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RNA干扰联合小剂量阿糖胞苷对K562细胞增殖、凋亡的影响
目的 探讨利用RNA干扰(RNAi)技术沉默同源盒(HOX) A10基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞增殖、凋亡的影响,为白血病的基因治疗提供实验依据.方法 设计合成针对HOXA10的特异性短发卡RNA寡核苷酸链,构建pGPHI/GFP/Neo - HOXA10真核表达载体并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞.RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 成功构建pGPHI/GFP/Neo - HOXA10载体,并转染K562细胞,结果显示该载体能有效降低HOXA10 mRNA表达水平,HOXA10/β-actin灰度比值(ODR)为(38.86 ±4.49)％；RNAi联合小剂量Ara-C作用于K562细胞后,细胞增殖能力明显下降,细胞增殖抑制率(IR)为(75.58 ±8.11)％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；荧光显微镜可见红色荧光凋亡细胞明显增加,凋亡率显著升高,可达(29.71±1.24)％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向HOXA10的RNAi技术联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,有望成为白血病基因治疗的新方案.
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靶向沉默同源盒A10基因对白血病NB4细胞的影响
目的 探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(shRNA)靶向沉默同源盒A10(HOXA10)基因对白血病NB4细胞增殖、凋亡和耐药的影响.方法 将NB4细胞分为干扰(lenti-shHOXA10)组、阴性对照组和未处理组,用慢病毒感染NB4细胞5d后进行相关实验.运用流式细胞仪测定慢病毒对NB4细胞的感染效率.实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)测定慢病毒干扰载体对HOXA 10基因的沉默作用;MTF法检测细胞的增殖抑制情况.流式细胞术检测3组细胞凋亡率的变化,Western blot方法测定干扰HOXA10基因对多药耐药1(MDR-1)蛋白的影响.结果 慢病毒对NB4细胞的感染率达90％左右.干扰组HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平均较对照组下降,干扰组细胞抑制率和凋亡率分别为(52.12±4.02)％、(30.0±2.7)％,与阴性对照组和未处理组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示干扰HOXA 10基因的表达能降低MDR-1基因的表达水平,逆转白血病细胞耐药.结论 慢病毒载体靶向干扰HOXA10基因的表达,能有效抑制NB4细胞增殖和促进其凋亡,逆转白血病细胞耐药.HOXA10基因有望成为逆转白血病耐药的新靶点.
