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FQ-PCR和金标法检测不孕不育夫妇沙眼衣原体的比较分析
目的:探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)在不孕不育诊断和治疗中的作用.方法:采用FQ-PCR和金标法检测60对不孕不育夫妇的女性宫颈分泌物、男性精液或前列腺标本中的沙眼衣原体并将两种方法进行比较.结果:FQ-PCR检测不孕不育夫妇中男、女沙眼衣原体阳性率为46.7%、55.0%,而金标法分别为26.7%、30.0%,差异均有显著性(P＜0.05和P＜0.01).结论:FQ-PCR较金标法更敏感,是诊断不孕不育沙眼衣原体感染更有价值的方法.
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冠心病患者血清肺炎衣原体与基质金属蛋白酶-9的相关性分析
目的:探讨肺炎衣原体特异性抗体(CP-IgA)及基质金属蛋白酶(MMP-9)与冠心病(CHD)的关系.方法:酶联免疫吸附法检测65例CHD患者和20例对照组血清CP-IgA及MMP-9水平.结果:CHD组CP-IgA阳性率、CP-IgA、MMP-9水平高于对照组,差异有统计学意义.CHD组CP-IgA与MMP-9水平呈正相关.结论:肺炎衣原体(CP)及所介导的MMP系统的激活可能参与CHD进展.
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阿奇霉素治疗妊娠合并沙眼衣原体感染疗效观察
我们应用阿奇霉素治疗妊娠合并沙眼衣原体感染(CT),效果较好,报道如下.1 对象和方法1.1 对象 1999-06～2002-05对性传播疾病高危人群妊娠后筛选,单纯生殖道CT阳性患者123例.年龄为21～34岁,孕龄10～38周.无症状81例,有症状42例,表现白带增多.采用随机法分2组,实验组62例(无症状41例,有症状21例),对照组61例(无症状40例,有症状21例).
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性传播疾病常见病原体检测结果分析
对2001-10～2004-12来我院皮肤科、妇科就诊病例同时做各种性病检测的结果分析如下.1 对象和方法1.1 对象来自本院皮肤科、妇科就诊的3 746例同时做淋病奈瑟氏菌(NG)、沙眼衣原体(Ct)以及解脲支原体(Uu)检测的患者,其中男2 047例,女1 699例,大68岁(男性),小12岁(女性),平均(38.2±13.7)岁.
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小儿肺炎衣原体感染22例分析
肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae,Cpn)是专性细胞内寄生的病原体,是小儿呼吸道感染的常见致病菌.肺炎衣原体感染在儿童中发病率呈逐年上升趋势.据报道,呼吸道感染的Cpn-IgM阳性率推测达到30%以上,易致咳嗽迁延,部分患儿出现喘息以及肺外感染.现就我院儿科2006-01/2008-06收治的肺炎衣原体感染22例分析如下.
关键词： 衣原体 肺炎 衣原体感染(糖原)/诊断 人类 -
小儿呼吸系统疾病衣原体感染296例分析
目的 了解小儿肺炎衣原体临床分布情况,为临床控制感染提供依据.方法抽取2010-07—2011-01解放军174医院儿科296例小儿呼吸系统疾病患者,用酶联免疫法检测肺炎衣原体抗体IgM.根据性别不同进行统计,同时按照年龄分为＜3岁和≥3岁组,进行卡方检验.结果 受检人数296例,肺炎衣原体抗体总体阳性39例(13.17%).其中,女性患者阳性检出率17.46%;男性患者阳性检出率10%；＜3岁组阳性率5.06%、≥3岁组阳性率16.00%.结论男女之间肺炎衣原体阳性检出率无明显差异,3岁以下极少感染,易感人群为3岁以上的学龄儿童.低年龄儿童感染率有增加趋势,临床医生在收治小儿呼吸系统疾病时,应重视肺炎衣原体感染的情况发生,及早对症治疗.
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肺炎衣原体感染与急性冠脉综合征的相关性
目的:测定急性冠脉综合征(ACS)患者阿奇霉素治疗前后血肺炎衣原体(Cpn)DNA及IgG抗体滴度,探讨肺炎衣原体感染与ACS发生的相关关系.方法:选择ACS95例(观察组)及冠状动脉造影正常的55例非冠心病(对照组).观察组采用随机双盲安慰剂对照的方法分别给予阿奇霉素及安慰剂治疗6个月,治疗前后应用巢式PCR法测定外周血单核细胞中Cpn-DNA,用间接微量免疫荧光法测定IgG抗体滴度.结果:Cpn-DNA阳性率及IgG抗体滴度观察组较对照组比较阳性率明显增高.治疗后DNA转阴率阿奇霉素治疗组明显优于安慰剂组,IgG抗体滴度治疗后无明显变化.结论:ACS患者肺炎衣原体感染率高,检测DNA临床价值更大.
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慢性肺炎衣原体感染与冠心病的关系
目的:探讨慢性肺炎衣原体感染与冠心病的关系.方法:用免疫荧光法检测并对比经冠状动脉造影证实为冠心病或除外冠状动脉粥样硬化者血清肺炎衣原体IgG/IgM抗体滴度.结果:经冠状动脉造影证实为冠心病者慢性肺炎衣原体感染率明显高于经冠状动脉造影除外冠状动脉粥样硬化者(71.88%比25.00%,P＜0.01).结论:慢性肺炎衣原体感染与冠心病之间有较强的相关性.
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耳穴压籽法用于红霉素所致胃肠道反应的临床观察
红霉素为大环内酯类抗生素,对革兰氏阳性球菌、支原体、衣原体和军团菌均有良好的抑制 作用.但口服或静脉应用过程中患儿常发生上腹隐痛、恶心等不适,严重者腹部疼痛 剧烈,并伴呕吐、腹泻.我科自1999年10月起,对此类患儿采用耳穴压籽法进行治疗,取得满意疗效,现报告如下.1 方法对静滴红霉素所致3次以上腹痛伴呕吐的2～13岁患儿30例,采用耳穴压籽法治疗.方法为 :耳穴贴压,每片胶布为0.5cm×0.5cm,胶布中央放置1粒王不留行籽.常用主穴有胃、小
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克拉霉素对停用肿瘤坏死因子拮抗剂后复发的强直性脊柱炎的临床效果
控制疾病活动并维持其疾病稳定仍然是治疗强直性脊柱炎的首要问题.目前临床上主要采用非甾体抗炎药、改善病情药和肿瘤坏死因子拮抗剂治疗.虽然改善病情药被认为可以控制强直性脊柱炎患者病情的发展,但临床上发现一些患者其疾病活动难以得到有效的控制.肿瘤坏死因子拮抗剂能迅速控制疾病活动,但仍未能解决如何长期控制疾病活动的问题,且高昂的费用限制其在临床上的应用.有学者采用肿瘤坏死因子拮抗剂和改善病情药联合治疗,试图使疾病活动能够得到长期缓解,但其效果仍在观察.近年来发现衣原体或支原体感染是强直性脊柱炎的诱发因素[1-2],临床使用大环内酯类抗生素也取得一些效果[3-4].本文对停用肿瘤坏死因子拮抗剂治疗后疾病复发或者疗效欠佳的患者使用克拉霉素治疗,以观察对强直性脊柱炎疾病活动的影响.
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肺炎嗜衣原体三种不同抗原的临床诊断价值评价
目的 研究肺炎嗜衣原体3种重组抗原Cpn0146、Cpn0147及Cpn0308应用于肺炎嗜衣原体感染血清学诊断中的价值.方法 构建pGEX6p-2/Cpn0146、Cpn0147、Cpn0308重组质粒,并诱导表达重组蛋白,采用间接ELISA法和免疫印迹法(Western-blot)分析其免疫原性及其免疫反应性.建立分别以3种重组蛋白为包被抗原的间接ELISA法,与肺炎嗜衣原体IgG商品诊断试剂盒平行检测183份呼吸道感染患者的血清标本及32份沙眼衣原阳性患者血清标本,比较各方法检出准确性及阳性率.结果 GST-Cpn0146、Cpn0147、Cpn0308免疫兔血清中特异性IgG抗体效价滴度分别达1:6 400、1:12 800和1:12 800以上;以3种重组蛋白为包被抗原的ELISA法准确性分别为92.3%、94.5%、96.7%.各方法检测出阳性率结果显示,Cpn0146组的阳性率为38.8%(71/183)、与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异有统计学意义(x~2=12.07,P<0.05);Cpn0147阳性率40.9%(75/183),与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异有统计学意义(x~2=8.10,P<0.05);Cpn0308阳性率44.8%(75/183),与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异无统计学意义(x~2=0.57,P>0.05).结论 Cpn0308在肺炎嗜衣原体感染血清学诊断实验中表现出良好的准确性(96.2%)和较高的阳性率(44.8%),可望用于进一步研制肺炎嗜衣原体诊断试剂盒.
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连接酶链反应-酶联免疫吸附试验诊断沙眼衣原体感染的初步应用
目的建立连接酶链反应-酶联免疫吸附试验(LCR-ELISA)检测沙眼衣原体DNA的方法,并初步应用于检测新生儿沙眼衣原体感染.方法针对沙眼衣原体外膜蛋白基因设计4条引物,并分别在其两端标记地高辛和生物素.用此4条引物进行LCR扩增沙眼衣原体DNA.带有生物素和地高辛双标记的扩增产物以ELISA方法显色判断结果.采集328份肺炎新生儿鼻咽标本,分别对其进行培养和LCR扩增,应用ELISA检测有无沙眼衣原体感染.结果LCR-ELISA方法可以检测出6种沙眼衣原体标准株,而对2种肺炎衣原体和其他细菌DNA无反应,显示出较强的特异性;可检测出10fg的DNA,较传统电泳法敏感10倍,且避免了溴化乙啶的污染.328份标本中,LCR-ELISA检测出68份阳性,培养仅检测出60份,两者相比差异有显著性.以扩大的金标准判断,LCR-ELISA的特异性、敏感性分别为100%和98.6%;而培养的特异性、敏感性分别为100%和、86.9%.结论LCR-ELISA是一种特异而敏感的基因扩增方法,避免了溴化乙啶污染,判断结果客观,检测方便.经临床初步应用,取得良好结果,值得进一步研究和完善.
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聚合酶链反应与反向线点杂交检测沙眼衣原体及分型
目的建立和评价一个新的多重和巢式PCR-反向线点杂交试验(RLB)检测泌尿生殖道沙眼衣原体及其分型方法.方法该试验设计了3对引物分别针对CT外膜蛋白(omp1)基因VD2区和质粒进行扩增,用CT15种血清型(A、B/Ba、C、D/Da、E、F、G/Ga、H、I/Ia、J、Ja、K、L1、L2 和L3)探针与扩增后的产物杂交.经COBAS Amplicor检测的355份标本,其中277份尿液,2份男性直肠拭子和78份女性宫颈试子,进行PCR-RLB检测CT并分型.结果 192份COBAS Amplicor阳性标本中175份PCR-RLB阳性,其中93.1%(163/175)的CT感染可被正确分型,其单一型感染分型结果与DNA测序结果一致.163份COBAS Amplicor阴性标本中6份巢式PCR-RLB阳性.85.3%(139/163)为单一型CT感染,常见的CT是E(38.6%)F (28.5%)和D(18.2%).14.7%(24/163)为CT混合感染,混合感染以H和K为主.结论 PCR-RLB检测CT是一种简便、快速、特异和敏感的方法,并准确的进行CT分型,为CT感染的临床诊断和分子流行病学研究提供了一种可靠的方法.
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四种国产大环内酯类抗菌药物体外抗沙眼衣原体和肺炎衣原体敏感性研究
目的 研究国产必特螺旋霉素、乙酰螺旋霉素、红霉素和阿奇霉素等4种大环内酯类药物对于沙眼衣原体和肺炎衣原体体外药物敏感性试验,评估其抗衣原体作用,以指导临床用药.方法 细胞培养和免疫荧光包涵体染色技术测定4种国产大环内酯类抗菌药物对于沙眼衣原体和肺炎衣原体体外MIC.结果 对于沙眼血清型B,必特螺旋霉素、红霉素和阿奇霉素体外MIC为0.5μg/ml,乙酰螺旋霉素为4μg/ml.对于沙眼血清型D,必特螺旋霉素与阿奇霉素体外MIC均为0.25μg/ml,红霉素0.5μg/ml,乙酰螺旋霉素2μg/ml.对于肺炎衣原体,红霉素体外MIC≤0.016μg/ml,阿奇霉素和必特螺旋霉素均为0.032μg/ml,乙酰螺旋霉素0.5μg/ml.结论 国产必特螺旋霉素、红霉素和阿奇霉素体外抗沙眼衣原体(血清型B和D)和肺炎衣原体作用可靠,但乙酰螺旋霉素则较差.
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四种国产大环内酯类抗菌药物体外抗沙眼衣原体和肺炎衣原体敏感性研究
目的 研究国产必特螺旋霉素、乙酰螺旋霉素、红霉素和阿奇霉素等4种大环内酯类药物对于沙眼衣原体和肺炎衣原体体外药物敏感性试验,评估其抗衣原体作用,以指导临床用药.方法 细胞培养和免疫荧光包涵体染色技术测定4种国产大环内酯类抗菌药物对于沙眼衣原体和肺炎衣原体体外MIC.结果 对于沙眼血清型B,必特螺旋霉素、红霉素和阿奇霉素体外MIC为0.5μg/ml,乙酰螺旋霉素为4μg/ml.对于沙眼血清型D,必特螺旋霉素与阿奇霉素体外MIC均为0.25μg/ml,红霉素0.5μg/ml,乙酰螺旋霉素2μg/ml.对于肺炎衣原体,红霉素体外MIC≤0.016μg/ml,阿奇霉素和必特螺旋霉素均为0.032μg/ml,乙酰螺旋霉素0.5μg/ml.结论 国产必特螺旋霉素、红霉素和阿奇霉素体外抗沙眼衣原体(血清型B和D)和肺炎衣原体作用可靠,但乙酰螺旋霉素则较差.
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支原体与衣原体的实验室诊断
支原体与衣原体的实验室检查通常由皮肤性病科实验室完成.即使检验科从事这些项目的检验,与细菌学及肝炎病毒、HIV及梅毒检测相比,亦较为不够全面和成熟.
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沙眼衣原体聚合酶链反应测定质控物的构建及其应用研究
目的 研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)PCR检测质摔物,并进行稳定性研究.方法 在充分查阅文献的基础上,明确国内外已有文献报道的CT:PCR检测的靶序列,选择普遍应用的CT质粒序列,采用重叠(overlap)PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测目的 CT质粒序列的重组真核表达载体,即pTARGETTM-CT 质粒.然后,将载体以脂质体转染的方式转染入宫颈上皮细胞(HTB-SiHa细胞)中,收集细胞,经含20%小牛血清的细胞培养液稀释,即成为能模拟CT检测临床样本的细胞质控物.后观察得到的质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性.结果 成功构建了含CT质粒(178-610)、(1219-1993)、(2471-3260)、(5239-5864)、(6722-7499)等5个片段的重组真核表达载体,并转入HTB-SiHa细胞中,得到了可模拟临床样本的CT PCR检测的质控物.采用深圳匹基生物工程有限公司、中山大学达安基因股份有限公司商品CT PCR检测试剂盒对转染后样本进行检测,得到阳性结果;定量为3.21×108拷贝/ml;倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值相差约3.3;对不同浓度稀释后在4℃、37℃及室温条件下保存1个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现,在各温度下保存的样本经检测后的结果问差异无统计学意义,所构建的质控样本至少可以稳定保存1个月.结论 利用重叠PCR与双酶切的方法,建立了一种将多间隔片段连接并构建入同一载体的简便有效的方法.成功地得到了可模拟临床标本的CT PCR检测质控物.
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四种病毒和弓形虫衣原体支原体感染实验室检测的重要性
临床微生物检验,如细菌、真菌等,近年来已取得了长足的进步,尤其是细菌培养、鉴定和药敏试验.但某些病毒、衣原体和支原体感染的实验室检验,由于受到技术条件的限制,虽有进步但步伐不够大.面对目前发病形势,对于流感病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、风疹病毒和弓形虫、衣原体、支原体感染的实验室检测,应引起检验医学界足够的重视,同时存在的一些问题亦值得探讨.
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裂解酶片段长度多态性在沙眼衣原体主要外膜蛋白基因分型中的应用研究
目的建立沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白基因(omp1)上游引物5′末端地高辛标记裂解酶片段长度多态性(CFLP)分型方法,并对Ct临床分离株进行分型.方法取临产孕妇宫颈刮片及其新生儿鼻咽拭子组成母婴配对标本300对605份,用套式聚合酶链反应扩增Ct omp1第四可变区;用建立的CFLP方法对其进行基因分型.结果孕妇宫颈Ct检出率11%(33/300),母婴传播率24.2%(8/33); 8对Ct阳性母婴配对标本CFLP图谱呈四类,经测序证实分别为E、F、H、D型(各3、2、2、1对),各占37.5%、25%、25%和 12.5%,且每对母子CFLP图谱完全一致;同一标本不同批次和相同基因型不同标本的CFLP图谱一致.结论上游引物5′末端地高辛标记Ct omp1 CFLP分型方法灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、费用相对低廉,无放射污染,是一种极具潜力的Ct基因分型方法.
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沙眼衣原体外膜蛋白2重组蛋白的表达纯化和免疫性鉴定
目的 表达沙眼衣原体外膜蛋白2,纯化表达产物,并对其免疫性进行鉴定.方法应用聚合酶链反应(PCR)技术获得沙眼衣原体D型外膜蛋白2第167～434位氨基酸的编码基因片段,将此片段克隆于表达载体pET28b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE、蛋白印迹试验分析表达产物,亲和层析法纯化重组蛋白;重组蛋白免疫家兔以检测其免疫原性.结果重组质粒酶切分析及DNA测序证实成功构建pET28b(+)/Omp2aa167～aa434表达质粒;通过优化表达和纯化条件,获得了相对分子质量约为35.0×103纯化蛋白产物,蛋白印迹试验证实该重组蛋白能与Ct 感染者阳性血清反应;ELISA法测定免疫血清特异性抗体效价在1:1 280以上.结论表达的重组外膜蛋白2aa167～aa434具有良好的免疫性.
