首页 > 文献资料
-
胰液K-ras密码子点突变联合血清CA 199水平与胰腺癌复发关系的研究
目的探讨胰液中K-ras12密码子点突变联合血清CA 199检测与胰腺癌病程的关系.方法测定32例临床及手术证实的胰腺癌患者血清CA199水平,并采用内镜ERCP从胰管收集的胰液标本,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测胰液K-ras 12基因12密码子点突变,分析胰液中K-ras12密码子点突变及血清CA 199联合检测与胰腺癌术后复发的关系.结果(1)胰液中K-ras 12密码子点突变率为56.3%,与肿瘤大小密切相关(P＜0.05).K-ras12密码子点突变阳性、阴性表达病例3年复发率分别为66.7%和33.3%.(2)高血清CA199水平且K-ras 12密码子点突变阳性病例组3年复发率为69.2%,而低血清CA199且ras阳性病例组3年复发率为20.0%,差异显著(P＜0.05).结论联合胰液中K-ras12密码子点突变及血清CA 199检测可作为判断胰腺癌术后复发的有效指标,多因素分析对胰腺癌术后复发的判断更有价值.
-
外周血中K-ras和p53基因突变对胃癌术后复发转移的预测价值
[目的]探讨外周血K-ras和p53基因突变对胃癌根治术患者术后复发转移的预测价值.[方法]纳入2010年1月～2013年12月于我院接受胃癌根治术的107例患者为对象,对其持续随访,并分别于化疗前后取外周血标本.另于2017年3月～5月募集健康志愿者38例,取外周血标本.采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术检测标本K-ras和p53基因突变情况.观察上述基因突变与胃癌患者临床病理特征及复发转移的关系.[结果]107例患者中,共54例复发转移,发生率50.47％;化疗前p53基因突变30例,占28.04％,K-ras基因突变35例,占32.71％.健康志愿者均未能检出p53与K-ras基因突变.K-ras与p53基因突变受化疗影响较轻,且与性别、年龄、手术方案等临床资料无明显关系(P＞0.05).化疗前外周血中检出p53和K-ras基因突变的患者术后无病生存时间明显更短(P＜0.05),两基因突变均是患者术后复发转移的独立危险因素(OR=3.785,2.983;P＜0.05).化疗前K-ras基因突变对预测复发转移的敏感度0.556、特异度0.906;化疗前p53基因突变对预测复发转移的敏感度0.481、特异度0.924.[结论]胃癌根治术患者术后化疗前外周血中K-ras和p53基因突变检出率较高,且存在上述基因突变患者更易出现复发转移.
-
胰液端粒酶活性与K-ras检测对胰腺癌的诊断价值
目的检测胰腺癌和慢性胰腺炎患者胰液中K-ras基因突变和端粒酶活性,探讨端粒酶活性与K-ras基因突变联合检测对胰腺癌患者诊断价值.方法收集24例胰腺癌和14例慢性胰腺炎患者胰液,K-ras基因突变采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(polymerase chian reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)检测,端粒酶活性检测采用端粒末端重复序列扩增技术(telomeric repeat amplification protocol,TRAP).结果胰腺癌中K-ras基因突变率为87.5%(21/24),慢性胰腺炎中K-ras基因突变率仅为21.3%(3/14),差异有显著性(P＜0.01);在24例胰腺癌中端粒酶阳性检出率为83.3%(20/24);而14例慢性胰腺炎胰液中端粒酶阳性检出率为28.6%(4/24),差异同样具有显著性(P＜0.01).K-ras基因突变与端粒酶活性检测诊断胰腺癌的特敏感性分别为87.5%,83.3%;两者联合检测诊断胰腺癌的敏感性为85.5%,特异性达到85.7%.结论联合检测胰液中K-ras基因与端粒酶活性可提高胰腺癌诊断的敏感性和特异性,对胰腺癌筛查、诊断与鉴别诊断有一定临床意义.
-
SD大鼠胰腺癌模型制作及其癌基因K-ras和抑癌基因p53、Smad4的表达
胰腺癌恶性程度高,预后差,其病因及发病机制尚未完全明了[1].我们通过6、9 mg两种不同剂量化学致癌剂二甲基苯并蒽(DMBA)诱导Sprague-Dawley(SD)大鼠原位胰腺癌模型,并比较其优劣,寻找出一个较理想的胰腺癌模型制作方法[2],用免疫组织化学方法动态检测大鼠胰腺组织标本K-ras、p53、Smad4的表达[3],探讨胰腺癌的发病机制.
-
肝内胆管细胞癌中K-ras基因突变分析及临床意义
目的 检测肝内胆管细胞癌组织K-ras基因突变状况,探讨K-ras基因突变与肝内胆管细胞癌的关系.方法 提取32例肝内胆管细胞癌及12例肝内胆管良性病变石蜡组织切片中基因组DNA,PCR扩增K-ras第2外显子片段,采用直接测序法检测其突变状况.结果 32例肝内胆管细胞癌患者中有24例患者存在K-ras基因突变,12例良性病变组织均未发现突变,两者差异具有统计学意义(x2=14.570,P=0.000).其中22例12密码子突变(91.7％),1例6密码子突变,1例23密码子突变.结论 K-ras基因突变与肝内胆管细胞癌的发生明显相关.
-
锁核酸扩增阻滞荧光聚合酶链反应技术检测结直肠癌患者血浆肿瘤K-ras基因突变
目的 建立锁核酸扩增阻滞突变体系荧光聚合酶链反应(LNA-ARMS-PCR)技术检测血浆K-ras突变方法,探讨该方法替代组织检测K-ras突变的可行性.方法 应用锁核酸标记技术建立LNA-ARMS-PCR检测K-ras突变技术,收集155例结直肠癌患者肿瘤组织及其对应血浆标本,同时检测其中的K-ras突变,分析其符合率.结果 建立的检测技术灵敏度高,质粒混合实验证实其灵敏度高达0.1％.肿瘤原发灶内的异质性分析结果显示本方法可以避免因肿瘤异质性导致的假阳性.血浆与肿瘤组织K-ras突变检测的阳性符合率为35.3％,阴性符合率均为100.0％;Ⅳ期患者血浆与组织突变阳性符合率高达83.3％ (15/18).血浆与组织突变检测符合率与TNM分期及循环游离DNA(cfDNA)水平密切相关.结论 LNA-ARMS-PCR方法检测血浆K-ras突变,可以取代肿瘤组织用于检测K-ras突变,但仅限于晚期转移性患者临床价值高.
-
喉鳞状细胞癌中K-ras基因的低甲基化及其蛋白表达
目的 观察喉鳞状细胞癌中K-ras基因启动子甲基化及其蛋白的表达.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测55例喉鳞状细胞癌及其癌旁组织中K-ras基因启动子甲基化状态,并采用Western blot法检测K-ras蛋白的表达.结果 55例喉鳞状细胞癌组织中24例(43.6％) K-ras基因低甲基化,而癌旁组织中仅8例(14.5％)为低甲基化;喉鳞状细胞癌组织中K-ras基因启动子甲基化水平明显低于癌旁组织(P＜0.05);喉鳞状细胞癌组织K-ras基因低甲基化与年龄、性别及淋巴结转移等临床病理特征无明显相关(P＞0.05);而与分化程度及临床分期间明显相关(P＜0.05).此外,喉鳞状细胞癌组织中K-ras蛋白表达水平明显高于癌旁组织.结论 K-ras基因启动子低甲基化可能对喉鳞状细胞癌的发生发展具有重要作用,并可能是喉鳞状细胞癌中K-ras蛋白高表达的原因之一.
-
表浅性膀胱癌术后复发和生存率与p53和K-ras基因突变的关系
目的 探讨p53和K-ras基因突变与表浅性膀胱癌术后复发和生存率的关系.方法 选取表浅性膀胱癌切除术的137例患者,并选取29例正常膀胱黏膜组织作为对照,分别提取组织的DNA,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和直接测序法分别分析p53和K-ras基因突变,并探讨p53和K-ras突变与表浅性膀胱癌术后复发及生存率的关系.结果 p53突变主要集中于外显子7和8,K-ras集中于外显子1和2.正常膀胱黏膜组织中p53和K-ras基因单突变率分别为3.45％(1/29)和6.90％ (2/29),p53和K-ras基因双突变率为0％ (0/29).膀胱癌组织中p53和K-ras单突变的发生率分别为43.07％ (59/137)和30.66％ (42/137),p53和K-ras双突变的发生率为26.28％(36/137).膀胱癌组织中p53和K-ras突变的发生率明显高于正常膀胱黏膜的发生率,差异有统计学意义(P＜0.05).p53和K-ras双突变的术后复发率(75.00％)明显高于p53和K-ras单突变术后复发率(30.51％和28.57％),差异有统计学意义(P＜0.05).p53和K-ras双突变的3年生存率明显低于p53和K-ras单突变的3年生存率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p53和K-ras突变可能是导致膀胱癌术后复发和生存率较低的原因之一.
-
K-ras突变导致肺癌细胞对表皮生长因子受体抑制剂耐药的机制
目的 比较不同细胞株引入K-ras突变质粒前后对表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路活性的变化,探讨K-ras突变对于EGFR抑制剂耐药的机制.方法 通过噻唑蓝(MTF)比色法检测HCC827及H292细胞在转染K-ras基因前后的EGFR下游AKT及STAT通路抑制剂敏感性变化,免疫印迹法(Western blot)检测EGFR下游通路激活状态变化.结果 转染后HCC827细胞对于AKT和STAT通路抑制剂敏感性仅下降1.9和5.3倍,H292细胞对于AKT和STAT通路抑制剂敏感性仅下降3.0和2.5倍,远低于吉非替尼敏感性下降程度,转染K-ras的HCC827细胞AKT通路和STAT3通路持续激活,而转染K-ras的H292细胞AKT通路和STAT3通路的活性降低.结论 K-ras导致EGFR抑制剂耐药的原因可能还存在其他耐药机制,携带EGFR基因突变或野生型的肺癌细胞中,K-ras突变对于AKT和STAT通路的影响可能存在不同.
-
表现为磨玻璃样病变的肺腺癌临床特点与EGFR及K-RAS基因突变的关系
目的 探讨表现为磨玻璃样病变(GGO)的肺腺癌的临床特点与EGFR及K-RAS基因突变关系.方法 连续选择37例经胸腔镜手术及病理证实为肺腺癌的肺GGO病例,分析其临床特点,检测EGFR与K-RAS基因突变情况,及与各临床因素之间的关系.结果 34例行肺叶切除术,3例行肺楔形切除术,术后病理结果显示:16例为原位腺癌,13例为微浸润腺癌,8例为浸润性腺癌.EGFR基因突变22例,K-RAS基因突变1例;在单纯型GGO及混合型GGO病例中,EGFR与K-RAS基因突变均无明显差异;在女性、不吸烟病例中EGFR基因突变相较男性及吸烟病例差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 EGFR基因在表现为GGO的肺腺癌病例中表现出较高的突变率,为肺GGO病例临床治疗提供了重要参考.
-
K-ras基因在人喉鳞状细胞癌细胞株 Hep-2中的表达及其意义
目的:探讨K-ras基因在喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2中的表达及其意义,为喉癌的发生与K-ras点突变的相关性研究奠定基础.方法:采用RT-PCR技术检测K-ras基因mRNA在喉癌细胞株Hep-2和胰腺癌细胞株MIAPaCa-2中的表达.结果:人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2和人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2中K-ras mR-NA表达均为强阳性.结论:人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2中K-ras基因表达阳性,喉癌的发生可能与其点突变引起的激活有关.
-
K-Ras基因型对抗肿瘤药物临床疗效预测作用的研究进展
K-Ras蛋白是细胞膜表面的小G蛋白,能将胞外信号通过一系列信号通路转导到细胞内,参与调控细胞的生存、分化和增殖.当K-Ras的基因发生突变时,持续活化的K-Ras导致下游信号的过度激活,进而促进细胞恶性转化和抗肿瘤药物的耐药.各类型肿瘤中存在K-Ras突变的比例超过20％,在胰腺癌中高达61％.用药方案和肿瘤类型的不同,K-Ras基因突变与抗肿瘤药物临床药效之间的关系尚存在一定的争议.本文系统综述了在各类肿瘤中K-Ras基因突变与细胞毒类化疗药物、表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体及EGFR酪氨酸激酶抑制药临床疗效关系的研究进展,为K-Ras突变的肿瘤患者的临床个体化用药提供参考.
-
甲状腺癌K-ras、P53蛋白表达及与预后关系的研究
为探讨甲状腺癌各组织学类型中K-ras、P53蛋白表达及与预后的关系,利用免疫组化SP法测定K-ras、P53蛋白在甲状腺癌中的表达状况.结果显示,K-ras蛋白在甲状腺乳头状癌表达阳性率为65.0%,明显高于在滤泡状癌、髓样癌、未分化癌表达阳性率(分别为33.3%、6.7%、0),差异有显著性(P＜0.05);P53蛋白在未分化癌表达阳性率为66.7%,明显高于在乳头状癌、滤泡状癌、髓样癌表达阳性率(分别为30.0%、6.7%、20.6%),差异有显著性(P＜0.05).
-
K-RAS蛋白的表达、基因突变在皮肤瘢痕癌组织中的意义
目的 探讨K-ras蛋白表达、基因突变在皮肤瘢痕癌组织中的意义.方法 以皮肤病理性瘢痕、皮肤瘢痕癌组织为研究对象,以正常皮肤组织为对照.采用免疫组织化学(SP)法检测K-ras蛋白的表达.另外,从瘢痕和瘢痕癌石蜡组织中提取DNA,进行PCR扩增及测序,分析K-RAS基因第12、13位密码子点突变情况.所有数据运用SPSS16.0软件包进行统计学分析.结果 ①K-ras蛋白在正常皮肤表皮和皮肤病理性瘢痕上皮中呈弱阳性表达,在瘢痕癌组织中呈强阳性表达.瘢痕癌组的表达与正常皮肤组及皮肤瘢痕组比较,差异均有显著性(P＜0.05)；正常皮肤组与瘢痕组比较,差异无显著性(P＞0.05).②从14例皮肤瘢痕和14例瘢痕癌石蜡组织中提取DNA,经PCR反应,均成功扩增出目的片段,测序未发现K-ras基因第12、13位密码子的点突变.结论 ①皮肤瘢痕癌的发生可能与K-ras蛋白的高表达有关.②瘢痕癌中K-ras基因的突变位点有待进一步探讨.
-
K-ras及PTEN在45岁以下妇女子宫内膜癌中的表达
目的 探讨K-ras及PTEN在45岁以下妇女子宫内膜癌组织中的表达及相关性.方法 选取因子宫病变行子宫全切的标本66例,其中子宫内膜腺癌42例、子宫内膜非典型增生6例、正常子宫内膜18例.采用免疫组织化学SP法测定K-ras及PTEN在45岁及以下妇女子宫内膜组织中的表达.结果 ①K-ras在子宫内膜不典型增生及子宫内膜癌中的表达明显高于正常子宫内膜,差异有显著性(P＜0.05);PTEN在正常子宫内膜中、子宫内膜不典型增生和子宫内膜癌中的表达逐渐降低,表达缺失率分别为16.67%、66.67%和85.71%,差异有极显著性(P＜0.005).②K-ras及PTEN在子宫内膜癌中的表达与临床分期、组织学分级、肌层浸润深度及有无淋巴转移无关.③在子宫内膜癌中K-ras与PTEN表达无显著性(rs值=0.187,P＞0.05).K-ras阳性表达与PTEN阳性表达不一致.结论 K-ras及PTEN的异常表达发生在年轻妇女子宫内膜癌的早期,与预后无关.
-
结直肠癌原发灶与肝转移灶K-ras基因状态的研究
目的 观察K-ras基因在结直肠癌原发灶及肝转移灶的突变状态.方法 采用富集PCR配对测序法检测46例(男35例,女11例)结直肠癌肝转移患者原发灶及肝转移灶K-ras基因突变状态,其中结肠癌肝转移21例(45.7%),直肠癌肝转移25例(54.3%).结果 46例中有18例(39.1%)原发灶K-ras 基因为突变型,其中17例对应的肝转移灶K-ras基因为突变型,1例对应的肝转移灶K-ras基因为野生型.28例(60.9%)原发灶K-ras基因为野生型者中,26例对应的肝转移灶K-ras基因为野生型,2例对应的肝转移灶K-ras基因为突变型.统计分析表明,原发灶与肝转移灶K-ras基因突变状况差异无统计学意义(P=1.00).结论 转移性结直肠癌原发灶与肝转移灶的K-ras基因突变状态差异无统计学意义.
-
K-ras与非小细胞肺癌的研究进展
Ras蛋白(P21ras)属于乌苷酸三磷酸酶(GTPase)家族成员,是细胞增殖、分化、分裂和凋亡的重要调节者.已经发现有20%～30%的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)存在K-ras基因突变,认为其在恶性发生中扮演了重要角色.20多年来许多研究认为K-ras基因突变可作为一个不良的预后标志,同样也有很多研究没能证实这一观点.研究进展的阻碍与相埘小规模的研究,不同的分子分析方法,和组织来源的异源性、组织的不同亚型、分期、治疗和生存标准有关.近发现NSCLC患者使用辅助治疗或者使用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂都对病程有不同影响,K-ras基因是EGFR途径下游的一个重要信号分子,因此认为K-ras基因也是NSCLC一个重要的生物标志,值得进一步深入研究.
关键词： K-RAS 非小细胞肺癌(NSCLC) 信号转导通路 基因突变 靶向治疗 -
大肠癌p53、K-ras基因突变研究
目的探讨p53、K-ras基因突变与大肠癌发生、发展的关系.方法应用PCR-SSCP方法研究68例大肠癌和癌旁组织以及20例正常组织p53、K-ras基因突变情况.结果大肠癌组中p53、K-ras基因突变率分别为47.1%和44.1%,明显高于癌旁组(分别为13.2%和7.4%),20例正常组织中未检出p53、K-ras基因突变.大肠癌伴有淋巴结转移及远处转移者,p53、K-ras基因突变率明显高于无淋巴结及远处转移者;p53、K-ras基因突变与组织学分型无关.结论p53、K-ras基因突变与大肠癌发生、发展有密切关系,在细胞癌变中起重要作用,可作为评估大肠癌转移的分子生物学指标.
-
飞行时间质谱技术在结直肠癌K-ras基因突变检测中的应用
目的 探讨MALDI-TOF-MS方法在检测结直肠癌K-ras基因突变中的实际临床价值.方法 选取61例结直肠癌患者的肿瘤组织石蜡标本,应用常规测序和基质辅助激光解析/电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)两种方法,检测K-ras基因第2号外显子中第12及13位密码子的前两位碱基突变情况.结果 常规测序法成功完成检测47例(77.0％),而MALDI-TOF-MS法成功检测所有61例标本.常规测序法检测样本总体突变率为30.0％(14/47),MALDI-TOF-MS法检测所有标本的总体突变率为36.1％(22/61).6例样本常规测序法未检测到突变而质谱法检测到明确突变存在.14例样本经两种方法均检测出突变,且两种方法检测出的突变类型完全一致.2例样本未完成常规测序检测而通过质谱法检测出突变.结论 相对常规测序而言,MALDI-TOF-MS法是一种对标本质量要求较低、更敏感的结直肠癌K-ras突变检测方法,有更好地临床价值.
关键词： 结直肠肿瘤 基因 K-RAS 基因突变 基质辅助激光解析/电离时间飞行质谱 -
K-ras基因突变与结直肠癌肝转移及其预后关系的研究
目的 探讨结直肠癌肿瘤原发灶中K-ras基因突变情况与肝转移及其预后的关系.方法 回顾性选取2003年1月至2008年12月间经复旦大学附属中山医院普通外科手术治疗的结直肠癌病例,根据术时诊断和术后随访肝转移情况分为同时性肝转移、异时性肝脏转移和未发生肝脏转移的患者3组,每组各100例.运用PCR及Pyrosequencing法检测石蜡标本中肿瘤原发灶K-ras第2外显子突变情况,分析其与结直肠癌肝转移的发生及其预后的关系.结果 300例样本中肿瘤原发灶K-ras突变者120例(40.0％),其中K-ras第2外显子G13D突变32例,而异时性肝转移组中K-ras的第2外显子G13D突变较同时性肝转移组多(17.0％比8.0％,P=0.041).多因素回归模型提示,K-ras第2外显子的G13D突变是结直肠癌异时性肝转移的独立危险因素(P=0.048,HR=1.108,95％CI:1.032～5.062).结直肠癌无肝转移组中K-ras基因突变者较无突变者总体生存期短(中位生存时间65比72个月,P=0.039),而在结直肠癌肝转移切除的患者中,K-ras基因突变者无复发生存期短(中位时间18比24个月,P=0.048),多因素分析提示,K-ras基因突变(HR=1.561,95％CI:1.022～6.422,P=0.045)是影响结直肠癌无肝转移组总体生存的独立危险因素.结论 检测结直肠癌原发灶中的K-ras基因状态可以为预测肝脏的转移和预后情况提供参考.
