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RNA干扰抑制CDCA5基因表达对乳腺癌细胞增殖的影响及机制研究
目的 本实验探讨靶向沉默CDCA5基因的表达对人乳腺癌细胞增殖的影响及其主要机制.方法 采用Western blot检测乳腺癌组织、癌旁正常组织和人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-435s细胞中CDCA5蛋白的表达.针对CDCA5基因的siRNA,设阴性对照组siRNA-NC及空白对照组Blank.PCR检测各组对CDCA5基因的沉默效果.MTT法检测siRNA、siRNA-NC和Blank各组细胞增殖能力,流式细胞仪分别检测3组细胞周期的变化.Western blot用于分析Plkl、SA2和pSA2蛋白表达情况.结果 CDCA5在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织.人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s中CDCA5蛋白的表达明显高于MCF-7和MDA-MB-231细胞系.siRNA在各组中有强的基因沉默效果,与siRNA-NC和Blank组相比,siRNA组细胞增殖能力明显降低(P＜0.05),处于细胞周期G2/M期的细胞数量明显增多(P＜0.05).沉默CDCA5基因后Plkl和pSA2蛋白表达明显降低.结论 沉默CDCA5基因可有效抑制乳腺癌细胞增殖,这可能与下调CDCA5/Plkl/SA2信号通路从而使细胞周期被阻滞在G2/M期有关.
关键词： 乳腺癌 细胞分裂周期相关蛋白5 RNA干扰 -
Fn14-shRNA慢病毒载体的制备
目的 构建Fn14-shRNA慢病毒载体,以进一步进行动物实验,研究Fn14在骨肉瘤中的表达和作用.方法 使用RNA干扰技术,构建Fn14干扰载体、病毒包装、感染细胞,并进行鉴定.结果 Fn14-shRNA干扰质粒单酶切验证阳性,测序结果与设计完全一致,干扰组Fn14在稳转细胞株中表达下调.结论 成功构建了Fn14-shRNA慢病毒载体,为进一步从分子水平探讨Fn14在骨肉瘤中的生物学作用奠定了基础.
关键词： 骨肉瘤 细胞表面受体成纤维细胞生长因子诱导14 RNA干扰 慢病毒 -
人急性单核细胞白血病相关抗原22 RNA干扰序列的筛选及鉴定
目的 筛选获得急性单核细胞白血病相关抗原22(MLAA-22)佳RNA干扰序列,为后期MLAA-22功能研究奠定基础.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆MLAA-22蛋白质编码区序列(CDS),将测序正确的MLAA-22 CDS插入pEGFP-N1-3FLAG载体,构建真核pEGFP-N1-3FLAG表达载体,同时构建4个MLAA-22靶向RNA干扰载体,共转染293T细胞后通过细胞荧光强度分析及蛋白印迹法筛选佳MLAA-22 RNA干扰序列.结果成功构建了MLAA-22真核pEGFP-N1-3FLAG表达载体,同时构建了4个RNA干扰载体,共转染293T细胞后筛选获得KD2为佳干扰序列.结论 KD2是靶向MLAA-22抗原基因的佳RNA干扰序列.
关键词： 白血病 单核细胞 急性 RNA干扰 急性单核细胞白血病相关抗原22 -
靶向沉默同源盒A10基因对白血病NB4细胞的影响
目的 探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(shRNA)靶向沉默同源盒A10(HOXA10)基因对白血病NB4细胞增殖、凋亡和耐药的影响.方法 将NB4细胞分为干扰(lenti-shHOXA10)组、阴性对照组和未处理组,用慢病毒感染NB4细胞5d后进行相关实验.运用流式细胞仪测定慢病毒对NB4细胞的感染效率.实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)测定慢病毒干扰载体对HOXA 10基因的沉默作用;MTF法检测细胞的增殖抑制情况.流式细胞术检测3组细胞凋亡率的变化,Western blot方法测定干扰HOXA10基因对多药耐药1(MDR-1)蛋白的影响.结果 慢病毒对NB4细胞的感染率达90％左右.干扰组HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平均较对照组下降,干扰组细胞抑制率和凋亡率分别为(52.12±4.02)％、(30.0±2.7)％,与阴性对照组和未处理组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示干扰HOXA 10基因的表达能降低MDR-1基因的表达水平,逆转白血病细胞耐药.结论 慢病毒载体靶向干扰HOXA10基因的表达,能有效抑制NB4细胞增殖和促进其凋亡,逆转白血病细胞耐药.HOXA10基因有望成为逆转白血病耐药的新靶点.
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Notch1基因表达对急性T淋巴细胞白血病SupT1细胞增殖、凋亡的影响及其机制
目的 探讨Notch信号通路与急性T淋巴细胞白血病发生、发展的关系.方法 利用携带Notch1特异性和非特异性shRNA的慢病毒载体包装成的病毒颗粒感染急性T淋巴细胞白血病SupT1细胞,采用CCK-8法检测细胞抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率(Annexin V+/7-AAD-和AnnexinV+/7-AAD+);采用实时荧光定量PCR法检测Notch1受体基因及下游靶基因的表达水平.结果 Notch1干扰组、空白对照组和空载体组96 h的细胞增殖抑制率分别为0.902±0.013、0、0.486±0.084,干扰组较空白对照组、空载体组升高(均P＜0.05);三组细胞早期凋亡率分别为(15.27±0.31)％、(5.57±0.25)％、(5.80±0.20)％,干扰组较空白对照组、空载体组升高(均P＜ 0.05);而各组细胞晚期凋亡率无明显变化(均P＞ 0.05).干扰组细胞中Notch1受体基因及其下游靶基因Hes1、c-myc、NF-κB在48、72、96 h的mRNA相对表达量均较空白对照组及空载体组降低(均P＜0.05).结论 特异性Notch1-shRNA可有效下调Notch1 mRNA的表达,并降低其下游靶基因的表达水平.Notch1表达下调可以抑制急性T淋巴细胞白血病SupT1细胞增殖,促进SupT1细胞的早期凋亡.
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RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系的构建
目的 利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,建立RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系.方法 设计针对RYBP基因的5条短发夹状RNA( shRNA)序列,构建RYBPshRNA慢病毒重组载体,分别包装成慢病毒颗粒,直接感染HL-60细胞,同时设空载体和阴性对照shRNA慢病毒对照组.通过观察绿色荧光蛋白表达以监测感染效率,经嘌呤霉素(终质量浓度8 μg/ml)筛选出稳定感染细胞.Western blot实验初步鉴定出蛋白水平低的RYBPshRNA组,用实时定量聚合酶链反应(PCR)进一步检测该组细胞mRNA表达水平.结果 慢病毒感染的HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功,与对照组比较,5条RYBP shRNA组细胞RYBP表达均有不同程度减低(P＜0.01),其中以shRNA2沉默效果佳,且shRNA2组的RYBP基因mRNA水平降低了95％以上(P＜0.05).结论 慢病毒介导的shRNA2能高效、稳定地沉默RYBP基因的表达,成功构建了RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系.
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siRNA对HEK293细胞WT1表达的抑制作用及对K562细胞增生的影响
目的 探讨以WT1基因为靶标治疗白血病的可行性,筛选有效抑制WT1基因表达的siRNA并观察其对K562细胞增生的影响.方法 制备特异性WT1 siRNA3条,转染HEK293细胞株,采用荧光定量RT-PCR方法 检测WT1基因mRNA表达,Western blotting法检测WT1蛋白表达;MTY法检测细胞增生的影响.结果不同位点的siRNA对WT1基因抑制作用不同.si-wt1-1对WT1mRNA抑制明显(P＜0.05),si-wt1-2、si-wt1-3对WT1mRNA无抑制(P＞0.05).100 nmol/L si-wt1-1能使WT1mRNA的表达在转染后24h和48 h分别降低至对照组的(42.5±1.0)%(P＜0.05)、(25.3±1.5)%(P＜0.01),但72 h恢复至对照组水平.siRNA作用无明显剂量依赖性,不同浓度si-wt1-1对WT1mRNA抑制作用的比较差异无统计学意义(P＞0.05).Western blotting法榆测证实转染siRNA 48、72、96 h后,si-wt1-1对WT1蛋白抑制明显(P＜0.05),且96 h抑制作用强;si-wt1-2、si-wt1-3无明显抑制作用(P＞0.05).si-wt1-1对K562细胞增生有抑制作用,si-wt1-1处理组与阴性对照组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 siRNA可有效抑制HEK293细胞WT1基因的表达,且mRNA水平抑制效果优于蛋白水平.si-wt1-1可有效抑制K562细胞的增生.
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靶向人类WT1基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
目的 制备编码人类WT1基因的shRNA(short hairpin RNA)质粒表达载体.方法 设计合成WT1shRNA的DNA模板单链,在两端加入限制性内切酶BamH Ⅰ、Hind Ⅲ的酶切位点,退火形成双链,质粒pGenesil-1的BamH Ⅰ+HindⅢ双酶切线性化,稀释退火片段与线性化Pgenesil-1质粒表达载体经T4DNA连接酶连接,酶切、测序鉴定.结果 经酶切、测序鉴定,pWT1shRNA构建成功.结论 成功构建了针对人类WT1基因的shRNA质粒表达载体,为探讨WT1的生物学功能及白血病的基因治疗奠定了基础.
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下调PRPS2基因表达对HCT116细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨下调磷酸核糖焦磷酸合成酶亚基Ⅱ(PRPS2)基因表达对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响.方法:构建PRPS2基因干扰载体sh-PRPS2,正常对照组不转染载体,阴性对照组转染阴性对照载体sh-PRPS2-0,3个实验组分别转染干扰载体sh-PRPS2-1、sh-PRPS2-2和sh-PRPS2-3,经DNA测序鉴定后转染人结肠癌HCT116细胞,分别采用RT-PCR和Western blot法检测各载体转染后细胞PRPS2 mRNA和蛋白水平的表达变化,CCK8试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化.结果:经DNA测序证实成功构建sh-PRPS2干扰载体3个,分别为sh-PRPS2-1、sh-PRPS2-2和sh-PRPS2-3.将上述3个干扰载体分别转染HCT116细胞72 h后,RT-PCR结果显示,PRPS2 mRNA相对表达量依次为0.61±0.03、0.89±0.02、0.27±0.05,与对照组比较,均显著下降(P＜0.05).Western blot结果显示,PRPS2蛋白相对表达量依次为0.37±0.06、0.84±0.05、0.30±0.04,与对照组比较均显著下降(P＜0.05).转染sh-PRPS2-3载体72 h后细胞增殖抑制率达19.8％±2.4％,凋亡率上升至68.4％±4.6％,G0/G1期细胞比例上升为12.9％±3.8％.结论:PRPS2的低表达可以有效抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,细胞阻滞于G0/G1期,本研究为肿瘤的靶向治疗提供了研究基础.
关键词： 磷酸核糖焦磷酸合成酶亚基Ⅱ RNA干扰 HCT116细胞 结肠癌 -
慢病毒介异的孕烷X受体sh-RNA稳定干扰HepG2细胞株的构建
目的：构建慢病毒介导的人孕烷X受体(hPXR) sh-RNA干扰载体及筛选肝癌细胞稳定干扰株。方法：针对hPXR的特异性序列，设计干扰序列，构建重组克隆。转染HEK293T细胞，筛选有效干扰片段。HEK293T包装干扰病毒并转染肝癌HepG2细胞株，200 mmol/L嘌呤霉素筛选2-3周，Western blot检测PXR表达。hPXR激动剂利福平处理PXR sh-RNA稳定干扰肝癌HepG2细胞株和Scramble对照细胞，抽提RNA并鉴定hPXR靶基因细胞色素P4503A4(CYP3A4)的表达。结果：筛选出了PXR有效干扰片段，并获得了PXR信号通路有效敲低的HepG2慢病毒稳定干扰株。结论：成功构建了慢病毒介导的PXR sh-RNA稳定干扰HepG2细胞株。
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SET基因shRNA慢病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定
目的:构建SET基因shRNA慢病毒表达载体,为研究SET在三氯乙烯毒性机制中的作用提供技术支持.方法:通过NCBI检索SET序列,设计合成5对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒共转染到293T细胞,收集病毒上清,转导入L-02肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到SET缺陷型细胞,后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果.结果:PCR和测序结果证明双链shRNA正确插入慢病毒载体pLVX-shRNA1vector,共转染293T细胞得到高滴度病毒,转导L-02细胞筛选出SET基因缺陷型细胞.结论:利用慢病毒介导的RNAi技术成功构建了SET基因缺陷型细胞.
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RNA干扰HIF-1α对低氧状态下食管鳞癌Eca109细胞放射敏感性的影响
目的:观察低氧状态下食管鳞癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达,探讨HIF-1α对Eca109细胞放射敏感性的影响及其可能的分子机制.方法:以常氧组为对照.氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)模拟肿瘤低氧微环境,用RT-PCR检测体外低氧状态下Eca109细胞中HIF-1α和EGFR mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HIF-1α和EGFR蛋白表达水平.Western blot检测RNAi沉默HIF-1α对EGFR蛋白表达的影响.采用流式细胞术检测HIF-1α沉默后,Eca109细胞经放射线照射后的凋亡情况,评价其放射敏感性的变化.结果:与常氧组比较,低氧状态下,Eca109细胞中HIF-1αmRNA表达无明显变化(P＞0.05),HIF-1α蛋白表达增加.EGFR mRNA表达明显升高(P＜0.05),EGFR蛋白表达也相应增加.与未转染组和对照组比较,siRNA转染Eca109细胞可有效沉默HIF-1α蛋白在低氧状态下的表达(P＜0.05),EGFR蛋白的表达水平也明显下调(P＜0.05).Eca109细胞在低氧状态下放射敏感性较常氧下明显降低(P＜0.05).RNAi沉默HIF-1α可部分逆转低氧造成的Eca109细胞的放射耐受.结论:低氧可上调食管鳞癌Eca109细胞HIF-1α蛋白水平；HIF-1α增加Eca109细胞在低氧状态下的放射抗性,可能与HIF-1α上调EGFR mRNA及蛋白表达有关,有效抑制HIF-1α可增加Eca109细胞的放射敏感性.
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CYP2E1基因RNA干扰载体的构建与表达
目的:构建CYP2E1基因shRNA慢病毒表达载体,为研究CYP2E1在药物代谢和环境污染物代谢中的作用提供技术支持.方法:通过NCBI检索CYP2E1序列,设计合成3对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体PLKO.1-puro,将重组质粒转化到感受态JM107中.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒和包膜蛋白质粒共转染到293FT细胞,收集病毒上清,转导肝细胞L02,利用嘌呤霉素筛选得到CYP2E1缺陷型细胞,后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果.结果:PCR和测序结果证明双链shRNA已经正确插入慢病毒载体PLKO.1-puro,共转染293FT细胞得到高滴度病毒,转导L02细胞筛选出CYP2E1 基因沉默细胞,荧光定量PCR检测shRNA3的高抑制效率为86.9％,Western blot鉴定shRNA3基本无CYP2E1表达.结论:利用慢病毒介导RNAi技术成功构建了CYP2E1基因沉默细胞.
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CtBP1基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果的初步鉴定
目的:构建C-末端结合蛋白-1(CtBP1)基因RNA干扰(RNAi)的真核表达载体,转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+),初步鉴定其干扰效果.方法:以人CtBP1基因为靶基因,以pGenesil-1质粒为载体,根据GenBank数据库提供的CtBP1基因核苷酸序列,选择设计两条siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)基因、卡那霉素(Kanr)抗性基因及U6启动子的真核表达载体pGenesil-1中,构建针对CtBP1基因的shRNA真核表达载体,转化大肠杆菌DHSa菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.确认载体构建成功后,用脂质体LipofectamineTM 2000将重组质粒瞬时转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+),在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计数转染细胞数,计算转染效率,RT-PCR法检测载体对CtBP1基因的表达抑制效果.结果:构建针对CtBP1基因的pGenesil-1-CtBP1小发夹RNA(pGenesil-1-CtBP1-shRNA),经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到B-MD-C1(ADR+/+)细胞表达绿色荧光蛋白(EGFP),证实重组质粒己转染人细胞,转染效率达到60%～70%;RT-PCR结果显示B-MD-C1(ADR+/+)细胞中CtBP1基因被特异抑制,基因表达抑制率达40%以上,与转染试剂对照组、空白对照组和阴性序列对照组间的差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论:成功构建CtBP1基因的shRNA表达载体,可以有效抑制B-MD-C1(ADR+/+)细胞上CtBP1基因表达.为进一步研究CtBP1基因功能进而逆转肿瘤的多药耐药奠定基础.
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STAT3乃基因RNAi诱导肝癌细胞凋亡及对STAT3信号转导相关基因表达的影响
背景与目的:探讨STAT3基因RNAi对人肝癌细胞SMMC7721凋亡的影响,及对STAT3信号转导相关基因表达的影响,为STAT3信号通路的肿瘤靶向治疗提供理论依据.材料与方法:采用RNAi技术特异性沉默SMMC7721细胞中STAT3的表达,通过Westem blot技术检测经RNAi作用后SMMC7721细胞STAT3蛋白表达水平的变化.采用透射电镜和流式细胞术检测经RNAi沉默SMMC7721细胞中STAT3的表达后,对细胞凋亡的影响.通过半定量RT-PCR法检测细胞凋亡相关因子bcl-2和survivin基因表达的变化. 结果:STAT3基因RNAi可有效沉默SMMC7721细胞中STAT3的表达(P<0.05).STAT3的表达被RNAi沉默后,SMMC7721细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.01).且SMMC7721细胞bel-2和survivin mRNA的表达水平均受到明显抑制,与对照组间的差异均具有统计学意义(P<0.01). 结论:STAT3基因RNAi可有效沉默SMMC7721细胞中STAT3的表达,诱导SMMC7721细胞凋亡,下调SMMC7721细胞bcl-2、survivin mRNA的表达.
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RNA干扰抑制胃癌SGC-7901细胞中Livin基因的表达
背景与目的:利用RNA干扰(RNAi)技术在体外抑制Livin基因表达,探讨RNA干扰用于胃癌治疗的可行性.材料与方法:设计靶向Uvin基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),构建重组表达质粒pTZU6+ 1-siRNA-Livin,并导入SGC-7901细胞,在体外诱导RNA干扰.并分别采用流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和免疫化学技术检测Livin基因表达,末端标记细胞凋亡法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果:重组质粒pTZU6+1-siRNA-Livin导入SGC-7901细胞株后,细胞s期比例由对照组的42.78%降低至19.15%(P<0.05),G1G0期细胞由对照组的52.68%增至72.98%(P<0.05);pL1-siRNA质粒处理组细胞的Livin mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.05),并出现明显的诱导细胞凋亡.结论:RNA干扰可抑制SGG-7901细胞靶基因Livin的表达及细胞增殖,并诱导细胞凋亡,为胃癌的基因治疗提供了新思路.
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RNA干扰诱导DNA修复基因hMGMT表达沉寂的研究
背景与目的:构建能特异诱导人DNA修复基因hMGMT表达沉寂的RNA干扰载体.材料与方法:通过两步法聚合酶链反应(Polymerasing chain reaction,PCR)扩增hMGMT特异RNA干扰表达盒,连入质粒载体构建RNA干扰质粒pU6-MGMTi,与pGEFP-C1共转染人支气管上皮16HBE(Human bronchial epithelial)细胞,G418筛选后,采用RT-PCR和Western Blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达抑制情况.结果:成功构建hMGMT特异RNA干扰质粒pU6-MGMTi,转染16HBE细胞的mRNA和蛋白表达受到显著的抑制.结论:应用RNA干扰表达盒以及共转染技术,构建MGMT基因表达沉寂的细胞株,为进一步阐明MGMT基因的功能创造条件.
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RNA干扰抑制乙型肝炎病毒研究进展
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(dsRNA)所介导的细胞内同源基因转录后沉默现象,是生物体在进化过程中普遍存在的一种基因调控机制.在抗肝炎病毒领域,RNAi技术可以抑制病毒复制,阻断病毒蛋白表达,为抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗提供了新的策略.本文对RNAi在抑制HBV复制表达中的应用、存在的问题及发展前景等作简要综述.
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Survivin shRNA干扰对食管癌细胞CDK4 mRNA表达的影响
目的：以shRNA抑制食管癌ECA109细胞内Survivin的表达，探讨Survivin shRNA干扰对CDK4基因表达的影响。方法：ECA109细胞分为Survivin shRNA干扰组、质粒对照组和空白细胞组，采用RNA干扰技术沉默ECA109细胞株中Survivin基因的表达，RT-PCR检测各组细胞中Survivin和CDK4 mRNA的表达，Western blot方法检测各组细胞Survivin蛋白的表达，流式细胞术检测细胞周期的改变。结果：与质粒对照组及空白细胞组比较，Survivin shRNA干扰组细胞Survivin mRNA及蛋白表达下调，CDK4 mRNA表达明显降低，差异均具有统计学意义(P均<0.05)；Survivin shRNA干扰组G2期延长，G2期细胞比例增加，细胞G2期增殖阻滞。结论：Survivin基因可能在转录水平对CDK4具有调控作用，其具体调控机制有待进一步研究。
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RNAi对波动性葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞糖原合成酶激酶-3β、β-联蛋白作用的研究
目的 构建糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)特异的RNAi腺病毒表达载体,感染原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),观察其对波动性浓度葡萄糖溶液诱导的HUVEC Wnt信号通路中GSK-3β、β-联蛋白(β-catenin)的影响.方法 设计合成针对GSK-3βmRNA不同位点的短发荚RNA(short hairpin RNA,shRNA)编码序列,重组RNAi腺病毒表达载体.实验分为3组,空白对照组、阴性对照组、实验组.空白对照组使用波动性浓度葡萄糖溶液(5.5 mmol/L和30.5 mmol/L两种浓度的葡萄糖溶液每日交替培养,模拟血液中葡萄糖浓度的波动)培养HUVEC;阴性对照组使用波动性浓度葡萄糖溶液培养HUVEC,并使用无携带GSK-3β 基因的腺病毒感染培养的HUVEC;实验组使用波动性浓度葡萄糖溶液培养HUVEC,并GSK-3β 特异的RNAi腺病毒感染培养的HUVEC.Western印迹法波动性浓度葡萄糖溶液干预前及干预后72小时3组的GSK-3β、β-联蛋白水平.结果 波动性浓度葡萄糖溶液干预72小时后,实验组的GSK-3β 表达水平(0.1068±0.0034)较空白对照组、阴性对照组低,差异有统计学意义(F=10886.388,P=0.000);实验组的 β-联蛋白水平表达水平(0.6653±0.0167)较空白对照组、阴性对照组低,差异有统计学意义(F=315.96,P=0.000).结论 构建的RNAi腺病毒感染HUVEC后可以抑制高糖诱发的GSK-3β 蛋白表达、增加细胞内 β-联蛋白的蛋白水平.
