高脑组织内α-分泌酶mRNA的表达(P＜0.05);减少APP在大脑皮质及海马CA1区的表达(P＜0.05).结论:AST能改善DEX诱导的小鼠记忆障碍,其机制可能与抑制脑内APP及其mRNA、β-分泌酶mRNA表达,促进α-分泌酶mRNA表达有关.
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PS1基因突变转染细胞中α-分泌酶活性的实验研究
目的 通过观察两种细胞系3个不同位点早老素基因1(PS1)突变转染细胞中α-分泌酶活性的变化,探讨PS1基因突变对α-分泌酶活性的影响,及两者在家族性阿尔茨海默病病理机制中可能存在的联系.方法 利用荧光酶标反应法和Western blot免疫印迹方法分别检测突变型PS1M146L和野生型APP751双转染稳定表达CHO细胞系,及突变型PS1V97L、PS1A136G单转染稳定表达SH-SY5Y细胞系,3种类型的PS1突变细胞α-分泌酶活性及其作用产物分泌型α淀粉样蛋白(sAPPα)表达.结果 PS1M146L/APP751双转染CHO细胞系与野生型PS1/APP751双转染CHO细胞系相比α-分泌酶活性有降低,统计学检验差异显著(P＜0.05).PS1V97L和PS1A136G突变单转染稳定表达SH-SY5Y细胞系较野生型PS1组均有降低,其中PS1V97L与野生型PS1组α-分泌酶活性比较有显著性差异(P＜0.05),PS1A136G组较野生型PS1组有降低,但无统计学意义.Western blot方法检测α-分泌酶活性作用产物可溶性α淀粉样蛋白结果显示,未转染CHO、SH-SY5Y细胞系与其对应的转染野生型PS1基因的细胞系sAPPα蛋白表达量基本相同,突变型PS1V97L和PS1A136G单转染SH-SY5Y细胞系较野生型PS1组蛋白表达量少,突变型PS1M146L/APP双转染CHO细胞系中sAPPα蛋白表达量也少于野生型PS1 M146L/APP双转染CHO细胞系.结论 PS1基因突变促使α-分泌酶活性降低可能是PS1基因突变导致家族性阿尔茨海默病病理机制之一,PS1致病性与α-分泌酶活性的降低程度可能存在正相关,PS1M146L/APP双转染CHO细胞系与PS1V97L单转染细胞系均可适用于作为探讨家族性阿尔茨海默病中PS1突变与α-分泌酶功能关系研究的细胞模型.
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以分泌酶为靶点的老年痴呆防治药物研究进展
以α-分泌酶、β-分泌酶和γ-分泌酶为靶点是发现新型老年痴呆症防治药物的重要策略.该文对近年来α-分泌酶激动剂、β-分泌酶抑制剂和γ-分泌酶抑制剂/调控剂的研究进展进行综述.
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α7尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞α-分泌酶水平的影响
目的 采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(Neuronal nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)基因表达,了解对APP代谢中的关键酶α-分泌酶水平的影响.方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),用Real-time PCR法和Western blotting法分别测定细胞中α7 nAChR、α-分泌酶(ADAM10)在mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低；ADAM10mRNA及蛋白表达水平分别减少了73％和66％.结论 α7 nAChR基因表达抑制后α-分泌酶水平明显降低,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默病(AD)的发病有一定的关系.
关键词： α7尼古丁乙酰胆碱受体 α-分泌酶 阿尔茨海默病 -
解聚素与金属蛋白酶10功能研究进展
解聚素与金属蛋白酶10(ADAM10)是细胞膜上一种重要的调节分子.它通过调节性膜内蛋白水解(regulated intramembrane proteolysis),引起底物分子的胞外功能区的脱落,释放各种生长因子,或者调节细胞内的蛋白水解,进一步启动细胞内的信号转导途径.ADAM10通过这种方式参与了中枢神经系统的发育和生长、炎症反应以及肿瘤的形成和侵袭.本文仅就ADAM10的分子结构,4类主要的作用底物和发挥的功能作一简要介绍.
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慢性低氧低糖培养对大鼠海马神经元α-和β-分泌酶活性的影响
目的 探讨慢性低氧低糖培养对大鼠海马神经元α-和β-分泌酶活性的影响.方法 取新生24h的wistar大鼠海马神经元培养,用慢性低氧低糖进行干预,MTT法检测神经元细胞活力,直接荧光法检测α、β-分泌酶活性.结果 低氧低糖组较对照组细胞活力降低,具有显著性差异(P＜0.05),低氧低糖培养海马神经元12 h的α-分泌酶活性升高(P＜0.0001),低氧低糖培养海马神经元12、24、36 h的β-分泌酶活性升高(P=0.0032、0.0018、＜0.0001).结论 慢性低氧低糖培养对海马神经元具有毒性,可能与其升高β-分泌酶活性使具有神经营养作用的sAPPα降低和具有神经毒性作用的Aβ升高有关.
关键词： 慢性低氧低糖细胞培养 海马神经元 α-分泌酶 β-分泌酶 -
17β-雌二醇对解聚素金属蛋白酶9表达水平的影响
目的 研究17β-雌二醇对解聚素金属蛋白酶9(ADAM9)表达水平的影响. 方法 应用盐析法提取人类基因组DNA,扩增ADAM9基因启动子目的片断,构建表达ADA M9启动子的报告基因质粒.应用脂质体转染法,分别转染入人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH、人胚肾细胞HEK293和宫颈癌细胞HeLa内.17β-雌二醇处理各组细胞后,检测ADAM9启动子转录效率.结果 成功扩增了ADAM9启动子区1676 bp目的片段,构建了ADAM9启动子报告基因质粒pGL-ADAM9,瞬时转染入细胞内.17β-雌二醇处理SK-N-SH细胞后,ADAM9启动子转录活性上升至31.250±1.328,较处理前的15.471±1.256增加约2倍,差异有统计学意义(P＜0.05).HEK293细胞内,ADAM9启动子转录活性上升至13.499±0.866,较处理前的8.513±1.356增加约1.6倍,差异有统计学意义(P＜0.05).HeLa细胞中没有观察到17β-雌二醇对ADAM9启动子转录活性的影响. 结论 17β-雌二醇能上调人ADAM9启动子的表达水平,是ADAM9基因表达的激活剂.
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八氢贯叶金丝桃素乙酸酯对淀粉样前体蛋白水解途径的影响及机制
目的 探讨合成的稳定化合物八氢贯叶金丝桃素乙酸酯[(8H)-Ac-HF]对皮层原代神经元细胞中淀粉样前体蛋白(APP)水解途径的影响及其作用机制.方法 建立SD大鼠皮层原代神经元细胞体外培养体系,用MTT法检测(8H)-Ac-HF对原代神经元细胞的生长活力影响;用ELISA方法检测(8H)-Ac-HF对原代神经元细胞培养上清液中可溶性淀粉酶前体蛋白α(sAPPα)分泌及α-分泌酶活性的影响;用Western blot检测(8H)-Ac-HF对解聚金属蛋白酶10(adisintegrin and metalloprotease,ADAM10)蛋白表达的影响;并通过蛋白激酶C(PKC)抑制剂calphostinC(Cal.C)观察其可能作用的信号途径.结果 0～ 50μmol/L (8H)-Ac-HF处理皮层神经元30 h对细胞生长活性无显著影响;20、50μmol/L(8H)-Ac-HF可增加神经元细胞sAPPα的胞外分泌(P＜0.01),增加α-分泌酶活性,上调ADAM10蛋白的表达;其对sAPPα、ADAM10和α-分泌酶的上调作用可受PKC抑制剂Cal.C抑制.结论 (8H)-Ac-HF可通过PKC信号途径,增加ADAM10表达及α-分泌酶活性,促进APP经非淀粉样途径水解.
关键词： 八氢贯叶金丝桃素乙酸酯 淀粉样蛋白 α-分泌酶 蛋白激酶C
