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卵巢黏液性交界性肿瘤中K-ras基因突变及p21 ras蛋白的表达
目的：观察卵巢黏液性交界性肿瘤中K-ras基因突变及p21 ras蛋白的表达，探讨卵巢黏液性交界性肿瘤的发病机制及靶基因治疗的可能。方法采用PCR-RFLP法和免疫组化EliVision法分别检测40例卵巢黏液性交界性囊腺瘤、40例卵巢黏液性囊腺癌和20例卵巢黏液性囊腺瘤中K-ras基因突变和p21 ras蛋白的表达。结果 K-ras基因在卵巢黏液性囊腺瘤、黏液性交界性囊腺瘤和黏液性囊腺癌中的突变率分别为0、37.5%、7.5%，交界组突变率明显高于其他两组，差异有统计学意义( P<0.01)。 K-ras基因突变在卵巢黏液性交界性肿瘤年龄分组中突变，差异有统计学意义(P<0.05)。 p21ras蛋白在卵巢黏液性囊腺瘤、黏液性交界性囊腺瘤和黏液性囊腺癌中阳性率分别为5%、45%、10%，交界组阳性率明显高于其他两组，差异有统计学意义(P <0.01)。结论 K-ras基因突变及p21ras蛋白表达可能是卵巢黏液性交界性肿瘤形成的原因之一，有利于卵巢黏液性交界性肿瘤的判断，还可为临床作为靶向治疗药物分析提供病理学基础。
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姜黄素对miR-21靶控的信号转导蛋白K-ras的影响
目的：探讨姜黄素对miR-21靶控的信号转导蛋白K-ras的影响。方法18只SD雄性大鼠,随机分为对照组、模型组和姜黄素组,每组6只。除对照组外,模型组和姜黄素组用二乙基亚硝胺( DENA)连续灌胃18周,姜黄素组于第9周用姜黄素灌胃,每周2次,连续10周；对照组先用生理盐水灌胃8周,9~18周用生理盐水+0．5%羧甲基纤维素钠灌胃。应用qRT-PCR技术检测miR-21的表达；Western blot法检测K-ras蛋白的表达。结果肝癌模型组miR-21基因的相对表达量较正常对照组明显增加( P<0．05)；姜黄素组miR-21基因相对表达量较肝癌模型组明显降低( P<0．05),与对照组相比表达量增加,差异有统计学意义( P<0．05)；与对照组相比,模型组和姜黄素组肝癌组织中K-ras蛋白相对表达量均明显升高(P<0．05),姜黄素组大鼠肝癌组织中K-ras蛋白相对表达量较模型组均明显降低( P <0．05)。Pearson相关分析显示,实验各组K-ras蛋白及miR-21的表达量均呈正相关( P<0．05)。结论姜黄素可能通过调控miR-21靶控的信号转导子K-ras蛋白表达促进肝癌的发生、发展及侵袭转移,对肝癌生物靶向治疗及预后判断具有潜在临床应用价值。
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Syndecan-1在结直肠癌中的表达与EGFR表达、K-Ras突变及化疗疗效相关性分析
目的:探讨结直肠癌中Syndecan-1的表达与表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)表达、K-Ras基因突变及化疗疗效的关系.方法:利用免疫组织化学法检测160例晚期结直肠癌患者中Syndecan-1的表达情况,分析其与患者临床病理特征、分子标志物及FOLFOX方案化疗疗效的相关性.结果:所有患者中有41例(25.6％) Syndecan-1表达阳性,111例(69.4％) EGFR表达阳性;Syndecan-1的表达与EGFR表达显著相关(P＜0.05);与K-Ras基因突变无相关性(P＞0.05);Syndecan-1表达阳性患者的化疗有效率56.1％,阴性患者为40.3％(P＜0.05),Syndecan-1表达阳性患者的中位无疾病进展时间为8.8个月,而阴性患者为7.2个月(P＜0.05).结论:Syndecan-1的表达对结直肠癌进展及判断预后有一定的临床价值,且与常用FOL-FOX化疗方案的疗效有相关性.
关键词： 结直肠癌 Syndecan-1 表皮生长因子受体 K-RAS 化疗疗效 -
索拉非尼联合吉西他滨对k-ras基因突变肺癌细胞株的增殖抑制作用及其机制
目的 探讨索拉非尼(sorafenib)单药以及联合吉西他滨(gemcitabine)对k-ras基因突变的非小细胞肺癌H460、A549细胞株的抑制作用及相关机制.方法 索拉非尼、吉西他滨以及两药联合作用于H460、A549细胞株.MTT法检测增殖抑制作用,流式细胞仪检测对细胞周期的影响,蛋白质印迹法检测p-erk、erk以及bcl-2的变化.结果 索拉非尼抑制H460及A549细胞的增殖,联合吉西他滨有协同作用,索拉非尼将H460和A549细胞阻滞于G0/G1期,而吉西他滨将细胞阻滞在S期;吉西他滨单药上调p-erk、bcl-2,索拉非尼单药以及两药联合下调p-erk、bcl-2.结论 索拉非尼能抑制k-ras基因突变的H460和A549细胞株的生长,联合吉西他滨有协同作用.
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EGFR和K-ras在肺癌中的表达及其临床意义
目的 研究表皮生长因子受体(EGFR)和K-ras 因子在不同组织学类型肺癌组织以及正常组织中的表达,探讨EGFR和K-ras因子在肺癌中的作用及其临床意义.方法 收集不同类型的肺癌组织96例以及正常的肺组织96例,采用免疫组化法检测肺癌组织以及正常肺组织中EGFR和K-ras因子的表达.结果 在96例肺癌组织中,EGFR在各型肺癌中高表达(阳性率为44.8%),在非小细胞肺癌(NSCLC)中,与组织学类型、淋巴结转移、性别、年龄相关(P<0.05),与分化程度无相关性;K-ras在各型肺癌中高表达(阳性率为78.1%),在NSCLC中,与组织学类型、淋巴结转移、年龄相关 (P<0.05),与分化程度、性别无相关性;肺癌组织中EGFR和K-ras的表达具有反相关(P<0.05).结论 EGFR和K-ras在肺癌中的高表达可能促进肺癌的发生、发展.
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K-ras基因在肿瘤中的研究与展望
通过对人类基因组序列的鉴定,人们发现基因的突变可以导致各种不同的肿瘤[1],比如p53、EGFR等.在肿瘤基因中,ras基因的突变可以说和人类肿瘤的关系非常密切,其中ras家族中K-ras基因又因为其高突变率而成为了ras基因研究的1个热点.下面就K-ras基因及该基因在一些肿瘤中的研究及应用情况综述如下.
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一种人类K-ras基因突变检测试剂盒的质量标准研究
目的 评价和分析一种新的人类K-ras基因突变检测试剂盒质量,确定该类试剂质量标准和评价方法.方法 利用实时荧光定量PCR方法,检测7种K-ras基因单一突变点质控品的准确性、特异性、低检测量和重复性.分别检测7例肠癌患者K-ras基因突变阳性组织样本和10例阴性样本的准确性和特异性 .结果 试剂盒准确性、特异性、低检出量和重复性均符合质量标准.能准确和特异的检出单一点突变,具有较好的灵敏度和重复性.结论 该试剂盒质量标准设定较合理,在指导K-ras基因突变检测方面具有较好的应用前景.
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一种人类K-ras基因突变检测试剂盒的质量标准研究
目的 评价和分析一种新的人类K-ras基因突变检测试剂盒质量,确定该类试剂质量标准和评价方法.方法 利用实时荧光定量PCR方法,检测7种K-ras基因单一突变点质控品的准确性、特异性、低检测量和重复性.分别检测7例肠癌患者K-ras基因突变阳性组织样本和10例阴性样本的准确性和特异性 .结果 试剂盒准确性、特异性、低检出量和重复性均符合质量标准.能准确和特异的检出单一点突变,具有较好的灵敏度和重复性.结论 该试剂盒质量标准设定较合理,在指导K-ras基因突变检测方面具有较好的应用前景.
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长期放置宫内节育器的安全性研究
目的:探讨长期放置宫内节育器(IUD)的安全性.方法:使用光镜、扫描电镜和透射电镜观察放置及非放置IUD妇女子宫内膜的组织结构和超微结构;采用PCR-SSCP技术检测其子宫内膜 p16、p53、k-ras基因的表达.结果:长期放置惰性IUD的子宫内膜表现为局部机械性压迫现象;放置含铜IUD的子宫内膜则呈现轻微的损伤;两种IUD的子宫内膜细胞均未见坏死及异型改变.p16、p53、k-ras基因表达在各组中均无改变.结论:长期放置惰性IUD对子宫内膜无损伤、无致突变作用;放置含铜IUD对子宫内膜有轻微的损伤作用,未见致突变现象.
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被动吸烟对大鼠肺泡上皮细胞结构及p53,K-ras表达的影响
目的 利用Wistar大鼠烟雾吸入模型,观察吸烟各时间段Wistar大鼠肺泡结构及肺泡细胞超微结构的变化,分析吸烟对p53,K-ras在肺组织中表达的影响.方法 建立大鼠烟雾吸入模型,常规石蜡切片HE染色,光镜观察肺泡结构等变化情况;以半薄切片为指导进行超薄切片、醋酸双铀染色、透射电镜观察肺泡上皮细胞内超微结构的变化情况;免疫组织化学SP法检测吸烟各个设定时期p53,K-ras蛋白的表达情况.所得数据采用SAS软件作统计学处理分析,比较各组间差异程度.结果 吸烟可以导致肺泡破裂、肺泡融合、肺大泡、肺实变等一系列肺组织的损害,还可导致线粒体嵴消失、嗜锇性板层小体空泡样变、粗面内质网脱颗粒、高尔基复合体增大等超微结构改变,并随吸烟时间的延长越加严重.p53,K-ras蛋白表达阳性率随吸烟时间的延长而升高(P＜0.05).结论 p53,K-ras蛋白与吸烟相关性肺癌的发生密切相关.
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非小细胞肺癌K-ras基因点突变的研究
目的 研究肿瘤组织中K-ras基因点突变在非小细胞肺癌(NSCLC)发生中的作用.方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性结合银染技术检测31例NSCLC患者肿瘤组织标本中K-ras基因第12、13、61位密码子的突变情况.结果 肺癌组织中K-ras突变率与癌旁正常对照组织比较有显著差异(P<0.01);K-ras基因突变与NSCLC患者年龄、性别、吸烟与否、临床分期及肿瘤细胞分化程度无关,但与病理组织学类型相关.结论 K-ras基因突变参与了NSCLC的发病过程,可能是NSCLC发生的早期事件.
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PKC-a、K-ras蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)及K-ras蛋白在结直肠癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化法分别检测76份结直肠腺癌组织(腺癌组)、15份结直肠腺瘤组织(腺瘤组)及10份正常结直肠黏膜(正常组)中PKC -a及K-ras蛋白表达,分析两者的相关性及其与肿瘤临床病理特征的关系.另采用Western blot法检测30份结直肠癌黏膜组织和10份癌旁黏膜组织(距肿瘤10 cm)中PKC-a和K-ras蛋白表达水平.结果 腺癌组PKC-a阳性率明显低于、K-ras阳性率明显高于腺瘤组及正常组,P均＜0.05.PKC-a和K-ras表达与结直肠癌临床病理分级有关,随着病理分级增加,PKC-a表达率逐渐降低,K-ras升高；二者表达与性别、年龄、淋巴结转移及Dukes分期均无关.PKC-a与K-ras蛋白的表达之间呈负相关(r=-0.930).结论 PKC-a蛋白与K-ras蛋白与结直肠癌的发生及发展有关.
关键词： 结直肠癌 蛋白激酶C K-RAS 免疫组化法 Western blot -
MGMT、K-ras在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究
目的探讨DNA修复酶 O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)及癌基因K-ras在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与肺癌发生、发展的关系.方法采用免疫组化SABC法,检测60例手术切除、病理证实的非小细胞肺癌病人癌及癌旁组织中MGMT、K-ras的表达.结果 60例外科手术切除的非小细胞肺癌组织中,MGMT蛋白的阳性表达率为33%,明显低于(P﹤0.05)其在癌旁组织中的表达率( 63%);K-ras蛋白的阳性表达率63%,明显高于(P﹤0.05)其在癌旁组织中的表达率( 30%).MGMT蛋白在NSCLC中的阳性表达率与肿瘤的P-TNM分期、淋巴结转移、吸烟史有关(P﹤0.05);与患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度及肿瘤的大小无关(P>0.05).K-ras蛋白在NSCLC中的阳性表达率与肺癌的组织学类型、肿瘤的大小、淋巴结转移、吸烟史有关;与患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度及P-TNM分期无关(P>0.05).结论在NSCLC中,MGMT蛋白的表达与K-ras蛋白的表达呈负相关,提示MGMT表达缺失可能导致癌基因K-ras激活,并与肺癌的发生、发展相关.K-ras蛋白表达与吸烟有关,并在腺癌中高表达,提示K-ras可能为烟草致癌的靶基因及肺腺癌癌变的关键基因.联合监测两种蛋白可能对肺癌的辅助诊断有一定意义.
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联合检测粪便中k-ras与p53基因诊断大肠癌
目的 探讨粪便中k-ras与p53基因突变的检测用于大肠癌诊断及筛查的可行性.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析-银染法检测大肠癌组织及粪便中k-ras与p53基因突变,并与粪便潜血实验比较.结果 31例大肠癌患者组织中k-ras基因突变9例,粪便中检测出7例;p53突变12例,粪便中检测到p53突变10例,二者符合率分别为77%(7/9)和83%(10/12),而在正常组织及正常人粪便中均未检测到突变,特异性100%.粪便中k-ras与p53基因突变与肿瘤分化程度,Dukes分期,肿瘤部位,粪便潜血,癌胚抗原无关.结论 粪便中突变基因检测有望成为一种新的大肠癌无创性筛查方法.
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K-ras基因突变与大肠癌
在中国大肠癌的发病率在消化道肿瘤中占第二位.目前,大肠癌的发生发展机制仍未清楚,从分子水平上揭示基因变化,以阐明大肠癌的发病机制是大肠癌的研究重点.RAS基因是普遍存在的真核基因家族,在哺乳动物、鸟类、软体动物、植物、真菌和酵母中都已被确认.序列分析结果揭示,RAS基因和它们的表达产物高度保守,这就意味着它们在细胞增殖和分化过程中起重要作用.K-ras基因突变是常见的大肠癌相关基因改变之一,本文着重介绍人类大肠癌中的RAS基因家族的突变.
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单链构象多态性分析K-ras和p16基因突变
目的:研究大鼠肺癌组织K-ras和p16 基因突变情况. 方法: 运用聚合酶链反应-单链构象多态性 (PCR-SSCP) 技术分析肺癌组织K-ras和p16 基因突变.结果:未发现正常大鼠肺组织中K-ras和p16 基因突变, 在肿瘤组织中 K-ras和p16均有2例突变发生.结论: K-ras和p16 基因突变与肺癌发生存在一定的相关性.
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大肠癌患者粪便K-ras基因突变的研究
目的:探讨粪便中K-ras基因突变的检测用于大肠癌诊断及筛查的可行性.方法:应用基因扩增-单链构象多态性分析-银染法检测癌组织及粪便中K-ras基因突变.结果:31例大肠癌患者粪便K-ras基因扩增率为70%,癌组织中检测到K-ras突变9例,在相对应患者粪便中检测到突变7例,敏感性77%(7/9),特异性100%.粪便中K-ras基因突变与肿瘤分化程度、Dukes分期、肿瘤部位、粪便隐血试验(Fecal ollult blood test FOBT)及癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)无关.结论:粪便中突变基因检测有望成为一种新的大肠癌无创性筛检方法.
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肺癌K-ras基因点突变的研究
目的：探讨肺癌发生的分子遗传学机理，了解肺癌中K-ras基因的突变情况。方法：采用聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)结合银染技术，对32例肺癌组织及其相应的癌旁组织中K-fas基因第12、13、61位密码子的突变情况进行检测。结果：肺癌组织中K-ras基因总突变率为25％(8/32)，其中腺癌突变率为40％(4/10)，鳞癌突变率为23％(3/13)，大细胞肺癌突变率为33％(1/3)。小细胞癌突变率为0(0/6)，相应的癌旁组织突变率为3.1％(1/32)。结论：K-ras基因突变与肺癌发生发展有关。
关键词： 肺癌 基因 K-RAS 聚合酶链式反应单链构象多态性 -
高分辨率溶解曲线分析与基因测序检测粪便DNA对大肠癌筛查作用的比较
目的 用基因测序评价高分辨率溶解曲线分析( high-resolution melting,HRM)检测粪便DNA的可靠性.方法 收集2009年3月～2009年9月在惠州市中心人民医院住院的39例大肠癌患者的新鲜粪便标本约1g,应用HRM法和基因测序法检测粪便中apc、k-ras、p53基因的突变情况,并对结果进行统计学分析.结果 应用HRM在39例大肠癌患者粪便中检出apc基因突变22例,检出率为56.41％ (22/39),经测序HRM阳性的22例标本均发现有基因突变,HRM阴性的标本未发现有基因突变者；检出k-ras基因突变14例,检出率为35.90％ (14/39),经测序HRM阳性的14例标本均发现有基因突变,HRM阴性的标本末发现有基因突变者；检出p53基因突变24例,检出率为61.54％(24/39),经测序HRM阳性的24例标本均发现有基因突变,HRM阴性的标本未发现有基因突变者.结论 HRM法与基因测序的一致率较高,提示HRM法检测粪便DNA突变筛查大肠癌具有潜在的临床应用价值.
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k-ras基因寡核苷酸芯片的研制及在胰腺癌组织中检测应用研究
目的 建立ras基因寡核苷酸芯片对胰腺癌基因突变的检测系统.评估16例胰腺癌组织k-ras基因12、13、61位密码子变突检测.方法 采用双重或单独不对称PCR扩增标本中的目的 DNA.扩增产物加杂交液后与芯片进行杂交、清洗、扫描.结果 16例胰腺癌组织中k-ras为75%,突变都发生在12密码子,k-ras以12密码子第2位核苷酸突变发生率高(8/12).结论 k-ras基因芯片系统具有高度的灵敏性和准确性、快速简便、自动化程度高等优点,可同时检测胰腺癌k-ras多个突变位点基因,有利于临床应用.
