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HIF-1α在子宫内膜异位症中的研究进展
子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是育龄妇女的常见病,但其发病机制至今仍不清楚.越来越多的证据表明,低氧与EMs发生发展有密切的联系.在EMs异位组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达明显增高;HIF-1α通过调节雌激素产生、血管生成、细胞增殖和炎症等相关基因,促进EMs发展;HIF-1α是EMs有氧糖酵解过程中关键的调节因子;抑制HIF-1α的表达有助于抑制EMs的发生发展,表明HIF-1α在EMs的病理形成中的作用.本文介绍HIF-1α的研究进展,着重论述其在EMs中的作用.
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急性脑梗死患者外周血中HIF-1α的动态变化及意义
目的：观察急性脑梗死患者外周血血清低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在各时相点的表达水平。方法：选取急性脑梗死患者及健康体检者或志愿者各30例，应用酶联免疫分析(ELISA)法检测两组外周血 HIF-1α表达水平。结果：发病0.5 d、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d时，急性脑梗死患者血清HIF-1α表达水平均高于正常组，且与梗死面积之间存在一定的相关性。结论：低氧诱导因子-1α可能参与脑梗死的病理生理过程，可能与脑缺血缺氧后的神经保护作用有关。
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骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎氧化损伤及低氧诱导因子的作用
目的：通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脂质过氧化物（LPO）及低氧诱导因子-1α（HIF -1α）、低氧诱导因子-2α（HIF -2α）、血管内皮生长因子（VEGF）的影响，探讨骨灵膏及其拆方制剂抗骨关节炎（OA）软骨损伤的作用机制。方法60只雌性 SD 大鼠随机分为正常组、模型组、骨灵膏组、骨膏组、灵膏组及塞来昔布组6组，每组10只，除正常组外其余各组采用冷固法6周建立 OA 模型，造模成功后除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外，其余组分别给予骨灵膏、骨膏、灵膏及塞来昔布灌胃，给药8周后，取大鼠血清、膝关节软骨组织，采用ELISA 检测血清 SOD、MDA、LPO 的含量，免疫荧光法检测 HIF -1α、HIF -2α、VEGF 的阳性表达，FQ- RT - PCR 检测 HIF -1α、HIF -2α、VEGF mRNA 的表达。结果模型组与正常组及骨灵膏组比较能显著增加血清 MDA、LPO 的含量（P ﹤0.01），增加 SOD 的含量（P ﹤0.01）；骨灵膏组与骨膏及灵膏比较能增加 SOD 的含量（P ﹤0.01），降低 MDA、LPO 的含量（P ﹤0.01）；模型组与正常组比较能显著增加软骨 HIF -1α、HIF -2α、VEGF 的阳性率（P ﹤0.01），骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组比较能降低 HIF -1α、HIF -2α、VEGF 的阳性率（P ﹤0.01）；模型组与正常组比较能显著增加软骨 HIF -1α、HIF -2α、VEGF mRNA 的表达（P ﹤0.01），骨灵膏组与模型组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组比较能降低 HIF -1α、HIF -2α、VEGF mRNA 的表达（P ﹤0.01）。结论骨灵膏可能通过增加血清SOD 含量，降低 LPO、MDA 的含量，纠正 OA 氧代谢失衡对软骨组织的氧化损伤，抑制组织 HIF -1α、HIF -2α mRNA 的表达，从而抑制异常低氧环境 HIF -1α向 HIF -2α的转化，降低其下游靶基因VEGF mRNA 在软骨组织的表达，减轻了关节骨赘的形成，对抗 OA 软骨损伤，其作用明显优于骨膏、灵膏、塞来昔布。
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丹参对骨骼肌缺血再灌注损伤低氧诱导因子-1α mRNA表达和血液流变学的影响
目的:检测骨骼肌缺血再灌注损伤时低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)mRNA表达、红细胞聚集、变形指数和骨骼肌肿胀系数的变化,探讨丹参对骨骼肌缺血再灌注损伤氧环境和血液流变学的影响.方法:采用大鼠左侧提睾肌主滋养动脉夹闭造模,66只SD大鼠随机抽取6只作为正常组,对照组和丹参组各30只,此两组造模后分别取10、20、40、60、90 min 5个时点进行观测.取双侧提睾肌称重,计算肿胀系数.造模侧提睾肌液氮速冻,用RT-PCR检测HIF-1αmRNA表达;由腹主动脉取血1 ml计算红细胞聚集指数和变形指数,观测血液流变学的变化.结果:缺血再灌注损伤后丹参组HIF-1αmRNA的表达在各时点均弱于对照组,与正常组相比,各时点的HIF-1αmRNA表达水平差异有显著性意义.红细胞变形指数在缺血再灌注过程中各时点及组间对比差异无显著性意义.与对照组相比,丹参组红细胞聚集指数10 min时差异有显著性意义(P＜0.05),但随后呈逐渐下降趋势.而对照组红细胞聚集指数则呈波动性上升趋势.丹参组各相应时点的肿胀系数低于对照组.结论:丹参能改善骨骼肌缺血再灌注损伤时组织的缺氧状况,调整组织细胞能量缺乏状况,并能改善骨骼肌缺血再灌注损伤时红细胞聚集率,降低血黏度,促进血液循环,改善微循环,利于肿胀的消退,对缺血再灌注损伤起到积极的防治作用.
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丹参注射液对大鼠脊髓损伤后低氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子表达的影响
目的:观察丹参注射液对大鼠脊髓损伤(SCI)后低氧诱导因子(HIF)-1α和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其参与脊髓损伤修复的机制.方法:选取50只SD大鼠(SPF级)建立Allens'重力打击SCI模型(正常组除外)后,随机分为正常组、模型组、丹参治疗组、丹参加雷帕霉素组和甲泼尼龙琥珀酸钠组(每组10只).正常组常规饲养,其余实验组均按1 mL· kg-1·d-1剂量分别腹腔注射生理盐水、丹参注射液、丹参注射液(含雷帕霉素3 mg·kg-1)和尾静脉注射甲泼尼龙琥珀酸钠溶液30 g·L-1.伤后1,3,7,14 d时采用联合行为评分法(CBS)评价大鼠脊髓神经功能恢复情况.伤后14 d处死动物,采用免疫组化染色和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各实验组HIF-1α和VEGF的表达差异.结果:SCI后14 d,与正常组比较,模型组大鼠CBS评分升高,HIF-1α和VEGF表达升高(P＜0.05);与模型组比较,丹参治疗组CBS评分降低,HIF-1α和VEGF表达升高(P＜0.05);与丹参治疗组比较,丹参加雷帕霉素组CBS评分升高,而HIF-1α和VEGF表达降低(P＜0.05);上述指标在丹参治疗组和甲泼尼龙琥珀酸钠组之间的差异不具有统计学意义.结论:丹参注射液可通过调节HIF-1α和VEGF的表达从而参与脊髓的损伤修复.
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银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏低氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达的影响
目的:观察银杏叶提取物( GbE)对肝纤维大鼠肝组织低氧诱导因子1α( HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制.方法:采用40％的CCl4皮下注射(3mL·kg-1·d-1,2次/周,首剂加倍),连续6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以高、中、低剂量(200、100、50mg·kg-1·d-1)GbE灌胃干预6周,常规HE和Masson染色观察大鼠肝组织炎症和纤维化程度,RT-PCR及免疫组化法检测肝组织HIF-1α和VEGF基因的mRNA及蛋白表达.结果:模型组大鼠肝组织炎症和纤维化程度计分较正常组明显增高(P＜0.01),肝组织HIF- 1α和VEGF基因的mRNA及蛋白的表达较正常组明显增强(P＜0.05,P＜0.01),HIF-1α蛋白表达水平与肝纤维化程度、VEGF mRNA表达水平呈明显的正相关；应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织炎症和纤维化程度显著减轻( P＜0.05,P＜0.01),肝组织HIF-1α和VEGF基因的mRNA及蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:GbE下调肝纤维化大鼠肝组织HIF-1α及其下游分子VEGF的转录和表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一.
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芪棱汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠HIF-1α的影响
目的 探讨芪棱汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠HIF-1α表达的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组及芪棱汤组.采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO\Reperfusion).HE染色观察病理形态学变化.在再灌注后不同时间点采用免疫组化法检测HlF-1α表达.结果 与模型组相比,补阳还五汤组及芪棱汤组能够改善脑缺血再灌注时的病理损伤;能够促进HIF-1α阳性细胞在各时间点的表达(P＜0.05);且芪棱汤的治疗效果高于补阳还五汤(P＜0.05).结论 芪棱汤能通过促进HIF-1α表达上调达到神经保护作用,且芪棱汤优于补阳还五汤.
关键词： 局灶性缺血再灌注损伤 益气养阴活血法 低氧诱导因子-1α -
双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜组织低氧诱导因子-1α和核因子-κB表达的影响
目的 观察双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法 SD大鼠尾静脉一次性注射STZ(50 mg/kg)诱导糖尿病模型,眼底荧光血管造影确认DR模型成功.随机分为模型组、中药复方组和阳性药组,同时以正常大鼠为对照.末次给药后,检测大鼠血糖,观察视网膜病变,Western blot和RT-PCR分别检测大鼠视网膜HIF-1α和NF-κB蛋白和基因的表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠血糖显著升高,视网膜微血管增加、荧光素渗漏明显,HIF-1α、NF-κB蛋白和基因表达均升高;与模型组比较,中药复方组大鼠血糖、视网膜微血管数量下降,荧光素渗漏面积减少,HIF-1α、NF-κB蛋白和基因表达均降低.结论 双丹明目胶囊可有效抑制DR大鼠新血管生成,保护视网膜组织,其作用可能与下调视网膜HIF-1α、NF-κB的表达有关.
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疣状胃炎中医证型与胃黏膜低氧诱导因子-1α及其下游因子表达关系的探讨
目的 探讨疣状胃炎(verrucous gastritis,VG)不同中医证型患者胃黏膜组织中低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor- 1α,HIF-1α)及其下游因子血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的变化及其临床意义.方法 94例VG患者根据中医辨证分为肝胃不和组(28例)、脾胃湿热组(17例)、瘀阻胃络组(20例)和脾胃虚寒组(29例)；另选慢性轻度非活动型浅表性胃炎伴Hp感染阴性者30例作为对照组.14C同位素标记尿素呼气试验检测患者Hp感染情况,免疫组化EnVision二步法检测胃黏膜组织HIF-1α、VEGF和COX-2表达情况.结果 VG患者Hp感染阳性率为37.23％ (35/94)；脾胃湿热组(76.47％)Hp感染阳性率明显高于肝胃不和组(32.14％)、脾胃虚寒组(31.03％)和瘀阻胃络组(20.00％)(P＜0.01).不同证型组VG患者胃黏膜HIF-1α和COX-2表达均较对照组明显升高(P＜0.01,P＜0.05),其中瘀阻胃络组HIF-1α表达高,脾胃湿热组COX-2表达高.脾胃湿热组和脾胃虚寒组VEGF表达较对照组和肝胃不和组均明显升高(P ＜0.01,P＜0.05).结论 不同中医证型VG患者病灶部位黏膜HIF-1α、VEGF和COX-2表达及Hp感染均有一定变化,HIF-1α在瘀阻胃络证中表达强,VEGF、COX-2的表达及Hp感染在脾胃湿热证高,具有证型特异性.
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舒尼替尼、保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病合并糖尿病小鼠肺血管重构的影响
目的 探讨舒尼替尼、保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并糖尿病小鼠肺血管重构的影响及其是否通过调节低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)在肺组织的表达而发挥作用.方法 将40只ob/ob小鼠随机分为4组:对照组、模型组、保肺定喘汤组和舒尼替尼组,每组10只.除对照组外,各纽小鼠在自制熏烟箱内被动吸烟14周,并在第1、14天于气道内滴入脂多糖.造模结束后舒尼替尼组予苹果酸舒尼替尼胶囊30 mg/(kg·d)灌胃,保肺定喘汤组予保肺定喘汤9.3 g/(kg·d)灌胃,均干预2周.于第0、14、16周检测空腹血糖水平.肺组织HE染色,观察气道重构并测量小气道基底膜单位长度的管壁面积(WAt/Pbm),肺血管重构并测量管壁厚度与血管外径比(WT％)、管壁面积与血管总面积比(ＷA％);Masson染色观察支气管周胶原沉积并测量小气道基底膜单位长度的胶原面积(WAc/Pbm);CD31/α-SMA/DAPI免疫荧光染色观察肺血管平滑肌层变化.酶联免疫吸附测定法检测肺组织匀浆HIF-1α及VEGF含量.实时荧光定量PCR法检测肺组织HIF-1α、VEGF mRNA相对表达水平.结果 与对照组比较,模型组第16周空腹血糖水平差异无统计学意义(P＞0.05),WAt/Pbm、WAc/Pbm、WT％及WA％均增大(P＜0.01),肺血管平滑肌层明显增厚,肺组织HIF-1α、VEGF蛋白表达和mRNA表达均增加(P＜0.01).与模型组比较,舒尼替尼组第1 6周空腹血糖水平降低(P＜0.01),保肺定喘汤组差异无统计学意义(P＞0.05);保肺定喘汤组及舒尼替尼组WAt/Pbm、WAc/Pbm、WT％及WA％均减小(P ＜0.01,P ＜0.05),肺血管平滑肌层重构均有所减轻,肺组织HIF-1α、VEGF蛋白表达和mRNA表达均减少(P＜0.01,P＜0.05).结论 舒尼替尼、保肺定喘汤可通过下调肺组织HIF-1α、VEGF表达进而减轻COPD合并糖尿病小鼠肺血管重构.
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低氧诱导因子-1α小干扰质粒(siHIF-1α)抑制体内血管新生
本研究拟通过腺病毒感染法观察低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的干扰质粒在体内对新生血管的抑制作用.构建干扰性siRNA质粒(siHIF-1α),在体外通过腺病毒介导的方法将人siHIF-1α质粒(Ad-siHIF-1α)转入人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC);观察EPC的感染效率;确定病毒滴度;并将此Ad-siHIF-1αEPC移植至缺血下肢模型,观察对新生血管的抑制作用.结果显示Ad-siHIF-1α感染效率约80%,移植异种Ad-siHIF-1α-EPC至Balb/c鼠缺血下肢后发现干扰后的EPC在体内显著抑制缺血部位的HIF-1α mRNA及蛋白(P<0.05);Ad-siHIF-1α-EPC较对照组进一步抑制体内毛细血管数目(P<0.05);干扰组血流减慢,皮温降低(P<0.05),缺血局部细胞扩增减少(P<0.05).表明Ad-siHIF-1α干扰后的EPC在体内可抑制缺血下肢的局部血管新生.
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低氧通过HIF-1α上调卵巢癌细胞系SKOV3中HPA的表达
目的 探讨低氧条件下卵巢癌细胞株SKOV3中低氧诱导因子-1α(HIF-1α),乙酰肝素酶(HPA)的表达变化及相互作用关系.方法 分组孵育细胞株,用免疫细胞化学定性检测HPA蛋白,Western-blot和RT-PCR检测HIF-1α、HPA蛋白和mRNA.结果 HPA蛋白定位于胞质.低氧12～36 h HIF-1α蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),而mRNA变化不明显,HIF-1α抑制剂雷帕霉素可抑制蛋白表达水平.在低氧后各时间点HPA蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05),雷帕霉素显著抑制HPA蛋白及mRNA表达.结论 低氧可依赖HIF-1α途径增强HPA的表达,进而促进肿瘤的浸润转移.
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siRNA沉默HIF-1α对大鼠心肌细胞CT-1表达的影响
目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1 α)在心肌细胞适应低氧环境中作用机制.方法 合成针对HIF-1α的siRNA片段,转染大鼠心肌细胞系H9C2.Real-time PCR检测HIF-1α和心肌营养素(CT-1) mRNA水平,Westernblot检测HIF-1α和CT-1蛋白水平.结果 低氧环境下,转染针对HIF-1α siRNA片段后HIF-1α mRNA水平、HIF-1 α蛋白质水平、CT-1 mRNA水平和蛋白水平均明显减低(P＜0.05).不进行转染时,CT-1 mRNA水平、HIF-1α蛋白和CT-1蛋白水平在低氧下比常氧下明显增高(P＜0.05).CT-1蛋白由对照组的0.34 ±0.05增至0.55 ±0.05(P＜0.05).结论 低氧情况下CT-1基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在心肌细胞适应低氧环境中具有重要作用.
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激活M3受体减轻CoCl2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2低氧损伤
目的 探讨卡巴胆碱(CCH,毒蕈碱受体亚型3特异性激动剂)激活毒蕈碱受体亚型3 (M3-mAChR)在氯化钴(CoCl2)诱导的大鼠心肌细胞系H9c2低氧损伤中的作用及机制.方法 正常大鼠心肌细胞系H9c2作为对照组,利用CoCl2建立低氧损伤模型,选用M3受体特异性激动剂CCH及其特异性阻断剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶甲碘化物(4-DAMP)对低氧损伤组进行干预.噻唑蓝比色法(MTT)检验细胞增殖活力;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测M3受体、HIF-1α、HO-1和caspase-3蛋白表达水平.结果 低氧模型组细胞凋亡率显著增高(P<0.01),细胞增殖显著降低(P<0.01);HIF-1α、caspase-3和HO-1蛋白表达水平显著上调(P<0.01).用CCH干预后细胞凋亡率明显下降(P<0.01),细胞增殖活力明显增加(P<0.01);M3受体、HIF-1α和HO-1蛋白表达水平显著上升(P<0.01);caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01).应用4-DAMP干预后,由CCH介导的上述相关作用被抑制.结论 CCH激活M3受体抑制CoCl2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2的低氧损伤,机制可能与HIF-1α和HO-1的蛋白表达水平上调有关.
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pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达
目的 构建低氧诱导因子1α(HIF-1α)真核表达质粒,并在MCF-7细胞中进行功能验证.方法 利用RT-PCR扩增带有Xba Ⅰ和HindⅢ酶切位点的HIF-1α编码基因,插入T载体测序正确后,克隆入pcDNA3真核表达载体,然后将其转染MCF-7细胞.Western blot和双荧光素酶报告基因法分别检测HIF-1α表达及其DNA结合活性;实时定量PCR检测HIF-1α对低氧诱导基因C-MET mRNA表达的影响;Caspase3/7活性检测来初步判断HIF-1α对低氧MCF-7细胞凋亡的影响.结果 酶切及测序结果 证明pcDNA3-HIF-1α表达质粒的DNA序列完全正确.将此质粒转染MCF-7细胞后,HIF-1α蛋白表达明显增加,它不仅增强了pGL3-EPO-HRE报告基因活性而且促进了C-MET mRNA的表达,同时还降低了低氧MCF-7细胞中Caspase3/7的水平.结论 pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒构建成功,它不但具有很强的DNA结合和诱导活性,而且在细胞低氧过程中具有一定的抗凋亡作用.
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HIF-1α和HIF-2α在胃癌中的表达及意义
目的 探讨胃癌中低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的表达及其临床意义.方法 用免疫组化SP法检测组织中HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达;用Western blot法检测组织中HIF-1α、HIF-2α的表达.结果 胃癌中HIF-1α、HIF-2α和VEGF的阳性表达率分别为61.5%、36.5%和61.5%,均显著高于正常对照组的11.1%、0和0;HIF-1α表达与VEGF及胃癌的淋巴结转移密切相关.胃癌组织中HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达显著高于癌旁正常胃黏膜组织.结论 低氧诱导因子的表达可能在胃癌的发生、发展中具有重要作用.
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异氟烷减轻人心肌细胞缺氧／复氧损伤的研究
目的：探讨异氟烷对缺氧／复氧（ AR）损伤人心肌细胞的作用及其机制。方法人心肌细胞株HCM分为对照组（con）、AR组和异氟烷（0．5％、1％、1．5％和2％）组（n＝5）。酶标仪检测细胞活力，化学比色法检测LDH活性， Annexin V－FITC／PI双染法检测细胞凋亡，RT－PCR和Western blot检测低氧诱导因子（ HIF）－1α表达水平。结果与对照组比较，AR组细胞活力降低，LDH活性和凋亡细胞升高，HIF－1α表达水平显著上调（P＜0．05）；异氟烷可缓解AR导致的心肌细胞活力降低、LDH活性和凋亡细胞数增加以及HIF－1α表达水平回降（ P＜0．05）。 siRNA转染组HIF－1α表达水平显著低于AR组（ P＜0．05）；2％异氟烷显著缓解siRNA转染组心肌细胞活力的升高，LDH活性和凋亡细胞数的降低（ P＜0．05）。结论异氟烷可通过上调HIF－1α的表达部分减轻AR损伤人心肌细胞。
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pGL3-EPO-HRE报告基因质粒的构建及功能鉴定
目的 构建串联低氧反应元件(HRE)报告质粒pGL3-EPO-HRE并进行功能验证.方法 按照人促红细胞生成素(EPO)基因3'末端HRE增强子序列,人工设计合成首尾2段3'末端部分互补的单链DNA,然后通过退火及延伸合成两端带有Mlu I和BglⅡ酶切位点的包含3个串联排布的HRE的双链DNA,克隆到T载体测序正确后,将其插入到pGL3-promoter报告载体.构建好的pGL3-EPO-HRE分别与pcDNA3-HIF-1α和pcDNA3共转染MCF-7细胞,经氯化钴(CoCl2)作用24h后测定报告基因的活性.结果 质粒测序及酶切结果正确,瞬时转染实验显示,在常氧条件下,CoCl2及pcDNA3-HIF-1α可以使pGL3-EPO-HRE报告基因的活性增高约10倍(P＜0.01),而且两者共同作用可以使报告基因的活性进一步增高约30倍(P＜0.01).结论 pGL3-EPO-HRE可以与低氧诱导因子-1(HIF-1)结合并被激活,可以用来鉴定和检测细胞中HIF-1的表达及蛋白活性.
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低氧对食管癌Eca109细胞体外迁移及侵袭的影响
目的 探讨低氧对食管癌迁移及侵袭能力的影响及其作用机制.方法 采用CoCl2化学低氧法模拟肿瘤低氧微环境,半定量RT-PCR和免疫细胞化学分别检测不同低氧时相时食管癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、E-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA及蛋白的表达.Western印迹法检测雷帕霉素联合低氧处理Eca109细胞后,HIF-1α、E-钙黏蛋白及MMP-2的变化.细胞划痕试验和Transwell实验检测雷帕霉素联合低氧对Eca109细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 Eca109细胞在低氧状态下,HIF-1α mRNA无明显变化,仅蛋白表达增多；E-钙黏蛋白的mRNA表达明显降低(P＜0.05),蛋白表达减少；MMP-2 mRNA表达明显升高(P＜0.05),蛋白表达增多.雷帕霉素在低氧状态下可显著抑制HIF-1α及MMP-2表达,促进E-钙黏蛋白高表达.经雷帕霉素处理后,Eca109细胞在低氧状态下,迁移速度减慢,侵袭穿膜细胞数减少(P＜0.05).结论 低氧使Eca109细胞中HIF-1α蛋白表达增多,后者可能通过下调E-钙黏蛋白、上调MMP-2表达促进食管癌在低氧状态下的迁移及侵袭.
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HPV感染、HIF-1α及VEGF蛋白表达与非小细胞肺癌相关
目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染在非小细胞肺癌(NSCLC)发生中的病因学意义,并初步分析HPV感染与低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达之间的关系.方法 用免疫组化法检测60例NSCLC及20例肺良性病变组织中HIF-1α和VEGF蛋白表达,用PCR法选用HPV16、18型特异性引物检测两组中HPV DNA的表达.结果 1)NSCLC组HPV DNA积分吸光度比值为0.6046±0.0224,显著高于肺良性病变组的0.0275 ±0.1230(P ＜0.05).2)NSCLC组HIF-1α和VEGF蛋白的平均吸光度值分别为0.2548±0.0219和0.2051±0.0321,均显著高于肺良性病变组(0.0826±0.0150和0.0726±0.0227)(P＜0.05).3)NSCLC中HIF-1α的表达率与VEGF呈正相关(P＜0.05).4) NSCLC中HPV(+)组VEGF的表达率为56.0％,显著高于HPV(-)组的28.6％ (P ＜0.05).结论 HPV感染可能是NSCLC发生的病因学因素之一;HPV感染可能通过上调VEGF的表达,促进肺癌的发生发展.
