Fas基因转导逆转胃癌耐药细胞的作用及其机制分析

目的观察Fas基因转导人胃癌耐药细胞SGC7901/VCR对化疗药物的敏感性,并初步探讨其机制.方法以流式细胞仪检测Fas基因转导和对照胃癌细胞在细胞周期中的分布;用MTT实验检查癌细胞对多种药物的敏感性;用免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞P-糖蛋白(P-gp)和拓扑异构酶II(TopoII)的表达.结果与胃癌细胞SGC7901和pBK-SGC7901/VCR相比较,Fas-SGC7901/VCR在G2期减少,S期增多,并出现明显的凋亡峰;Fas-SGC7901/VCR对DDP,MMC和5-Fu的敏感性增加,但对VCR和DOX的敏感性无明显变化;SGC7901,pBK-SGC7901/VCR和Fas-SGC7901/VCRTopoII的表达无明显差别;Fas-SGC7901/VCRP-gp的表达水平明显低于pBK-SGC7901/VCR,仅显示弱阳性.结论Fas基因可在一定程度上逆转人胃癌耐药细胞SGC7901/VCR的多药耐药性(MDR),其涉及的相关机制可能是增强细胞对凋亡诱导剂的敏感性,以及降低细胞P-gp的表达水平.

P-gp和MRP在肾癌中的表达及其临床意义

目的探讨p-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)在肾癌中表达的临床意义及相互关系.方法采用免疫组织化学方法对106例肾癌石蜡包埋标本进行P-gp和MRP检测.结果P-gp及MRP在肾癌中的阳性表达率分别为68.8%(73/106)和56.6%(60/106).肾癌P-gp的表达与性别、病理类型、临床分期及预后无关,但与病理分级有关.肾癌MRP的表达与性别、病理类型无关,但MRP的表达随肾癌病理分级、临床分期的升高而增强.MRP阳性表达组3年生存率显著低于MRP阴性表达组.P-gp与MRP的表达具有相关性.结论P-gp和MRP过表达对肾癌固有的多药耐药现象可能具有一定的协同作用.MRP参与了肾癌的恶性进展并可作为肾癌生物学行为及预后评估的参考指标.

加强细菌耐药性的控制

由于各种抗菌药物的广泛使用.各种微生物势必加强其防御能力,抵抗抗菌药物的侵入,从而使微生物对抗菌药物敏感性降低甚至消失,这就是细菌的耐药性.由于耐药基因的传代、转移、传播、扩散,耐药微生物越来越多,耐药程度越来越严重,形成多药耐药性.

自噬在胃癌中的研究进展

近年来,自噬在胃癌中的作用得到了广泛的关注,自噬犹如一把"双刃剑"在肿瘤发展过程中扮演重的双面角色,对肿瘤的发展既有抑制作用,又有促进作用,本文对自噬抑制胃癌早期的形成以及促进中晚期胃癌的药物抗等新研究进展进行介绍.探讨细胞自噬与胃癌的关系,有助于深入了解胃癌的发生发展以及预后等一系列问题,希望为胃癌的早期诊断和诊治提供新的治疗途径.

DNA 拓扑异构酶抑制剂在逆转肿瘤多药耐药性中的研究进展

DNA 拓扑异构酶（DNA topoisomerase，Topo）是细胞凋亡过程中关键的核内酶，Topo 抑制剂通过作用于 Topo 抑制肿瘤的活性。然而在临床中，单独使用一种 Topo 抑制剂常常引发多药耐药性。研究证明，两种 Topo 抑制剂联合用药存在协同作用可以逆转这种多药耐药性，但这种联合与药物组配、肿瘤特点和给药顺序密切相关，本文就这种联合用药在逆转肿瘤多药耐药中的研究进展做一综述。

组蛋白乙酰化影响肿瘤细胞多药耐药性的研究进展

在临床治疗中,肿瘤细胞的多药耐药性(multi-drug resistance,MDR)已经成为化疗失败的重要原因之一.肿瘤细胞中组蛋白乙酰化异常与MDR的产生有关,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylases inhibitor,HDACi) 能够抑制肿瘤生长,避免肿瘤产生耐药性,已经作为一种新型的抗肿瘤药物应用于临床.HDACi可能通过阻滞细胞周期、促进细胞分化、诱导细胞凋亡等多种生物学效应发挥其抗肿瘤的作用,HDACi与其他药物联合应用在抗肿瘤方面也展现了良好的应用前景.

非小细胞肺癌Flt-1和GST-π的表达及临床意义

目的:通过检测血管内皮生长因子受体(Flt-1)以及多药耐药(MDR)基因产物在非小细胞肺癌中的表达,探讨非小细胞肺癌多药耐药机制与肿瘤血管生成的相关性及临床意义.方法:应用免疫组化技术SP法,对56例肺癌标本和20例癌旁组织进行上述 2种指标检测并分析.结果:在非小细胞肺癌组织中Flt-1和GST-π表达阳性率分别为76.8%、81.3%,Flt-1的表达与临床分期,淋巴结转移以及组织分化程度有关 (P＜0.05),但与组织类型无关;GST-π的过表达与肿瘤细胞组织学类型和细胞分化程度有关,腺癌和低分化癌组织中GST-π表达的阳性率明显降低 (P＜0.05).结论:Flt-1和GST-π在未行放化疗的肺癌组织中均有不同程度的高表达,且与肺癌某些生物学行为有关,联合检测有助于化疗药物选择及预后判断.

IER3在耐阿霉素的骨肉瘤细胞中的表达及意义

目的:构建骨肉瘤的耐药细胞模型,探讨IER3基因在骨肉瘤耐药中的表达情况及意义.方法:采用递增药物浓度冲击诱导法构建耐阿霉素入骨肉瘤细胞模型(MG-63/ADM),应用RT-PCR和Western blot 检测IER3在敏感细胞和耐药细胞中的基因和蛋白水平表达情况.结果:经过6个月的诱导,建立了对于不同阿霉素浓度耐药的细胞模型分别标记为MG-63/ADM0.1、MG-63/ADM0.4、MG-63/ADM1.0、MG-63/ADM4.0,细胞形态在光镜下明显改变,MG-63/ADM细胞中IER3的表达量明显高于MG-63.结论:药物冲击诱导可以使骨肉瘤细胞产生对于化疗药物的耐药性,为研究骨肉瘤耐药性及其逆转提供实验基础,IER3可能参与了骨肉瘤对于阿霉素的耐药机制.

RNA干扰抑制FANCD2基因对多药耐药骨髓瘤细胞株药物敏感性的影响

目的:探讨FA/BRCA(fanconi anemia/BRCA)中siRNA干扰对多药耐药骨髓瘤细胞株的影响.方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞系,通过相应渐增浓度的马法兰药物处理,选择性获得多药耐药的子代肿瘤细胞株RPMI-8226/R细胞.MTT法检测RPMI-8226和RPMI-8226/R细胞马法兰、ADM、VCR、CTX、Ara-C、VP-16及DDP的敏感性.siRNA干扰抑制FA/BRCA途径FANCD2蛋白表达,观察多发性骨髓瘤多药耐药细胞株对烷化剂药物敏感性的变化.结果:成功构建针对FANCD2基因的siRNA,将其转染多药耐药骨髓瘤细胞株,可以抑制细胞中FANCD2基因表达,转染细胞较转染前细胞FANCD2基因表达降低,对烷化剂的敏感性升高.结论:人多发性骨髓瘤多药耐药细胞株RPMI-8226/R其多药耐药性的产生可能与FA/BRCA途径中FANCD2表达增强有关,可通过抑制FANCD2表达而逆转细胞的耐药性达到增强烷化剂对耐药肿瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.沉默FANCD2表达可以提高多药耐药MM细胞对烷化剂的敏感性,而RNA干扰是一种沉默FANCD2表达的理想方法,因此它可能是一种有潜力的耐药MM辅助治疗新方法.

转染Livin基因后骨肉瘤细胞系的多药耐药性研究

目的:探讨转染Livin基因后人骨肉瘤细胞的多药耐药变化.方法:采用基因重组技术构建Livin 基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Livin ,经酶切和基因测序分析对构建结果进行鉴定;通过脂质体将含Livin基因的表达载体转染人骨肉瘤细胞U-2OS,RT-PCR检测基因转录水平;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞在不同化疗药物作用下的细胞耐药性.结果:经酶切鉴定和基因测序分析证明真核表达载体pcDNA3.1(+)/Livin 构建成功.将该表达载体转染U-2OS细胞后,Livin基因的表达水平与野生型U-2OS细胞和转染空载体的U-2OS/neo细胞相比显著提高(P<0.01) .与U-2OS细胞和U-2OS/neo细胞相比,U-2OS/Livin细胞对ADM、CTX、MMC和DDP等化疗药物的耐药性也明显增强(P<0.01).结论:Livin基因高表达是人骨肉瘤多药耐药的原因之一.

siRNA干扰技术逆转MHCC97肝癌细胞多药耐药性

目的: 探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌MHCC97细胞株多药耐药性(multi -drug resistance,MDR)的影响.方法: 设计合成1对靶向针对多药耐药基因(multi-drug resistance 1 MDR1)的siRNA,与脂质体转染复合体转染至MHCC97细胞.采用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和Western blot分别检测MDR1 mRNA和P-糖蛋白(P-glycopmtein,P-gp)的表达;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性.结果: RT-PCR和Western blot显示转染siRNA后MDR1 mRNA和P-gp的表达水平均下降.MTT法测定siRNA处理后对细胞的杀伤作用,结果显示转染后MDR1-siRNA组细胞增强了对5-FU、Adriamycin、Vincristine药物的敏感性.结论: siRNA可逆转肝癌细胞的MDR,为提高肝癌的化疗效率提供了一种新方法.

PSC833逆转人骨肉瘤细胞株多药耐药性的研究

目的探讨PSC 833对骨肉瘤耐药细胞株U2OS/DOX的逆转作用及其机制.方法用MTT法进行PSC 833逆转MDR活性测定;用流式细胞仪技术,观察PSC833对细胞内Rh123积聚和外排的影响;用免疫荧光技术定量检测逆转剂对P-gp表达水平的影响.结果 PSC833能显著增加DOX对U2OS/DOX的细胞毒性作用,逆转效果明显强于VPL和 CSA,且存在剂量依赖关系,对敏感株U2OS无明显作用;PSC 833能使耐药株细胞内Rh123外排减少、积聚增加,而对P-gp的表达水平没有明显影响.结论 PSC833能增强DOX对U2OS/DOX的细胞毒性作用,逆转MDR效果明显优于VPL和CSA,其机理在于抑制耐药株细胞膜上P-gp的功能,而对P-gp的表达水平没有影响.

虎杖苷逆转人结肠癌细胞株 HT -29奥沙利铂耐药性及机制

目的：探讨虎杖苷对结肠癌耐药细胞株 HT -29奥沙利铂（oxaliplatin，OXA）耐药性的逆转作用并探讨其可能的作用机制。方法：采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株 HT -29/ OXA。MTT 和 CCK -8法测定虎杖苷对 HT -29/ OXA 细胞的耐药性逆转作用，流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化，qRT - PCR 检测各组细胞 LRP（lung resistance protein）和 P - gp（P - glycoprotein）mRNA 表达水平，Western blot 检测各组细胞 LRP 和 P - gp 蛋白的表达水平。结果：虎杖苷使 HT -29/ OXA 细胞对奥沙利铂的敏感性增加，耐药性得到部分逆转（P ﹤0.05）。联合应用对结肠癌耐药细胞株 HT -29/ OXA 生长增殖具有明显抑制作用并且能够通过改变细胞周期引起凋亡（P ﹤0.05）。作用后 LRP mRNA 和 P - gp mRNA 表达水平降低，同时下调了 LRP 和 P - gp 蛋白表达（P ﹤0.05）。结论：虎杖苷部分逆转 HT -29/ OXA 细胞对奥沙利铂的耐药性，其机制与降低细胞内 LRP 基因从而导致 P - gp 的表达降低有关。

涎腺腺样囊性癌耐药细胞系的建立

目的:建立博莱霉素(BLM)诱导的人涎腺腺样囊性癌耐药细胞株.方法:采用大剂量博莱霉素(20μ/ml)24 h暴露法反复处理腺样囊性癌细胞系ACC-2细胞,获得耐药细胞系ACC-2/BLM;通过MTT法、细胞计数法、流式细胞术等方法,观察ACC-2/BLM的生物学特性.结果:成功建立了博莱霉素诱导的人涎腺腺样囊性癌耐药细胞系ACC-2/BLM,耐药指数为7.299,与环磷酰胺、顺铂等抗癌药有明显的交叉耐药;与ACC-2细胞相比,ACC-2/BLM倍增时间延长,细胞周期中S期细胞减少,G1、G2期细胞增多.在含60μg/ml博莱霉素的培养液中,分别培养9 d后,ACC-2/BLM凋亡细胞明显少于ACC-2细胞.结论:BLM可致ACC-2细胞产生耐药性,ACC-2/BLM细胞系具有多药耐药特性.

缺氧诱导鼻咽癌细胞株CNE2化疗耐药及其机制

目的:探讨缺氧环境下人鼻咽癌多药耐药相关基因和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达和意义,从而部分阐明鼻咽癌发生多药耐药的机制,为逆转鼻咽癌耐药提供新的分子靶点.方法:将人鼻咽癌细胞系CNE2分别行不同时间低氧培养,MTT法检测CNE2对紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶的耐药倍数;流式细胞仪检测缺氧与常氧下细胞的凋亡情况.应用RT-PCR和Western Blot分别检测每组CNE2细胞中多药耐药相关基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白1(MRPI)和HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达.结果:缺氧培养48 h,CNE2对紫杉醇、顺铂和5-氟尿嘧啶的耐药倍数较常氧分别提高2.14,1.86,1.43倍,且药物引起的凋亡减少.在缺氧组,随着缺氧时间的延长,CNE2细胞中多药耐药相关基因mdr1,MRPI的表达均逐渐增高,而且这些多药耐药相关基因的表达与HIF-1α的表达呈同步化改变.结论:缺氧可上调鼻咽癌细胞内的核转录因子HIF-1α以及多药耐药相关基因的表达,从而诱导鼻咽癌产生多药耐药性.核转录因子HIF-1α和这些多药耐药相关基因可能成为逆转鼻咽癌耐药的新的分子靶点.

阿霉素诱导大肠癌LoVo细胞产生多药耐药中端粒酶逆转录酶的变化

目的:观察在阿霉素诱导大肠癌LoVo细胞产生多药耐药过程中,端粒酶逆转录酶基因表达,明确端粒酶是否参与了多药耐药机制. 方法:采用阿霉素浓度递增法,建立人大肠癌细胞多药耐药模型LoVo/Adr;用MTT法鉴定耐药LoVo/Adr细胞的耐药性;以流式细胞术检测其周期分布;用RT-PCR方法检测hTERT mRNA水平在诱导耐药过程中的变化. 结果:历经8 mo+、传代67次连续培养,建立了人大肠癌耐药模型LoVo/Adr细胞株;LoVo/Adr对阿霉素、长春新碱、丝裂霉素、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶耐药倍数分别是61倍、14倍、3倍、9倍和1倍;LoVo/Adr细胞与LoVo细胞相比,S期细胞减少,而G1, G2期增多;亲本LoVo细胞的hTERT mRNA呈低水平表达,在阿霉素诱导初期即显著增高,随后基本保持高表达状态,并不随着耐药性增加而增强. 结论:耐药株LoVo/Adr是一个典型的具有多药耐药性表型的耐药模型,端粒酶参与了其耐药机制.

高温合并化疗对耐药性VX-2细胞多药耐药基因的影响

目的:观察热化疗对多药耐药性VX-2细胞mdr基因的影响. 方法:采用单纯化疗(阿霉素32 μg/mL,1 h),单纯热疗(42.5℃,1 h)及热疗联合化疗(阿霉素32 μg/mL+42.5℃,1 h),分别作用于VX-2及VX-2 mdr1细胞. 观察不同处理组细胞的存活率、mdr1 mRNA及P-gp的表达情况. 结果:热化疗组细胞的存活率明显低于单纯加热组及单纯化疗组,同时热化疗组细胞mdr1 mRNA的表达明显减低或消失,P-gp表达明显减低. 结论: 热化疗可以使多药耐药细胞mdr1 mRNA表达降低或消失,使P-gp表达降低,从而逆转了肿瘤细胞的多药耐药性,提高了化疗的敏感性.

高温合并化疗对耐药性大鼠肝癌CRBH-7919细胞系的协同作用

目的探讨高温合并阿霉素对耐药性大鼠CRBH-7919细胞株的作用. 方法 42.5℃持续1 h、阿霉素32 mg*L-1,单独或联合作用于耐药性大鼠CRBH-7919细胞,MTT法检测不同处理后细胞的存活率;免疫组化检测不同处理后细胞膜P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的表达. 结果加温可增加阿霉素对耐药性CRBH-7919细胞的杀伤作用;免疫组化提示,正常培养下该细胞P-gp染色强阳性,单独用药和单独加热作用下P-gp染色为阳性,加温合并阿霉素作用下, P-gp染色为极弱阳性. 结论高温合并化疗(热化疗)可以显著提高耐药性CRBH-7919细胞对阿霉素的敏感性.

抗癌药合用维拉帕米对体外人胃癌细胞的影响

目的观察无毒剂量钙拮抗剂维拉帕米（VPM）与小剂量化疗药阿霉素（ADM）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂（CDDP），合并用药前后对胃癌细胞影响实验研究. 方法用MTT法观察其对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901，在VPM与ADM，5-FU和CDDP合并用药前后对细胞存活率的影响，并通过流式细胞仪检测细胞周期变化，透射电镜观察细胞超微结构变化. 结果 VPM与ADM，5-FU和CDDP合用与单独应用化疗药相比细胞存活率明显下降，ADM 10 μg*L-1细胞存活率88%，CDDP 100 μg*L-1 77%，5-FU 100 μg*L-1 56%，合并用药后细胞存活率分别下降至49%，47%和29%. 其增效倍数为单独用药的2.51～6.31倍(P<0.001)，细胞生长停止在S期，S期数分数为0.48，抑制细胞有丝分裂及DNA合成，细胞超微结构显示：细胞核固缩、空泡形成、微绒毛减少、线粒体及内质网肿胀. 结论本研究表明无毒剂量VPM与小剂量化疗药合用，可获得化疗药单独用药相同疗效，VPM增加化疗药对肿瘤细胞的细胞毒作用，增加敏感性，减少药物副作用.

Bax基因对人胃癌耐药细胞多药耐药性的逆转作用