肠道病毒EV-D68表面结构蛋白VP2、VP3的原核表达及其特异性分析
摘要： 目的 原核表达肠道病毒68型(enterovirus D68,EV-D68)表面结构蛋白VP2、VP3,分析其亲和力和结合力,得到具备高结合力的、可结合特异性记忆性B细胞的EV-D68病毒表面结构蛋白.方法 采用PCR法扩增EV-D68病毒的VP2、VP3蛋白基因,插入原核表达载体pGEX-5X-1,构建重组表达质粒pGEX-5X-1-VP2和pGEX-5X-1-VP3,转化到工程菌Rosetta(DE3)pLy中,异丙基硫代半乳糖苷(i-sopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,表达的重组蛋白形成包涵体,经超声洗涤、透析复性;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)电泳、Western-blot鉴定重组蛋白;竞争性酶联免疫吸附检测(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测蛋白VP2、VP3的蛋白活性和亲和力;藻红蛋白荧光素(phycoerythrin,PE)标记VP2和VP3重组蛋白,结合CD19-APC、CD27-FITC抗体,流式细胞术检测VP2、VP3蛋白结合特异性记忆性B细胞的情况.结果 成功构建出重组表达质粒pGEX-5X-1-VP2和pGEX-5X-1-VP3,通过双酶切鉴定及测序分析,确认表达载体构建正确,通过表达纯化,成功获得EV-D68的VP2、VP3蛋白,SDS-PAGE电泳灰度扫描显示,VP2蛋白的纯度可达80％,VP3蛋白的纯度可达75％;经Western-blot和ELISA鉴定,均有抗原特异性;通过竞争ELISA检测,VP2亲和力常数为2.7×107 M-1,为中等亲和力;VP3亲和力常数为3.25×106 M-1,为低亲和力;通过流式细胞术可以检测到病毒攻击小鼠后脾脏细胞中的特异性记忆性B细胞.结论 成功原核表达,复性纯化得到EV-D68 VP2、EV-D68 VP3蛋白,两个蛋白均具有较强的抗原特异性,利用流式细胞仪能检测到特异性记忆性B细胞.终获得了具有较强结合能力,可用于分选抗原特异性记忆性B细胞的EV-D68表面结构蛋白VP2、VP3,为研究VP2、VP3蛋白的中和抗原表位及其广谱中和抗体的分选检测打下了基础.
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冠脉微血管功能障碍与慢性炎性风湿病
慢性炎性风湿病(chronic inflammatory rheumatoid diseases,CIRD)包括类风湿关节炎(rheumatoid arthiritis,RA)、系统性红斑狼疮(systemic lupus,SLE)、系统性硬皮病(systemicsclerosis,SSC)是导致缺血性心脏病的重要危险因素,也是导致心血管发病率和死亡率增加的重要原因之一.即使没有梗阻性心外膜冠状动脉疾病,炎症也可影响CIRD患者冠脉微血管功能,促进心肌缺血和心血管事件的发生.了解CIRD与冠脉微血管功能障碍(coronary microvascular dysfunction,CMD)的分子机制对制定治疗目标至关重要.
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CRISPR/Cas9技术研究进展
CRISPR/Cas9系统可以很容易的改写多种生物体的基因组,这一技术很快席卷了整个基因组工程领域.在此基础上的实验方法在各个领域都具有相当大的潜力.因而了解以CRISPR/Cas9为基础的基因功能研究,探讨这一技术开发新一代疾病模型的各种途径,疾病治疗以及基因调控等方面的研究进展很有必要.
关键词： CRISPR/Cas9 基因调控 疾病模型 癌症 基因疗法 -
多发性硬化与B淋巴细胞趋化因子-1
多发性硬化(MS)是一种中枢神经系统炎症性疾病,其病理机制主要包括神经变性及炎症反应,而B淋巴细胞趋化因子-13(CXCL-13)被认为参与MS等自身免疫和炎症性疾病的发病过程.CXCL-13既通过与CXCR5结合表达于B淋巴细胞、辅助性T细胞等,又影响B细胞从而促进自身免疫反应并参与炎症反应,这为MS治疗的新型药物研究提供了理论基础.
关键词： 多发性硬化 B淋巴细胞趋化因子-13 炎症反应 药物作用靶点 -
食物不耐受与慢性肾脏疾病及风湿性疾病的关系
食物不耐受是国内外研究的热点,其发生率在逐年上升,但目前在许多方面尚存在争议.研究食物不耐受的概念界定、发病机制、诊断、治疗及与肾病综合征、IgA肾病、类风湿性关节炎等常见肾脏疾病及风湿性疾病相关性具有重要意义.
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巨噬细胞移动抑制因子在自身免疫性和炎症性疾病中的关键作用
巨细胞移动抑制因子(MIF)是一种在体外能抑制巨噬细胞移动的物质。现已发现MIF在类风湿性关节炎(RA)、动脉粥样硬化(AS)和系统性红斑狼疮(SLE)等急性和慢性免疫炎症情况中具有关键的调节作用。这些疾病的共同特征是损伤部位有免疫细胞的浸润和活化。在这些疾病中起作用的炎症过程相互重叠，并观察到AS是RA、SLE的一种主要伴随疾病，这使MIF可以成为治疗这些疾病的一个极有希望的候选靶点。MIF和糖皮质激素(GC)之间独特的关系突显了MIF可以作为一种“类固醇减量”疗法治疗这些疾病的一个潜在性靶点。
关键词： 巨噬细胞移动抑制因子 类风湿性关节炎 系统新红斑狼疮 动脉粥样硬化 炎症 -
Th1/Th2细胞与纤维化疾病
纤维化可以发生在不同组织器官和系统，是细胞外基质成分过度积聚、组织瘢痕形成的过程，是致病和致死的主要原因。纤维化疾病中Th1细胞/Th2细胞对纤维增生的反应失衡有重要影响。随着IFNγ对Th1细胞的免疫反应作用研究的深入，IL-4拮抗剂、IL-5和IL-13已经被用于纤维化疾病的治疗。这些细胞因子拮抗剂在临床试验中发挥着重要作用。
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凝血酶在HIV-1感染小胶质细胞中作用的研究进展
凝血酶是凝血连锁反应的主要效应蛋白酶.除了能够切割纤维蛋白原外,还发现凝血酶能够特异性切割HIV-1 V3环保守的冠部并促进HIV-1介导的细胞融合；此外,凝血酶及细胞表面凝血酶受体表达的上调可能与HIV-1相关脑病的发生相关.小胶质细胞是中枢神经系统固有的免疫细胞,在脑损害时,这些细胞迅速被激活并发挥巨噬细胞一样的功能,与脑部炎症的发生和病理改变高度相关.小胶质细胞也是HIV-1的靶细胞,因此探讨凝血酶在HIV-1感染小胶质细胞中的作用可能有助于探明凝血酶在HIV-1相关脑病中的作用及其机制.
关键词： 凝血酶 Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 小胶质细胞 -
减毒沙门菌作为新型肿瘤疫苗运送载体——癌症免疫治疗新希望
抗肿瘤免疫治疗是通过提高肿瘤特异性抗原的免疫原性及肿瘤细胞对效应性杀伤细胞的敏感性,调动机体免疫系统抵抗肿瘤细胞增殖和浸润的免疫治疗方法.与常规手术治疗、放射治疗和化学药物治疗相比,免疫治疗具有伤害小、毒性低等优点,但其在疫苗策略领域中的效果并不理想.近年来的研究表明,适当的载体有望显著提高疫苗的效果.减毒沙门菌是一种活疫苗载体,具有佐剂的作用,能够有效激活机体免疫细胞,在抗肿瘤免疫治疗中具有广阔的应用前景.
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085 HLA-E
人MHCⅠ类基因分两类：经典的Ia基因(包括HLA-A、HLA-B、HLA-C)和非经典的Ib基因(主要包括HLA-E与HLA-G、HLA-F)。3种非经典MHC Ⅰ类基因位于相同的染色体区域6P21.3，不同于经典分子，具有特异性的转录、蛋白表达和免疫作用。1988年发现HLA-E具有有限的多态性，作为先天的和后天的免疫统的一部分，它有非常重要的免疫调节作用，本文拟就有关问题作一综述。
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靶向调节性T细胞的肿瘤免疫治疗的研究进展
免疫系统通过固有和适应性免疫监督来防止肿瘤的发生、进展,但是仍然有肿瘤细胞逃脱免疫网络的监视,在体内大量繁殖,调节性T细胞(Treg)就是帮助肿瘤细胞逃脱的原因之一,所以靶向Treg的治疗是肿瘤免疫治疗的关键.了解Treg上的各种功能分子及其作用,Treg的来源以及转化方式,对阐明其调控靶点,进而概述靶向Treg的治疗方式很有意义.
