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39株对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株23S rRNA检测结果分析
目的 分析对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株23S rRNA的A2058位点的变化.方法 选择我院菌株库的结核分枝杆菌临床分离株64株,其中10株为对全部抗结核药物敏感的结核分枝杆菌临床分离株；14株为单耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株；15株为耐多药,同时耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株；15株为耐多药,同时对克拉霉素敏感的结核分枝杆菌临床分离株；10株为广泛耐药菌株,同时对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株；此外,还有结核分枝杆菌标准株H37Rv 1株.对结核分枝杆菌23S rRNA行PCR检测和测序.结果 经检测,H37Rv标准株没有A2058突变,只有1株广泛耐药临床分离株检测有A2058A-G的突变,其他临床分离株均没有突变,在耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株中占2.56％(1/39),在广泛耐药结核分枝杆菌临床分离株中占1/10.结论 结核分枝杆菌临床分离株对克拉霉素耐药的机制中,A2058突变可能不是产生对克拉霉素耐药的主要机制.结核分枝杆菌产生对克拉霉素耐药的机制有待进一步研究.
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我国Q热立克次体菌株23S rRNA基因插入顺序的分析
目的 对我国伯氏考克斯体(Cb)分离株的23S rRNA基因插入片段(23S IVS)作核酸序列分析.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增7株Cb中国分离株和2株外国参考株的23S IVS,用双脱氧核苷酸法对扩增产物进行测序.结果 重庆,四川,内蒙分离株以及Henzerling和Grita等6株的IVS序列均相同,YS-8,YS-9和YH-11等云南分离株的IVS与前6株的比较仅少一个7个碱基的重复序列.结论 Cb 23S IVS为高度保守基因片段,与高度异质性的钩端螺旋体的同源性基因片段不同;云南株和其它6株的IVS差别与Cb分离株的地理分布的不同有关,云南分离株可能为一亚种.
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大环内酯类不敏感卡他莫拉菌的分子流行病学特点及耐药机制
目的 研究大环内酯类不敏感卡他莫拉菌的分子流行病学特点及耐药机制.方法 从2岁以下健康婴幼儿鼻咽部共分离出383株卡他莫拉菌,利用Etest法测定383株卡他莫拉菌对大环内酯类的低抑菌浓度( MIC)；采用头孢硝噻吩色原法测定β内酰胺酶的产生情况；利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株分型；通过聚合酶链反应(PCR)及序列分析对大环内酯类耐药机制进行研究；采用X2检验对6个城市(北京、上海、济南、南京、武汉、东莞)卡他莫拉菌对抗菌药物的不敏感率进行分析比较.结果 按照美国临床和实验室标准化协会( CLSI)判定折点,383株卡他莫拉菌对红霉素和阿奇霉素的不敏感率分别为40％和23％；按照药物代谢动力学/药物效应动力学(PK/PD)判定折点,其对红霉素和阿奇霉素的不敏感率分别为59％和60％.不同城市间卡他莫拉菌对大环内酯类的不敏感率存在显著差别,相对靠北部城市如北京和济南,其不敏感率明显高于相对靠南部城市(P＜0.05).在383株卡他莫拉菌中,有92％( 353/383)的菌株β内酰胺酶阳性；用PFGE方法将选取的37株高耐大环内酯类(MIC ＞256 mg/L)卡他莫拉菌分为14个型,其中有43％ (16/37)的菌株被认为与A型相关.但未发现ermA、ermB、mefA及mefE等耐药基因.在23S rRNA中,A2982T、A2796T及A2983T等突变位点与大环内酯类耐药可能有关.其中A2982T和A2796T突变可能主要介导高水平耐药,A2983T突变可能介导低水平耐药.结论 本研究发现大量大环内酯类不敏感的卡他莫拉菌；其耐药机制可能与23S rRNA位点发生突变有关,且突变位点与大环内酯类的MIC值存在一定关系.
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肺炎支原体对大环内酯类抗生素耐药性及耐药机制研究
目的 了解肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)对大环内酯类抗生素的耐药情况及耐药机制.方法 对370份咽拭子标本进行MP分离培养,应用套式PCR扩增MP种特异16S核蛋白体RNA(16SrRNA)基因对临床分离株进行分子鉴定;通过药物敏感实验测定MP分离株对大环内酯类药物的MIC并筛选出耐药株;设计套式PCR扩增红霉素作用靶位23S核蛋白体RNA(23SrRNA)基因,扩增产物进行全自动DNA测序,测得序列与NCBI已登录的MP标准株M129(登录号X68422)23SrRNA基因作比对.结果 370份临床标本中分离MP 50株,分离阳性率为13.5%.50株中敏感株4株,耐药株46株(占92%).耐药菌株的红霉素、阿奇霉素、交沙霉素MIC值均升高.4株敏感株和肺炎支原体国际标准株FH的23SrRNA基因序列与基因库的MP基因序列相同,46株耐药株的23SrRNA基因发生点突变,41株突变位点在23SrRNA V区中心环的2063位,其中40株发生了A→G的点突变,1株发生了A→C的点突变;另5株突变位点在2064位,A→G.结论 MP对大环内酯类抗生素耐药率高,耐药性的分子基础是23SrRNA基因的点突变,其中2063位点突变占主导地位.23SrRNA基因发生点突变的肺炎支原体对红霉素、阿奇霉素及交沙霉素的MIC值均升高.
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解脲脲原体23SrRNA位点突变与大环内酯类药物耐药的关系
目的 探讨解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)对大环内酯类药物的耐药机制.方法 临床分离的20株对大环内酯药物不同耐药表型的Uu,其中6株为敏感株,采用PCR、DNA测序方法检测其23SrRNA基因序列,与对大环内酯类药物敏感的标准菌株ATCC 27618及基因库中的标准菌株基因序列对比分析查找突变位点,并分析突变位点与耐药表型的关系.结果 Uu菌株23SrRNA突变位点与其对大环内酯药物耐药表型对照分析结果表明,5株耐药表型为岁红霉素(R)和阿奇霉素(R)的菌株中均存在C2243N(TorC)变异,其中1株伴有A2149C,A2181T;9株耐药表型为罗红霉素(R)和阿齐霉素(I)的Uu菌株和6株表型为罗红霉素(S)和阿奇霉素(S)的Uu菌株中均存在A2149C,A2181T的变异.结论 初步判断Uu 23SrRNA C2243N(T或C)变异可能导致其对罗红霉素、阿奇霉素产生耐药,具体的相关性尚需大样本深入研究.
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应用巢式聚合酶链反应和测序检测肺炎支原体23S rRNA中点突变
目的 建立快速检测肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)耐药性的实验方法并应用于临床以了解MP耐药现状.方法 应用巢式PCR直接检测咽拭子标本MP-23S rRNA基因并对扩增产物进行电泳检测或DNA测序分析;通过MP培养及体外药物敏感性试验测定临床分离株的红霉素小抑菌浓度,以验证23S rRNA基因检测结果的可靠性.结果 200例临床标本经MP-IgM抗体、咽拭子MP种特异性16S rRNA基因巢式PCR扩增和MP分离培养测定证实为MP 64例.应用巢式PCR技术扩增MP-23S rRNA基因,并对扩增产物进行测序,将基因序列与基因库中MP标准株基因序列进行比较,与标准株序列相同的共计26例,其余38例存在23S rRNA点突变:35例在2063位点发生了A到G的点突变,1例在2063位点有A到C的点突变,2例在2064位点有A到G的点突变;耐药率为59.4%.MP耐药基因检测方法灵敏度达102 ccu/ml,MP培养及药物敏感性试验证实23S rRNA基因检测结果可靠.结论 建立的MP耐药基因检测方法能直接检测临床标本中的MP耐药基因.59%的受检标本23S rRNA基因发生点突变.
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拟人参皂苷F11在大鼠体内的药物代谢研究
目的探讨拟人参皂苷F11在大鼠体内的药物代谢产物及其过程.方法 ip拟人参皂苷F11后,应用TLC分析排泄物中的代谢产物,并利用制备薄层分离制备代谢产物,通过波谱解析(MS,1HNMR,13CNMR,1H-1H COSY)确定其结构.结果从粪便中分离鉴定了3种代谢产物,分别为拟人参皂苷RT5,ocotillol和1个新的代谢产物F-3-1,并确定其结构为6-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1-2)-β-D-吡喃葡糖基-(20S,23S,24R)-达玛-20(24)-环氧-3β,6α,12β,23,25-五醇(6-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1-2)-β-D-glucopyranosyl-(20S,23S,24R)-dammar-20(24)-epoxy-3-β,6α,12β,23,25-pentanol).但在尿液和胆汁中并未发现任何代谢产物.结论拟人参皂苷F11不被肝脏代谢,但胆汁排泄物可在肠道被代谢为水解和氧化产物.
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肺炎支原体的耐药现状
肺炎支原体(MP)是儿童和青少年呼吸道感染的重要病原体,大环内酯类抗生素是治疗儿童或青少年MP感染的首选药物,然而,近年来世界范围内出现了MP对大环内酯类抗生素的耐药现象,尤其是亚洲、欧洲和美国.23S rRNA结构域Ⅴ区的点突变是引起MP耐药的主要机制.
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卡他莫拉菌对大环内酯类耐药机制的研究进展
卡他莫拉菌在儿童定植及感染率高，产酶菌株已达临床分离率的90%～99%，同时对大环内酯类耐药逐渐严重，耐药机制研究显示与23S rRNA位点发生突变有关，而ermA、ermB、ermF、mefA、mefE等常见的耐药基因尚未发现。
