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CT引导下注射胶原蛋白酶治疗腰椎间盘突出症的临床研究
注射胶原酶溶解突出的椎间盘是治疗腰椎间盘突出症的有效方法.为减少注射胶原酶的副反应,提高注射胶原酶的准确性,在CT引导下经小关节内缘注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症取得了良好效果,现报告如下.
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龙鳖胶囊对膝骨关节炎大鼠IL-1β、IL-6、IL-10水平的影响
目的:研究龙鳖胶囊对胶原酶诱导的膝骨关节炎(KOA)的治疗作用,并探讨其作用机制.方法:建立KOA大鼠模型,于造模后开始给予低、中、高剂量的龙鳖胶囊灌胃(0.3125,0.6250,0.9375g/kg),连续4周,观察龙鳖胶囊对KOA大鼠的膝关节肿胀度及血清白细胞介素-1β(IL-1 β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10 (IL-I0)水平的影响.结果:造模后,造模组的膝关节肿胀度和IL-1β、IL-6水平均高于对照组(P<0.01),而IL-10水平低于对照组(P<0.01).给药2周后,与造模组及龙鳖低、高剂量组比较,龙鳖中剂量组的膝关节肿胀度消退较快(P<0.01).给药3周后,龙鳖低、中、高剂量组的膝关节肿胀度消退均快于造模组(P<0.01),其中,龙鳖中剂量组的膝关节肿胀已消退至对照组水平.给药4周后,与对照组比较,龙鳖低、中、高剂量组的膝关节肿胀度均已消退.给药2、4周后,造模组的IL-1β水平均高于同期对照组及龙鳖低、中、高剂量组(P<0.05);龙鳖低、中、高剂量组的IL-1 β水平均高于同期对照组(P<0.05);龙鳖中剂量组IL-1 β水平均低于同期龙鳖低、高剂量组(P<0.05);造模组IL-6水平均高于同期对照组及龙鳖低、中、高剂量组(P<0.01,P<0.05);龙鳖低剂量组IL-6水平均低于同期龙鳖中、高剂量组(P<0.05);龙鳖低、中、高剂量组IL-10水平均高于同期对照组和造模组(P<0.01),而其中龙鳖中剂量组IL-10水平均高于同期龙鳖低、高剂量组(P<0.01).给药2周后,龙鳖低、中、高剂量组IL-6水平均高于对照组(P<0.01);给药4周后,龙鳖胶囊低剂量组IL-6水平与对照组比较,无统计学差异.结论:龙鳖胶囊能消除KOA大鼠的膝关节肿胀,其作用机制与降低KOA大鼠血清IL-1β、IL-6水平及升高IL-10水平有关.
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龙鳖胶囊对膝骨关节炎大鼠体质量及脏器指数的影响
目的:探讨龙鳖胶囊对膝骨关节炎(KOA)大鼠体质量及脏器指数的影响.方法:建立KOA大鼠模型,于造模后开始给予低、中、高剂量龙鳖胶囊(0.3125,0.625,0.9375g/kg)灌胃,连续4周,观察龙鳖胶囊对KOA大鼠体质量及脏器指数的影响.结果:造模后,造模组体质量和胸腺指数低于对照组(P<0.05),而脾脏指数与对照组比较,差异无统计学意义.给药2周后,龙鳖中剂量组的体质量重于对照组(P<0.05),而龙鳖低、高剂量的体质量与对照组比较,差异均无统计学意义;各组之间的脾脏指数差异也不显著;龙鳖低、中、高剂量组的胸腺指数均高于同期造模组(P<0.05).给药4周后,龙鳖低、中、高剂量的体质量均重于对照组(P<0.05),其中,龙鳖中剂量组又重于龙鳖低、高剂量组(P<0.05);龙鳖低、中、高剂量组的脾脏指数均高于同期对照组(P<0.05);各组组间的胸腺指数比较,差异无统计学意义.结论:龙鳖胶囊能增加KOA大鼠体质量及脾脏指数,使降低的胸腺指数恢复至正常水平,其治疗KOA的作用可能与增强大鼠免疫器官的功能相关.
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大鼠脊髓微血管内皮细胞的分离培养与鉴定
脊髓微血管内皮细胞(spinal cord microvascular endothelial cells,SCMECs)参与构成血脊髓屏障,其功能变化与多种脊髓相关疾病相关.目前分离SCMECs的文献很少.本研究拟基于分离多种原代内皮细胞的经验[1-2],建立分离纯化SCMECs的方法.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂:DMEM(高糖)、胎牛血清(FBS)、Ⅱ型胶原蛋白酶、双抗、庆大霉素、谷氨酰胺和l×PBS(北京协和医学院细胞中心);牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、胶原蛋白酶/分散酶(collagenase/dispase)(Roche公司);嘌呤霉素(Sigma公司);内皮细胞培养基(ECM)(Scien Cell公司);兔抗大鼠yon Willebrand factor(vWF)抗体(SantaCruz公司);抗GFAP抗体和抗α-SMA抗体(Abcam公司);FITC标记和TRITC标记的二抗(北京中衫金桥公司).
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幽门螺杆菌定植因子HpPrtC胶原蛋白酶的异源表达及其功能活性研究
目的 异源表达幽门螺杆菌HpPrtC胶原蛋白酶,并检测其对胶原蛋白的降解活性. 方法 根据幽门螺杆菌基因组信息中编号hp0169基因的序列设计引物,PCR扩增HpPrtC基因的核苷酸序列,经NdeⅠ和XhoI酶切后构建原核表达载体pET 22b(+)-HpPrtC,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用亲和层析法纯化重组蛋白,通过检测重组酶处理胶原蛋白后L-亮氨酸的产生量表征其胶原蛋白降解活性. 结果 HpPrtC基因编码422个氨基酸,与已知PrtC家族蛋白酶氨基酸序列比对高相似性<40%.克隆HpPrtC基因连接入表达质粒pET-22b(+),将测序正确的表达质粒pET-22b(+)-HpPrtC转化至感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达相对分子质量约为47×10 3的可溶性蛋白,与预期相符.经亲和层析纯化后的重组蛋白酶降解热变性Ⅰ型胶原蛋白(可溶、不可溶)和天然Ⅰ型胶原蛋白的活性分别为922.2±36.2、1168.8±65.6和674.0±13.4,与幽门螺杆菌培养液中胶原蛋白酶对可溶热变性Ⅰ型胶原蛋白、不可溶热变性Ⅰ型胶原蛋白和天然Ⅰ型胶原蛋白活性分别为205.6±21.5、228.4±19.3和123.2±14.5-致. 结论 幽门螺杆菌定植因子HpPrtC为胶原蛋白酶.通过大肠埃希菌异源表达的重组HpPrtC蛋白具有胶原蛋白酶解活性,为探索该酶在幽门螺杆菌感染定植中的作用机制奠定了基础.
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幽门螺杆菌胶原蛋白酶HpPrtC的表达、纯化及结晶尝试
目的 原核表达、纯化并筛选幽门螺旋菌胶原蛋白酶的结晶条件.方法通过基因重组构建幽门螺杆菌hp0169基因重组表达质粒, 在大肠埃希菌进行重组蛋白的原核表达;经Ni 2+亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白;通过Hampton Research结晶试剂盒筛选蛋白结晶条件.结果 扩增的幽门螺杆菌hp0169基因片段略大于1 000bp, 构建重组质粒pET-28a-hp0169, 转化至大肠埃希菌BL21 (DE3) 菌株后以IPTG诱导表达该U32家族蛋白酶HpPrtC;亲和层析, 离子交换及凝胶过滤层析纯化的目标蛋白经SDS-PAGE鉴定为HpPrtC蛋白单体和二体, 分子质量单位 (Mr) 为50×103和100×103, 但以单体形式为主.使用结晶机器人筛选HpPrtC蛋白的初始结晶条件为0.2mol/L MgCl2, 0.1mol/L Tris, pH 8.5, 3.4mol/L己二醇.结论 HpPrtC可在大肠埃希菌中可溶性表达, 并具有较好的可结晶性, 为其结构与功能研究奠定了基础.
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臭氧与胶原蛋白酶联合应用治疗腰椎间盘突出的临床价值
目的:通过典型病例分析臭氧与胶原蛋白酶联合应用的临床价值.方法:术前CT影像与临床症状相符,确诊为椎间盘突出症.CT导向下行臭氧与胶原蛋白酶联合消融术.术后CT定期复查.结果:对比术前、术后CT影像,突出明显缩小.症状明显改善.结论:通过个案对比、分析,臭氧与胶原蛋白酶联合应用治疗椎间盘突出是一种安全、高效的手段.
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硬膜外粘连松解术在胶原酶溶盘术中的应用
目前对胶原酶化学溶盘术的研究报道主要集中在给药途径及给药方法的改进方面,但未见胶原酶化学溶盘术中应用硬膜外粘连松解术的研究报道.我院对胶原蛋白酶盘内注射加硬膜外粘连松解术治疗椎间盘突出症进行研究,取得较好的效果.
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用新理念完善胶原蛋白酶治疗椎间盘突出症
胶原酶治疗椎间盘突出症(LDH)经历了实践与时间的验证,究竟如何完善适应症和治疗方法的选择?
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胶原蛋白酶治疗椎间盘突出症几个问题的思考
一、诊断与适应证胶原酶治疗椎间盘突出的适应证选择,主要有如下考虑:
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肝素酶及其抑制剂在肿瘤转移中的作用
阻止肿瘤细胞扩散与转移的细胞外基质和基底膜屏障,主要由结构蛋白(包括胶原蛋白、层粘蛋白与玻璃体结合素等)和糖氨聚糖2种成分构成.糖氨聚糖的主要成分是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proglycan,HSPG),HSPG主要由1个核心蛋白和数个与之共价连接的线性硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)侧链组成.在过去十几年中,有关肿瘤转移机制的研究大多集中在底物为结构蛋白的一些蛋白酶(如基质金属蛋白酶、胶原蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶等)上,而对以糖氨聚糖为底物的肝素酶(heparanase)的研究则为多数学者所忽视.
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胶原酶治疗极外侧型腰椎间盘突出症39例临床观察
目的 探索胶原蛋白酶化学溶解术法治疗极外侧型腰椎间盘突出症的疗效及治疗途径.方法 把胶原蛋白酶2支共1200 U用生理盐水稀释成3 mL,在CT引导下行后路侧卧位椎旁注射.结果 治疗效果显著,治疗方法,不同的治疗途径,扩展了胶原蛋白酶的治疗范围,减少病人开放性手术的风险.结论 ①探索胶原蛋白酶与以往不同的治疗途径;②胶原蛋白酶作用部位不同;③扩大微创手术治疗的范围,减少大手术风险.
关键词: 胶原蛋白酶 曲安奈德 极外侧型腰椎间盘突出症 化学溶解术 -
臭氧与胶原蛋白酶盘内联合注射治疗腰椎间盘突出症的临床研究
目的 探讨臭氧与胶原蛋白酶盘内联合注射治疗腰椎间盘突出症的疗效.方法 将236例腰椎间盘突出症患者随机分为观察组和对照组各118例.对照组采用单纯臭氧治疗;观察组在对照组基础上采用常规胶原蛋白酶盘内外注射.结果 观察组优良率86.44%,明显优于对照组73.73%(P<0.05).结论 臭氧与胶原蛋白酶盘内联合注射腰椎间盘突出症安全性高、创伤小、见效快,值得进一步进行临床研究.
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胶原蛋白酶对兔离体椎间盘类软骨细胞形态学的影响
胶原蛋白酶化学溶解术是一种微创技术,已广泛用于慢性颈腰痛的治疗.椎间盘组织在大体结构上由软骨终板、纤维环和中央的髓核构成;在组织学上由丰富的细胞外基质和散在其中的类软骨细胞构成.细胞外基质主要由水、蛋白多糖和胶原构成,而胶原和蛋白多糖均由类软骨细胞分泌.本课题组前期研究表明,胶原蛋白酶可有效溶解椎间盘组织中的胶原纤维[1].但其对椎间盘组织内细胞学的影响尚不清楚.本研究旨在观察胶原蛋白酶对体外培养的椎问盘类软骨细胞形态学的影响,以探讨胶原蛋白酶的作用机制.
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胶原蛋白酶对手术患者体外椎间盘组织的作用
用胶原蛋白酶行脊椎介入治疗技术治疗腰椎间盘突出症疗效明显[1,2].但该技术缺乏椎间盘组织化学溶解的组织学依据,其有效性仍未达成共识.本研究旨在评价胶原蛋白酶对手术患者体外椎间盘组织的作用.
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经新进路注射胶原蛋白酶治疗腰椎间盘突出症的临床研究
注射胶原酶溶解突出的椎间盘是治疗腰椎间盘突出症的有效方法 . 为减少注射胶原酶的副反应 , 提高注射胶原酶的准确性 , 在 CT引导下经小关节内缘注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症取得了良好效果 , 现报告如下 . 自从 Sussman[1]提出注射胶原酶治疗椎间盘突出症以来 , 为减少注射胶原酶的副反应 , 提高注射胶原酶的准确性 , 不少学者对注射方法进行了大量的研究 . 近宋文阁 [2]提出经小关节内侧缘穿刺注射胶原酶溶盘技术 , 具有针位易显 , 穿刺安全 , 注射到位 , 准确无误等优点 . 本研究结合 CT直视下进行 , 试图便于直达病变椎间盘 , 使胶原酶充分集中于突出椎间盘部位 . 目前国内报道胶原酶治疗的优良率在 80% 左右 , 有效率在 83% ~ 96% [3]. 本研究在 CT引导下经小关节内侧缘盘外注射胶原酶 , 由于提高注射的准确性 , 优良率达 91% . 注射后腰背痛的发生率比以往报道的 22% 也明显减少 , 未见有腿痛发生 , 亦未见其他严重副反应发生 .
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胶原酶盘内外注射治疗多节段腰椎间盘突出症的疗效观察
目的观察盘内外注射胶原酶治疗多节段腰椎间盘突出症的疗效。方法穿刺和注药均在C臂X线定位和监视下进行,根据椎间盘突出症的不同类型采用不同给药方法注射胶原酶。结果胶原酶注射后2周、3个月及1年的成功率分别是:80.0%、77.4%、77.4%;腰痛发生率分别是86.4%、42.4%、37.3%。腰椎不稳发生率分别是76.7%、18.6%和1.7%。结论胶原酶盘内外注射治疗多节段腰椎间盘突出症安全、有效。
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盘内外臭氧联合骶管置管注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症的护理及观察
总结用盘内外臭氧联合骶管置管注射胶原酶的方法治疗腰椎间盘突出症的相关护理。护理工作主要做到患者在治疗之前的各项准备以及术中的护理管理、护理手术配合、并发症的处置和术后的出院宣教,从而提高治愈率。40例诊断明确的腰椎间盘突出症患者,应用盘内外臭氧联合骶管置管注射胶原酶法治疗,根据改良的Macnab腰腿疼痛疗效评价标准随访患者于术后3个月、6个月的疗效优良率分别为86.5%和90.6%。
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胶原酶治疗腰椎间盘突出症的护理
腰椎间盘突出是一种常见病,是引起腰腿痛的主要原因之一.临床上一般采用手术切除或保守治疗.研究显示,退变的椎间盘和突出的髓核主要成分是胶原,胶原蛋白酶溶核治疗腰椎间盘突出症也是一项可取的手段.学界对这一项微创倾注了大量的人力物力.胶原酶注入腰椎间盘突出物周围,以溶解腰椎间盘突出物.
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基质金属蛋白酶及活性酶在类风湿关节炎上表达研究
基质金属蛋白酶(Metalloproteinases,MMPS)属锌依赖性内肽酶家族[1],具有降解一种或几种细胞外基质(Extracellular matrix,ECM).细胞外基质(ECM)是存在于细胞间的动态网状结构,由胶原蛋白酶糖及糖蛋白等大分子组成.在细胞-细胞间及细胞-基质间的信号传递、炎性细胞浸润、肿瘤转移、细胞增殖和分化等方面起着重要作用.基质金属蛋白酶影响发育过程,并与许多疾病如关节炎、肿瘤等有关.ECM正常转换是发育所必需的,它的失调能引起病理上损伤导致关节炎.研究明胶酶类基质金属蛋白酶即MMP-2和MMP-9以及活性MMP-2、MMP-9后发现,它与胶原结缔组织反应有极其密切的关系.以胶原结缔组织为主的细胞外基质降解及促进血管翳增生,终导致软骨、韧带、骨的破坏[2],导致类风湿关节炎畸变.