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SFRP5 mRNA在大鼠肌肉挫伤后的表达
目的：通过real-time PCR技术检测大鼠肌肉挫伤后组织中分泌型卷曲相关蛋白5（secreted frizzled-related protein 5，SFRP5） mRNA的表达变化情况，分析其与挫伤时间及损伤类型的关系。方法90只SD大鼠，随机分为肌肉挫伤后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48 h组，切创后4、8 h组和对照组。于相应时间点取损伤处肌肉组织样本。提取组织中总RNA，反转录后用于SFRP5 mRNA表达量的检测。结果SFRP5 mRNA的表达量在损伤后很快明显下降，在20 h时降至低，然后逐渐上升，但挫伤后48 h内其表达量均低于对照组；切创组SFRP5 mRNA的表达量均明显降低，在伤后4 h，切创组低于挫伤组，而在8 h时两组的表达差异无统计学意义。结论 SFRP5 mRNA在大鼠肌肉挫伤后一段时间内呈现规律性表达，可望作为推断骨骼肌损伤时间的指标之一。
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不同温度下大鼠皮肤5种RNA指标与PMI的相关性
目的 探讨大鼠皮肤内β-肌动蛋白(β-actin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18S核糖体RNA(18S ribosomal RNA,18S rRNA)、5S核糖体RNA (5S ribosomal RNA,5S rRNA)以及微小RNA-203 (microRNA-203,miR-203)这5种RNA指标在不同温度下的表达水平与死亡时间(PMI)的相关性. 方法 将18只SD大鼠随机分为3组,处死后分别置于4 C、15℃和35℃的环境中,于死后0～120h内11个时间点取大鼠腹部皮肤.抽提皮肤总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测5种RNA表达水平.运用geNorm软件选取合适内参后,利用GraphPad软件对内参标准化的RNA指标进行回归分析. 结果 5S rRNA和miR-203作为内参合适.在4C和15℃温度组中,β-actin和GAPDH的表达量变化与PMI线性关系良好.在35℃下,β-actin和GAPDH与PMI呈现S形曲线关系.而18S rRNA 只在15℃和35℃温度组呈现一定的线性关系. 结论 皮肤组织比较适合作为提取RNA的检材,其中β-actin和GAPDH表达水平与PMI相关性良好,有望成为推测PMI的辅助指标.
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不同死因大鼠心肌内多种RNA相对表达量变化与PMI的关系
目的 观察不同死因下大鼠心肌内多种RNA相对表达量随死亡时间(PMI)的变化. 方法 建立断颈死、窒息死和失血性休克死大鼠模型,提取心肌中总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、β-肌动蛋白(β-actin)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、缺氧诱导因子-1 (hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA以及U6微核RNA(U6 small nuclear RNA,U6 snRNA)的循环阈值,观察各指标相对表达量随PMI的变化情况. 结果 U6 snRNA表达稳定,可作为内对照.在死亡早期,GAPDH、HIF-1、iNOS、TNF-α和IL-6的相对表达量在窒息组和失血性休克组比断颈组呈现不同程度的增加,而β-actin在3个组皆呈现相对表达量下降趋势.在死亡晚期,随着RNA的不断降解,相对表达量持续下降. 结论 死后各RNA相对表达量的特征性变化可为不同死因下的PMI推断提供一定的参考.
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小鼠死后脑RNA降解与死亡时间的相关性
目的 探讨小鼠死后不同时间和温度下脑组织β-actin mRNA、18S rRNA的降解规律与死亡时间的关系.方法 将24只健康成年C57BL/6小鼠随机分为2组,每组12只,断颈法处死后分别置于不同的环境温度中(4℃、37℃),恒定环境湿度为80%.分别于死后即刻和0.5、2、6、24、48h取小鼠脑组织进行总RNA提取.利用RT-PCR技术和实时荧光定量PCR技术测定每一样本中β-actin mRNA和18S rRNA的Ct值,进一步计算每个样本中18S rRNA与β-actin mRNA的含量比值,对二者含量比值与死亡时间的关系进行统计学回归分析.结果 37℃下,RNA降解速度明显快于4℃,表明温度与死后RNA的降解速度呈正相关.与β-actin mRNA的稳定性相比,18S rRNA更为稳定.结论 通过采用实时荧光定量PCR技术研究小鼠死后脑组织中β-actin mRNA和18S rRNA的降解规律,可为法医学死亡时间推断提供新的理论基础.
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16S rRNA基因测序在法医学中的研究进展
法医微生物是目前法医学研究的前沿热点之一.16S rRNA基因由于其保守性与特异性并存的特点,是法医学鉴定的理想标记.伴随着高通量测序技术的快速发展,对微生物的研究已逐步应用于环境、医疗等多个领域.在法医学领域,以16S rRNA基因测序为代表的法医微生物研究成果也逐步应用于法医学实践中的生物检材鉴定、个体识别、死亡时间推断、地域推断等方面,为案件的侦查提供线索,为传统方法作为补充和辅助.本文阐述了16S rRNA基因测序应用于法医学领域的研究方法和相关测序技术,综述了其在法医学领域的研究进展,探讨了16S rRNA在法医学中的应用价值和潜力.
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RNA在法医学领域中的应用及研究进展
随着分子生物学的发展,遗传学证据在法庭科学领域的应用也愈加广泛.DNA技术已经在个体识别和亲权鉴定中发挥着重要作用,而RNA技术正表现出越来越广泛的应用前景.本文就RNA在推断死亡时间、血痕形成时间、损伤形成时间、死亡原因及体液来源等领域的应用进行综述.
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不同功能基因mRNA推断损伤时间的指标同质性
目的 探索大鼠骨骼肌挫伤后PUM2、TAB2、Cx45、CHRNA1四个不同功能基因mRNA表达在个体间的同质性高低.方法 利用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(quantitative real-time reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测上述PUM2、TAB2、Cx45、CHRNA1 mRNA的相对表达量,计算每个损伤组不同个体间的相对表达量的变异系数(coefficient of variation,CV),并比较CV极值、累积变异度、集中趋势(X CV)和离散趋势(CV CV).结果 PUM2、TAB2 mRNA在多个时间点出现较大CV,而Cx45、CHRNA1 mRNA的CV较小.累积变异度从大到小依次为PUM2 mRNA、CHRNA1 mRNA、TAB2 mRNA和Cx45 mRNA.PUM2 mRNA相对表达量的CV CV高于TAB2、Cx45、CHRNA1 mRNA的相对表达量(P<0.05).TAB2、CHRNA1、Cx45 mRNA间相对表达量的CV CV差异无统计学意义(P>0.05).结论 参与生物过程调控作用的PUM2、CHRNA1 mRNA相对表达量个体间同质性低,其次为TAB2 mRNA,参与细胞结构组成的Cx45、CHRNA1 mRNA相对表达量个体间同质性较高,在今后筛选用于损伤时间推断的mRNA指标时应注意其功能分类.
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卡他莫拉菌对大环内酯类耐药机制的研究进展
卡他莫拉菌在儿童定植及感染率高，产酶菌株已达临床分离率的90%～99%，同时对大环内酯类耐药逐渐严重，耐药机制研究显示与23S rRNA位点发生突变有关，而ermA、ermB、ermF、mefA、mefE等常见的耐药基因尚未发现。
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基因技术在口腔内科医学的应用及发展
有关基因的深入了解对研究疾病的发病机制、预防、诊断和治疗等领域将产生巨大的影响,重大疾病基因的定位和克隆、基因诊断和基因治疗,将在不远的将来代替传统的诊治方法,为患者带来福音.基因技术的发展是口腔医学的研究的巨大推动力量.
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99mTc-HYNIC-siRNA靶向分子探针制备及其在 肺腺癌CXCR4mRNA表达的显像实验研究
目的 制备基于小干扰RNA(siRNA)的放射性分子探针,探讨其在肺腺癌模型中靶向检测趋化因子受体4(CXCR4)信使RNA(mRNA)的SPECT显像价值.方法 以双功能螯合剂肼基烟酰胺(HYNIC)进行99m Tc放射性标记,制备CXCR4 mRNA靶向的干扰组探针及无关序列的对照组探针99m Tc-HYNIC-siRNA,测定标记率 、放化纯度及体外稳定性.干扰组及对照组探针经尾静脉注射荷瘤鼠体内(各5只)120 min后进行SPECT显像.计算肿瘤与对侧肩部本底放射性摄取比值(T/NT).显像后处死小鼠,进行肿瘤 、肝 、肾 、脾 、心脏 、肺体外组织显像.结果 成功制备了99m Tc-HYNIC-siRNA探针,干扰组以及对照组的标记率分别为(55.09±2.81)％ 、(54.38±2.94)％,放化纯度均大于90％.探针在人血清以及生理盐水中120 min内可以保持稳定.注射探针后120 min SPECT显像可见干扰组肿瘤部位明显放射性浓聚,而对照组肿瘤部位放射性稀疏.干扰组与对照组T/NT比值分别为3.190±0.029、1.153±0.049,差异有显著统计学意义(t=57.68,P<0.01).体外组织显像同样显示,干扰组肿瘤放射性摄取明显高于对照组肿瘤.结论 99m Tc-HYNIC-siRNA靶向探针制备简单,在肺腺癌模型中具有靶向CXCR4 mRNA的SPECT显像性能,有望为临床肺癌及其他肿瘤活体内靶基因检测提供有效手段.
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胃癌组织中环状RNA的差异表达谱分析
目的 探讨环状RNA(circRNA)在胃癌组织及对应癌旁组织中表达谱的变化,分析两者之间的差异,筛选差异表达的circRNA,鉴定并进行功能预测.方法 通过高通量circRNA芯片技术筛选胃癌病人癌组织及对应癌旁组织中circRNA表达谱的差异,经过对原始数据进行预处理 、归一化后,筛选出差异表达的circRNA,并使用实时定量PCR(RT-qPCR)技术对其进行验证和生物信息学预测.结果 芯片检测结果显示,胃癌组织样本与其对应的癌旁组织样本之间存在1042条差异表达的circRNA,其中在肿瘤组织中高表达的有475条,低表达的有567条(变化 ≥2倍且P<0.05).对筛选所得的差异表达circRNA的亲本基因进行生物信息学分析,预测了其潜在的生物学功能.RT-qPCR结果显示在上调显著的6个circRNA中,只有hsa_circ_0001666在胃癌细胞系和组织中的表达与芯片结果一致.Arraystar自主研发的miRNA靶标预测软件显示,hsa_circ_000166可能通过结合hsa-miR-450a-1-3p、hsa-miR-661、hsa-miR-493-5p、hsa-miR-208a-5p和hsa-miR-612发挥其miRNA"海绵"的功能.结论 胃癌组织与对应癌旁组织比较,circRNA表达谱发生了显著变化,这些差异表达的circRNA可能与胃癌的发生发展密切相关.
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急性白血病病人WT1mRNA表达及临床意义
目的 研究肾母细胞瘤基因1 (WT1) mRNA在急性白血病(AL)病人骨髓中的表达及其临床意义.方法 采用RQ-PCR方法检测65例初治AL病人骨髓中WT1 mRNA的相对表达量,并随访观察其中53例病人疾病不同阶段骨髓中WT1 mRNA表达水平.结果 65例AL病人中,78.5％的病人骨髓中WT1 mRNA表达阳性,急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓系白血病(AML)病人骨髓中WT1 mRNA阳性表达率分别为62.5％和80.4％.初诊组、复发组、未缓解(NR)组病人骨髓中WT1 mRNA相对表达量显著高于完全缓解(CR)组(Z=-6.089～-5.450,P＜0.01);WT1 mRNA阳性组病人的CR率明显低于阴性组病人(P=0.012).结论 AL病人WT1 mRNA表达水平与疾病的发生发展密切相关,可作为临床疗效评估、预后判断及微小残留病检测的指标.
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lncRNA CASC2c通过ERK1/2和Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞SGC-7901增殖及迁移的影响
目的 本实验通过筛选出与胃癌相关的长链非编码RNA(lncRNA) CASC2c,探讨CASC2c对胃癌增殖、迁移的影响.方法 利用生物信息学技术筛选出与胃癌相关的lncRNA CASC2c,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法测定CASC2c在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达.采用CCK8实验、Transwell实验分别测定实验组与对照组胃癌细胞增殖和迁移的变化;采用Western blot实验检测两组p-ERK1/2和β-catenin的表达水平.结果 RT-qPCR检测结果显示,与正常相邻胃组织及正常胃细胞GSE-1相比,CASC2c在胃癌组织及胃癌细胞SGC-7901中低表达(t=3.651、2.366,P＜0.05).CCK8实验及Transwell实验检测结果显示,诱导CASC2c高表达后,与对照组相比,胃癌细胞的增殖和迁移能力均明显降低(t =18.910、2.821,P＜0.05).Western blot检测结果显示,CASC2e表达升高后能够降低p-ERK1/2和β3-catenin的表达(t=8.538、5.667,P＜0.05).结论 lncRNA CASC2c在胃癌组织及胃癌细胞中表达下调,并且通过抑制p-ERK1/2和β-catenin的表达抑制胃癌细胞增殖和迁移.
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野生型p53基因在人肝癌细胞的表达及诱导其凋亡
目的:探讨野生外源性野生型p53基因对人源性肝癌细胞系生物学的影响.方法:用p53抗体对HepG2细胞系进行免疫组化检测,以了解其是否存在p53的突变;用脂质体转染法将真核表达质粒p53-pcDNA3转染人源性肝癌细胞系HepG2,用G418筛选细胞;用生物素标记P53的cDNA探针,通过RNA原位杂交方法,检测p53-pcDNA3在细胞中的表达;用流式细胞术检测细胞的凋亡指数.结果:HepG2细胞核着色成棕褐色,说明HepG2细胞系存在p53的突变;G418筛选出了阳性转染细胞;RNA原位杂交显示肝癌细胞的胞浆染成棕黄色,证明p53在肝癌细胞内得到了表达;p53通过阻止细胞周期的进行,使肝癌细胞的增殖能力下降,细胞的生长抑制率达到53.94%,细胞的凋亡指数由转染前的10.03%上升为54.17%.结论:外源性wt-p53对肿瘤细胞的基因治疗可以降低肿瘤细胞增殖能力,有效的抑制肿瘤生长,为肿瘤治疗赢得时间.
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利用RNA干扰调控肝细胞癌的缺氧环境
肿瘤细胞被剥夺氧气所致缺氧环境,已被证实在肝细胞癌的发生发展中发挥重要作用.乏氧诱导因子(HIF)作为一类转录调控因子,可影响恒定的氧化应激应答,且被证实在新生血管生成、存活、代谢方面是一种关键的转录激活因子.细胞因子,如IL-8,也可控制内皮细胞存活和血管生成,缺氧环境下IL-8过表达可诱导肿瘤血管新生及增值.因此,调控HIF、IL-8在肿瘤血管新生及细胞凋亡方面控制肿瘤微环境,本文将对调控肿瘤缺氧环境所得结果作一概述.
