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EGFR和K-ras在结直肠癌中的表达及其临床意义
[目的]检测结直肠癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和K-ras蛋白的表达情况,分析其在结直肠癌组织中表达与临床病理特征之间的关系.[方法]应用免疫组化SP法检测80例原发性结直肠癌及其相应的癌旁组织中EGFR和K-ras蛋白的表达情况.[结果]EGFR、K-ras蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达显著高于其在癌旁组织中的表达(P＜0.01).EGFR蛋白的表达与肿瘤病理分化程度、浸润深度以及肿瘤Dukes分期、有无淋巴转移有关,Dukes分期越晚(x2=8.935,P=0.030),分化程度越低(x2=11.757,P=0.001),浸润深度越深(x2=6.888,P=0.009)及有淋巴结转移者(x2=10.889,P=0.001),其表达越高,而与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位无关(P＞ 0.05)；K-ras蛋白仅与肿瘤的病理分化程度有关,分化程度越低(x2=9.528,P=0.001),其阳性表达越多.结直肠癌组织中EGFR和K-ras蛋白的共表达呈正相关性(r=0.327,P=0.002).[结论]EGFR和K-ras在结直肠癌中存在共表达现象,二者的高表达可能促进结直肠癌的发生、发展,检测二者可辅助判断患者的预后和转移情况以及指导临床治疗.
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K-ras基因与DCC基因在大肠癌中的表达及相关性研究
目的：通过研究k-ras基因DCC基因在大肠癌中的表达情况，初步探讨二者在大肠癌发生、发展过程中的作用及可能的分子机制。方法：采用S-P免疫组织化学方法检测80例结直肠癌组织及15例正常大肠黏膜中k-ras基因与DCC基因的表达情况。结果：k-ras基因在正常组织中未见表达，在大肠癌组织中呈阳性表达。DCC阴性表达与大肠癌的临床分期、淋巴结转移密切相关；k-ras基因与DCC基因之间存在明显的相关性。结论：k-ras基因在大肠癌中的表达与细胞分化程度、Dukes分期有密切关系； DCC在大肠癌中的表达与细胞分化程度、Dukes分期及有无淋巴结转移有密切关系。
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CyclinD1和k-ras在宫颈癌中的表达及意义
目的：通过检测CyclinD1和k-ras在宫颈癌组织(实验组)，正常宫颈组织(对照组)，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ中表达水平的差异，探讨它们在宫颈癌疾病发生发展中所起的作用和可能的分子机制，为宫颈癌的病因学研究提供理论依据。方法采用免疫组织化学方法检测宫颈癌患者15例，正常宫颈组织20例，CINⅠ18例，CINⅡ12例，CINⅢ20例中CyclinD1和k-ras的表达情况，分析CyclinD1和k-ras在宫颈癌疾病发生、发展过程中的相互关系。结果 CyclinD1和k-ras与正常组织比较，在宫颈癌组织中表达明显增高，随着临床分期的增加，蛋白表达增强差异有统计学意义(P＜0.05)；k-ras蛋白、CyclinD1蛋白与年龄、宫颈癌组织分型中其表达差异无统计学意义(P＞0.05)；而在分化程度和淋巴转移方面差异有统计学意义(P＜0.05)；且在低分化组为66.7%和59.3%，在高、中分化组为23.7%和28.9%；有淋巴结转移组为54.8%和63.0%，且CyclinD1和k-ras表达明显呈正相关。结论①k-ras、CyclinD1蛋白的高表达与宫颈癌的发生密切相关，各种蛋白共同发挥了协同作用。②在宫颈癌疾病中CyclinD1和k-ras的表达强度增强，且二者表达明显相关。
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非小细胞肺癌中EML4-ALK融合基因的检测及其与EGFR、K-ras基因的相关性
目的 探讨不同类型非小细胞肺癌(NSCLC)的EML4-ALK融合基因的表达及其与表皮生长因子受体(EGFR)和K-ras基因突变的相关性.方法 用基因测序方法检测98例NSCLC患者肿瘤组织中EGFR(18、19、20、21外显子)基因和K-ras(12、13、61密码子)基因的突变.用荧光PCR法检测EML4-ALK融合基因的表达.用x2检验来分析EML4-ALK融合基因与EGFR、K-ras基因在NSCLC中的相关性.结果 98例样本中6例有EML4-ALK基因表达,表达率为6.1％,32例(32.7％)发生了EGFR基因突变,21例(21.4％)发生了K-ras基因突变.EML4-ALK融合基因阳性与患者年龄有关(x2=5.35,P=0.021),与性别(x2=0.48,P=0.491)、吸烟(x2=0.11,P=0.739)、组织学类型(x2=1.65,P=0.648)、腺癌分化程度(x2=1.59,P=0.452)无关.98例患者中,未发现有EGFR基因突变、K-ras基因突变和EML4-ALK融合基因表达同时存在的病例.结论 EML4-ALK融合基因代表了NSCLC的一个新的分子亚型,EML4-ALK融合基因与NSCLC患者年龄相关.EML4-ALK融合基因的表达与EGFR及K-ras基因突变不同时存在.
关键词： 非小细胞肺癌 突变 表皮生长因子受体 K-RAS EML4-ALK融合基因 -
RCC1、EGFR与K-ras在NSCLC治疗中的进展
肺癌居癌相关性死因首位,非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80％-85％,非小细胞肺癌的发病率和死亡率呈上升趋势,化疗仍是晚期NSCLC重要的治疗方式,而其标准一线化疗方案(含铂的第三代二联化疗方案)的有效率仅为25％-35％.总体而言,肺癌患者的预后仍较差.当今,NSCLC患者个体化治疗中,利用分子标志物预测预后和指导治疗成为研究热点,通过检测分子标志物指导个体化治疗,能够选择有效的治疗策略,使疗效大化,大程度降低毒性,从而改善预后.本文就核苷酸切除交叉互补基因1(ERCC1)、表皮生长因子受体(,EGFR)、原癌基因Kirsten-Rous肉瘤病毒(K-ras)与NSCLC的相关性研究进展作一综述.
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检测胃癌患者外周血中K-ras和p53基因突变的临床价值
目的 探讨检测胃癌患者外周血中K-ras和p53基因突变的临床意义.方法 应用聚合酶链反应一单链构象多态性分析(PCR-SSCP)法,对我院收治的73例胃癌患者外周血中的K-ras和p53基因突变进行检测,并与20例非肿瘤疾病患者作对熙.结果 73例胃癌患者中有7例外周血中检测出p53基因突变,阳性率为9.6%;5例检测出K-ras基因突变,阳性率为6.8%.对照组外周血中均未检出K一瑚和p53基因突变.有无肝转移的胃癌患者外周血p53和K-ras基因突变阳性率间差异均有统计学意义(P＜0.05).不同分化程度及临床分期的胃癌患者外周血p53和K-ras基因突变阳性率间差异无统计学意义(JP＞0.05).结论 PCR-SSCP法检测外周血中K-ras和p53基因DNA有助于胃癌肝转移的诊断.
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k-ras、c-myc和cyclinD1在大肠腺瘤-癌组织序列中的表达及其意义
目的:探讨k-rits、c-myc和cyclinD1在大肠腺瘤、腺癌发生发展过程中的作用.方法:应用半定量RT-PCR方法检测10例正常大肠黏膜、36例大肠腺瘤、10例大肠腺瘤恶变及70例大肠癌组织中k-ras、c-myc和cyclinD1的表达情况.结果:k-rag,c-myc和cyclinD1在大肠腺癌中的表达阳性率及相对表达量均明显高于大肠腺瘤(P＜0.05).k-ms、c-myc和cyclinD1的表达在大肠腺瘤、腺癌、腺瘤恶化组织中的表达具有显著的相关性.结论:大肠癌与大肠腺瘤发生机制可能涉及ras通路中k-ras,c-myc@cyclinD1多个基因的异常.
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虫草素抑制Ras蛋白表达并诱导非小细胞肺癌H358细胞凋亡研究
目的:研究虫草素在体外对K-Ras突变型非小细胞肺癌H358细胞的抑制作用及其相关机制.方法:用MTT法检测虫草素对H358细胞增殖的影响;以流式细胞术检测虫草素诱导H358细胞凋亡情况和对细胞周期的影响;用活性检测试剂盒检测Caspase3、8、9的活性变化;采用Western Blot方法检测K-Ras蛋白的表达情况.结果:不同浓度的虫草素对于H358细胞增殖均有一定的抑制作用,并以浓度依赖的方式诱导H358细胞凋亡和引起G1期周期阻滞;Caspase3、8、9均被不同程度激活;虫草素能够抑制H358细胞K-Ras的表达.结论:虫草素能够在体外有效诱导H358细胞凋亡并抑制H358细胞增殖,为进一步应用于临床治疗K-Ras突变型非小细胞肺癌等肿瘤疾病奠定了实验基础.
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宫颈脱落细胞中高危型人乳头瘤病毒和k-ras、c-myc基因表达及其与宫颈上皮内瘤变病变程度相关性分析
目的 探讨宫颈脱落细胞中高危型人乳头瘤病毒和k-ras、c-myc基因表达及其与宫颈上皮内瘤变病变程度的相关性.方法 选择2012年12月至2013年1月在舟山市妇幼保健院因液基细胞学检测(TCT)结果异常或HPV-DNA检测异常行阴道镜宫颈活检术的252例患者作为研究对象,术前取其宫颈脱落细胞,其中宫颈上皮内瘤变(CIN)患者164例、慢性宫颈炎患者48例及正常体检者40例.实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)检测高危型HPV-DNA,逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测k-ras、c-myc mRNA表达,并分析其与CIN病变程度间的相关关系.结果 (1)高危型HPV-DNA和k-ras、c-myc mRNA在CIN Ⅰ～Ⅲ级表达均较慢性宫颈炎及正常体检者高,在CINⅢ级表达较CIN Ⅰ、Ⅱ级高,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)CIN患者高危型HPV-DNA与k-rasmRNA呈明显相关(r=0.2507,P=0.0012),但与c-myc mRNA表达无明显相关(P＞0.05).(3) Logistic回归分析显示高危型HPV-DNA和k-ras、c-myc mRNA表达增高是致CIN发生的危险因素(P＜0.05).结论 CIN发生与高危型HPV感染和癌基因k-ras、c-myc mRNA表达增高有关,特别是CINⅢ级.检测高危型HPV-DNA和k-ras、c--myc mRNA对早期发现CIN和宫颈癌具有重要的临床意义
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microRNA-Let-7 a在肺癌患者中的表达及其抑癌机制的探讨
目的：探讨非小细胞肺癌（ Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者血清和肺癌组织中microRNA-Let-7a表达水平以及对肺癌细胞侵袭和增殖影响。方法：选取我院50例NSCLC患者为研究组，50例同期体检健康者为对照组，采用Real-time RCR检测肺癌患者肿瘤组织和血清中microRNA-Let-7a表达水平；对肺癌细胞株A549转染microRNA let-7a mimics后，transwell法观察microRNA-Let-7a对肺癌细胞侵袭的影响，CCK-8法检测肺癌细胞增殖的变化； Real-time RCR及Western blot检测了A549中k-Ras mRNA及蛋白水平。结果：microRNA-Let-7a在肺癌患者血清中的表达水平显著低于正常健康人群，差异具有统计学意义（ P＜0.05），在肿瘤组织中的表达显著低于癌旁组织，差异具有统计学意义（ P＜0.05）；转染microRNA let-7a mimics后，A549的侵袭和增殖能力显著下降，差异具有统计学意义（P＜0.05），A549中k-Ras mRNA及蛋白表达水平显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；结论：microRNA let-7a在肺癌患者肿瘤组织和血清中低表达，并可减弱肺癌细胞的侵袭和增殖能力，且可能通过Ras信号途径发挥作用。
关键词： microRNA-Let-7a NSCLC 增殖 侵袭 K-RAS -
K-Ras与B-Raf在前列腺癌组织表达及其与预后的关系
目的 研究K-Ras和B-Raf蛋白表达与前列腺癌发生及预后的关系.方法 应用免疫组织化学方法(SP法)检测74例前列腺癌和39例前列腺增生组织K-Ras和B-Raf蛋白表达.74例前列腺癌中高中分化23例,低分化51例；未浸润转移(A+B)期40例,浸润转移(C+D)期34例.结果 K-Ras在前列腺癌组织的表达(79.73％,49/74)明显高于前列腺增生(23.08％,9/39),x2=19.025,P＜0.01.在高中分化与低分化组的表达分别为(65.22％,15/23)与(66.67％,34/51),x2=0.15,P＞0.05,在(A+B)期与(C+D)期表达分别为(60.00％,24/40)与(73.53％,25/34),x2=1.504,P＞0.05；B-Raf在前列腺癌表达(64.86％,48/74)明显高于前列腺增生组织(10.26％,4/39),x2=30.659,P＜0.05.在高中分化与低分化表达分别为(43.48％％,10/23)与(74.51％,38/51),x2=6.698,P＜0.05,在(A+B)期与(C+D)期表达分别为(42.50％,17/40)与(91.18％,31/34),x2=19.107,P＜0.05.K-Ras与B-Raf蛋白表达呈正相关,x2 =0.272,P＜0.05.结论 K-Ras与B-Raf蛋白过表达与前列腺癌的发生有关,B-Raf蛋白高表达预示着前列腺癌的预后较差.
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多基因寡核苷酸芯片在胰腺癌及胰腺良性病变标本检测中的应用
目的 建立k-ras、p16、DPC4、p53基因寡核苷酸芯片对胰腺癌基因突变/缺失的检测系统并评估胰腺癌组织及胰腺良性疾病标本中多基因突变/缺失在临床检测中的应用.方法 采用双重或单独不对称PCR扩增16例胰腺癌组织及8例胰腺良性疾病标本中的目的 DNA.扩增产物加杂交液后与芯片进行杂交、清洗、扫描.结果 16例胰腺癌组织中12例可见k-ras突变,p16、DPC4、p53基因改变分别是7例.14例标本存在至少1个基因改变,其中5例标本存在1个基因改变,2例标本同时2个基因改变,4例标本存在同时3个基因改变,3例标本存在同时4个基因改变.8例胰腺良性疾病中只有3例显示k-ras、p16、p53、DPC4突变.结论 多基因芯片系统具有高度的灵敏性和准确性、快速简便、自动化程度高等优点,可同时检测胰腺癌k-ras、p16、DPC4和p53多个热点突变基因,可以高效地应用于胰腺癌基因突变的研究.
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PKC－a、K－Ras蛋白在结直肠癌中的表达及意义
目的：探讨蛋白激酶C（ PKC）－a、K－Ras蛋白在结直肠癌中的表达及意义。方法选取该院病理科收集的结直肠腺癌组织70例（腺癌组），结直肠腺瘤组织12例（腺瘤组），正常结直肠黏膜8例（正常组），采用免疫组化法检测 PKC－a、K－Ras蛋白的表达，分析 PKC－a、K－Ras蛋白表达在结直肠癌中的意义。结果 PKC－a蛋白免疫阳性物质多聚集于细胞质与部分细胞膜位置，主要表现为棕黄色颗粒沉着。腺癌组 PKC－a蛋白阳性表达率明显低于腺瘤组与正常组（ P＜0．05）。 K－Ras蛋白免疫阳性物质多聚集于细胞质。腺癌组及腺瘤组K－Ras蛋白阳性表达率明显高于正常组（ P＜0．05）。 PKC－a 蛋白阳性率与组织病理学分级、合并淋巴结转移存在相关性（ P＜0．05）；K－Ras蛋白阳性率与组织病理学分级存在相关性（ P＜0．05）。 K－Ras 蛋白表达与PKC－a蛋白表达呈负相关性（r＝－0．734，P＝0．00）。结论在结直肠癌的发生、发展过程中，PKC－a、 K－Ras蛋白发挥着重要的作用，两者的平衡紊乱会导致细胞癌变。
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PKC-a、K-Ras蛋白在结直肠癌中的表达及意义
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)-a、K-Ras蛋白在结直肠癌中的表达及意义.方法 选取该院病理科收集的结直肠腺癌组织70例(腺癌组),结直肠腺瘤组织12例(腺瘤组),正常结直肠黏膜8例(正常组),采用免疫组化法检测PKC-a、K-Ras蛋白的表达,分析PKC-a、K-Ras蛋白表达在结直肠癌中的意义.结果 PKC-a蛋白免疫阳性物质多聚集于细胞质与部分细胞膜位置,主要表现为棕黄色颗粒沉着.腺癌组PKC-a蛋白阳性表达率明显低于腺瘤组与正常组(P＜0.05).K-Ras蛋白免疫阳性物质多聚集于细胞质.腺癌组及腺瘤组K-Ras蛋白阳性表达率明显高于正常组(P＜0.05).PKC-a蛋白阳性率与组织病理学分级、合并淋巴结转移存在相关性(P＜0.05);K-Ras蛋白阳性率与组织病理学分级存在相关性(P＜0.05).K-Ras蛋白表达与PKC-a蛋白表达呈负相关性(r=-0.734,P=0.00).结论 在结直肠癌的发生、发展过程中,PKC-a、K-Ras蛋白发挥着重要的作用,两者的平衡紊乱会导致细胞癌变.
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喉鳞状细胞癌组织中Galectin-3表达与Bcl-2、Mmp-2及K-ras表达的相关性分析
目的:研究半乳糖凝集素-3(Galectin-3)在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达与临床病理特征的关系,并探讨其与Bcl-2、Mmp-2及K-ras表达的相关性.方法:采用SP免疫组织化学法检测Galectin-3、Bcl-2、Mmp-2及K-ras在32例喉鳞状细胞癌组织、32例喉正常组织及10例声带息肉组织标本中的表达,分析其与喉鳞状细胞癌病理学特征的关系,以及Galectin-3表达与Bcl-2、Mmp-2及K-ras表达的相关性.结果:喉正常组织、声带息肉组织及喉癌组织3组间Galectin-3、Bcl-2、Mmp-2及K-ras的表达比较差异有统计学意义(P＜0.05).Galectin-3和Bcl-2的表达与喉癌病理分级相关(P＜0.05),Bcl-2的表达与喉癌的临床分期、淋巴结转移密切相关(P＜0.05).Galectin-3在喉癌组织中的表达与Bcl-2、Mmp-2及K-ras在喉癌组织中的表达呈正相关(r1 =0.993,r2=0.989,r3=0.992,P＜0.05).结论:Galectin-3、Bcl-2、Mmp-2及K-ras的高表达与喉癌的发生密切相关；Galectin-3表达与Bcl-2、Mmp-2及K-ras的表达呈正相关,在喉癌的发生和发展中起重要作用,有望成为喉癌基因治疗的新的靶基因.
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let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响
目的 研究let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制.方法 将A549细胞、稳定转染let-7a重组质粒的A549-let-7a细胞及稳定转染对照质粒的A549-control细胞分别接种至BALB / c裸鼠背部皮下,观察各组细胞在裸鼠体内的生长情况,测量肿瘤体积并绘制生长曲线;30 d后处死裸鼠,取出瘤体,称重并计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织的形态学改变;Western blot及免疫组化法检测各组瘤组织中k-Ras蛋白的表达情况.结果 与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组裸鼠的瘤体生长速度明显减慢,瘤体重量显著降低(P<0.01),抑瘤率为27.51 %,A549-control细胞组差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,A549-let-7a细胞组癌细胞体积较其他两组减小,核浆比例明显缩小,核分裂相显著减少;Westernblot及免疫组化结果表明,与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组瘤组织中k-Ra.蛋白的表达明显降低(P<0.01),而A549-control细胞组中.k-Ras蛋白的表达差异无统计学意义(P > 0.05).结论 let-7a能显著抑制A549细胞在裸鼠体内的生长能力,其机制可能与下调k-Ras蛋白的表达有关.
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蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌细胞株BXPC-3移植瘤K-ras mRNA表达的影响
目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)抗胰腺癌作用靶点.方法:右腋皮下接种胰腺癌(BXPC-3)肿瘤细胞,经腹腔注射PAMD,连续用药21天,采用荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测肿瘤k-ras mRNA表达的情况.结果:PAMD高、中、低剂量均能下调BXPC-3荷瘤小鼠瘤组织中K-ras mRNA表达量,与模型对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:说明PAMD对BXPC-3荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用.
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北豆根调控K-ras与DPC4蛋白表达的研究
目的:观察北豆根提取物蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对胰腺癌(BXPC-3)荷瘤鼠肿瘤组织中k-ras与DPC4蛋白表达的调控作用,探讨其抗胰腺癌的相关机制.方法:蛋白印迹技术检测肿瘤组织中k-ras和DPC4的蛋白表达,探讨PAMD抗胰腺癌作用的相关靶点.结果:PAMD三个给药剂量组均能降低BXPC-3荷瘤鼠瘤组织中K-ras蛋白表达,增加DPC4蛋白表达,与模型对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:PAMD通过下调K-ras蛋白表达,上调DPC4蛋白表达,影响TGF-β信号传导通路,抑制BXPC-3肿瘤生长,从而达到对BXPC-3的治疗目的.
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超声内镜引导下细针穿刺活检联合基因检测对胰腺癌的诊断价值
目的:研究超声内镜引导下细针穿刺活检(EUS-FNA)联合K-ras基因检测对胰腺癌的诊断价值,为临床诊疗提供依据.方法:选取2013年11月到2015年11月我院收治的胰腺占位病变患者90例,患者入院次日行EUS-FNA,检测患者血清及活检物中K-ras基因阳性率,比较EUS-FNA单独与EUS-FNA联合K-ras基因检测对胰腺癌诊断的准确率与敏感性.结果:90例胰腺占位病变者中,经病理证实胰腺癌56例,EUS-FNA单独与EUS-FNA联合K-ras基因分别检出胰腺癌50例、53例,准确率分别为89.29％、94.64％,敏感性分别为92.59％、98.15％,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).胰腺癌患者活检物中K-ras阳性率为83.93％,明显高于血清中的41.07％(P＜0.05).结论:EUS-FNA联合K-ras基因检测可提高对胰腺癌诊断的准确率与敏感性.
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K-RasG12D基因突变体慢病毒载体的构建及其鉴定
目的:构建K-RasG12D基因突变体慢病毒载体.方法:从病人组织中提取RNA通过RT-PCR反转录获得cDNA作为K-RasG12D基因模板,通过PCR法扩增出K-RasG12D基因突变体片段.将酶切的片段克隆入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP中,构建K-RasG12D基因突变体逆转录病毒真核表达载体.将连接产物转化至感受态大肠埃希菌DH5α,挑取转化平板上的细菌克隆,在抗生素培养液中培养过夜后进行PCR鉴定.经测序正确后转染293T细胞系,利用重组质粒PCR及串联基因表达的检测等方法对目的基因的转录与表达进行分析与鉴定.结果:所构建的K-RasG12D突变体基因逆转录病毒真核表达载体经PCR鉴定和测序鉴定正确,转染293T细胞后可以观察到可检测到高强度表达的RFP荧光信号.结论:成功构建了重组真核表达载体,为下一步建立稳定转染细胞系及进一步研究K-Ras突变在癌症发病中的作用奠定了基础.
