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JNK 信号通路受抑制的人白血病 K562／ADR 细胞对尼洛替尼敏感性
目的：观察 JNK 信号通路受到抑制的人白血病 K562／ADR 细胞对尼洛替尼的敏感性。方法培养人白血病敏感细胞株 K562和耐阿霉素细胞株 K562／ADR，采用 CCK-8法测算尼洛替尼对细胞的半抑制浓度（IC50）及耐药指数。用4μg／mL 的 SP600125抑制 K562／ADR 细胞 JNK 信号通路后进行尼洛替尼处理，CCK-8法测算细胞尼洛替尼 IC50。将 K562／ADR 细胞分为对照组、尼洛替尼组、联合组，对照组未处理，尼洛替尼组采用20μmol／L 尼洛替尼处理，联合组先用4μg／mL SP600125预处理2 h，再用20μmol／L 尼洛替尼处理，荧光定量 PCR 检测各组细胞内 MDR1基因，Western blot 法检测各组细胞内 P-糖蛋白（P-gp）。结果 K562／ADR 细胞对尼洛替尼的耐药指数为 K562细胞的19．58倍。抑制 JNK 信号通路后，尼洛替尼对 K562／ADR 细胞的 IC50由（12．53±0．11）μmol／L 下降到（6．77±0．24）μmol／L（P ＜0．05）。对照组、尼洛替尼组、联合组 K562／ADR 细胞 MDR1 mRNA 相对表达量分别为0．9678±0．0062、0．5136±0．0124、0．2671±0．0087，P-gp 相对表达量分别为1．0074±0．0041、0．5961±0．0136、0．3637±0．0069，两两组间比较，P 均＜0．05。结论 JNK 信号通路受抑制的人白血病 K562／ADR 细胞对尼洛替尼敏感性增加，这与抑制 JNK 信号通路可降低 K562／ADR 细胞中 MDR1基因的表达有关。
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靶向沉默同源盒A10基因对白血病NB4细胞的影响
目的 探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(shRNA)靶向沉默同源盒A10(HOXA10)基因对白血病NB4细胞增殖、凋亡和耐药的影响.方法 将NB4细胞分为干扰(lenti-shHOXA10)组、阴性对照组和未处理组,用慢病毒感染NB4细胞5d后进行相关实验.运用流式细胞仪测定慢病毒对NB4细胞的感染效率.实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)测定慢病毒干扰载体对HOXA 10基因的沉默作用;MTF法检测细胞的增殖抑制情况.流式细胞术检测3组细胞凋亡率的变化,Western blot方法测定干扰HOXA10基因对多药耐药1(MDR-1)蛋白的影响.结果 慢病毒对NB4细胞的感染率达90％左右.干扰组HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平均较对照组下降,干扰组细胞抑制率和凋亡率分别为(52.12±4.02)％、(30.0±2.7)％,与阴性对照组和未处理组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示干扰HOXA 10基因的表达能降低MDR-1基因的表达水平,逆转白血病细胞耐药.结论 慢病毒载体靶向干扰HOXA10基因的表达,能有效抑制NB4细胞增殖和促进其凋亡,逆转白血病细胞耐药.HOXA10基因有望成为逆转白血病耐药的新靶点.
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Fas,P-糖蛋白和多药耐药1基因在急性白血病的表达及相关性的临床研究
目的探讨Fas、P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药1(mdr1)基因在急性白血病(AL)的表达及三者在多药耐药(MDR)中相关性的临床研究.方法对59例初发AL患者,应用流式细胞仪和半定量RT-PCR法分别检测治疗前后Fas和P-gp及mdr1表达情况.结果Fas在不同类型AL表达有差异;Fas+与P-gp+呈显著负相关,Fas+与mdr1+呈负相关,P-gp+与mdr1+呈显著正相关;COX分析结果显示:Fas和mdr1有判断预后价值;Fas+与Fas-组、P-gp+与P-gp-组、mdr1+与mdr1-组的CR率差异均有统计学意义.结论Fas高表达可能是AL预后良好因素;P-gp,mdr1高表达为预后不良重要因素.
