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乏氧诱导因子-1α对胃癌细胞多药耐药性的影响及机制
目的 检测乏氧诱导因子(HIF)-1α在胃癌组织、胃癌细胞株中的表达,探讨其对人胃癌细胞多药耐药性影响的机制.方法 Western blot检测胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞株中HIF-1 α表达;合成针对HIF-1α的siRNA,并转染胃癌细胞株OCUM-2MD3;噻唑蓝(MTT)比色法检测化疗药物对转染前后胃癌细胞的抑制率;荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测转染前后胃癌细胞多药耐药因子多药耐药性1(MDRl)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bax mRNA的表达变化;Western blot法检测P-糖蛋白(P-gp)、GST-π、bcl-2、bax蛋白表达变化.结果 HIF-1α在胃腺癌组织和细胞中的表达明显增高,mRNA表达为(0.853 ±0.182,0.497±0.088),蛋白表达为(0.952±0.198,0.325±0.052),且随分化程度的降低而显著升高(P＜0.01);HIF-1 α-siRNA转染OCUM-2MD3细胞后,HIF-1 α表达明显受到抑制,且抑制效果在剂量浓度为80 nmol/L,作用时间为24h为明显,mRNA表达由(0.747±0.087)下降至(0.177±0.043),蛋白表达由(0.622±0.089)下降至(0.211±0.032) (P ＜0.05);HIF-1 α-siRNA转染OCUM-2MD3经48 h后各化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用均明显增强(P＜0.05);转染后OCUM-2MD3中MDR1、GST-π、bcl-2 mRNA强度(0.44±0.06、0.46±0.07、0.37±0.08)均较对照组(0.90±0.11、1.04±0.10、1.01±0.19)明显降低(P＜0.05),而bax mRNA强度于转染后(1.91±0.09)较转染前(0.91±0.08)明显升高(P＜0.05);P-gp、GST-π、bcl-2蛋白水平(1.58±0.19、1.37±0.17、1.97±0.22)均较对照组(0.82±0.12、0.51±0.06、0.81±0.09)明显降低(P＜0.05),而bax蛋白水平于转染后(1.03±0.01)较转染前(0.51±0.07)明显升高(P＜0.05).结论 HIF-1α与胃癌MDR关系密切,抑制HIF-1α表达有明显的逆转胃癌细胞MDR的作用,该作用是通过调节多药耐药因子的表达而实现的.
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消化道肿瘤环氧合酶-2表达与凋亡抑制蛋白及化疗药敏性的关系
目的 探讨消化道肿瘤环氧合酶(COX)-2表达与凋亡抑制蛋白及体外化疗药敏性的关系.方法 对84例胃癌、大肠癌标本进行噻唑蓝(MTT)比色法体外化疗药物敏感性实验,并进行COX-2、p53、Survivin、bel-2免疫组织化学染色.结果 肿瘤组织COX-2、p53、Survivin、bel-2表达率分别为70.3%、64.3%、89.3%、60.7%;COX-2与Survivin、bcl-2表达呈正相关(r=0.5072、0.3783,均P<0.01).在肿瘤COX-2强表达组,紫杉醇(PTX)、表阿霉素(eADM)、羟基喜树碱(OPT)对肿瘤细胞抑制率明显低于弱表达组(均P<0.05);p53强表达与PTX、顺铂(DDP)对肿瘤细胞的抑制率明显降低有关(均P<0.05);Survivin强表达时,长春新碱(VCR)、DDP对肿瘤细胞抑制率明显降低(均P<0.05);bcl-2强表达时,5-氟尿嘧啶(5-Fu)、VCR、eADM、奥沙利铂(OXA)对肿瘤细胞抑制率明显低于弱表达组(均P<0.05).结论 消化道肿瘤COX-2通过抑制肿瘤细胞凋亡参与了肿瘤的多药耐药.
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消化道肿瘤淋巴结转移灶多药耐药性的变化及其意义
目的 探讨消化道肿瘤淋巴结转移灶多药耐药性(MDR)的变化.方法 对55例胃癌、大肠癌原发灶及相应淋巴结转移灶分别进行MDR相关蛋白(MRP)、P-糖蛋白(gp)、DNA拓扑异物酶(Topo)Ⅱɑ、谷胱甘肽S转移酶(GST)-л免疫组织化学染色,比较二病灶间诸指标表达程度的差异.结果 原发灶与淋巴结转移灶比较:(1)两者的MRP、P-gp、TopoⅡɑ、GST-л表达一致率分别为32.7%、40.0%、45.5%、50.9%;(2)P-gp、GST-л阳性表达差异均有统计学意义(P＜0.01);(3)中高分化腺癌的MRP、TopoⅡɑ阳性表达差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),低分化腺癌仅GST-л阳性表达差异有统计学意义(P＜0.01).中高分化腺癌与低分化腺癌比较:原发灶中TopoⅡɑ阳性表达、转移灶中MRP及TopoⅡɑ阳性表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 消化道肿瘤淋巴结转移灶存在MDR的异质性变化,肿瘤原发灶的耐药基因相关蛋白表达水平不能预测淋巴结转移灶的MDR.
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胃癌组织中的肺耐药蛋白、P糖蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶以及拓扑异构酶Ⅱ的表达及意义
目的探讨肺耐药蛋白(LRP)、P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)以及拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)在胃癌组织中的表达及意义.方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)对71例术前未行化疗的胃癌组织切片中的LRR、P-gp、GST-π以及TopoⅡ的表达进行分析.结果LRP、P-gp、GST-π以及TOPOⅡ的表达阳性率分别为53.5%,69.0%,74.6%,46.4%.与肿瘤患者的年龄、性别、肿瘤的发生部位和肿瘤的浸润深度无关.LRP、P-gp、GST-π表达与肿瘤的组织学类型有关,高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌和未分化癌之间比较差异有统计学意义(x2=8.90,P＜0.05,x2=9.09,P＜0.05;x2=10.198,P＜0.01).LRP、P-gp、GST-π的表达与淋巴结转移有关(x2=5.907;P＜0.05;x2=5.229,P＜0.05).结论LRP、P-gp、GST-π以及TOPOⅡ的表达是肿瘤耐药的标志物,可作为肿瘤化疗时药物取舍的参考.LRP、P-gp、GST-π的表达与胃癌的组织学类型有关,LRP、GST-π可能在胃癌转移中发挥了重要作用.
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胃癌转移淋巴结乏氧诱导因子-1α表达与多药耐药相关因子的关系
肿瘤乏氧时产生的乏氧诱导因子(HIF)-1不仅促进肿瘤的侵袭、转移,而且也参与肿瘤的放化疗抵抗[1-3].消化道肿瘤转移灶多药耐药性(MDR)的异质性促使我们关注胃癌转移灶中HIF-1α表达及其与MDR的关系[4].
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人胆管癌细胞多药耐药性逆转的研究
多药耐药(MDR)是肿瘤细胞产生耐药的重要机制[1].我们以阿霉素(ADM)诱导人胆管癌细胞QBC939产生多药耐药性,并以红霉素(EM)逆转之.
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葡萄糖神经酰胺合成酶异常表达对肝癌多药耐药性的影响
本研究旨在探讨GCS在HCC组织中的表达及与多药耐药的关系[1].一、材料与方法1.一般资料:收集2005年1月至2006年3月我院手术切除的HCC组织标本49例.
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苦参碱对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转作用
有研究证实苦参碱(Mat)在体外具有诱导多种肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡等作用,毒副作用小[1].本研究旨在观察Mat对人乳腺癌细胞耐药株(MCF-7/ADR)的多药耐药(MDR)有无逆转作用.
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人脑胶质瘤多药耐药膜糖蛋白的表达及其临床意义
化疗是综合治疗胶质瘤的重要方法.肿瘤细胞对化疗药物产生的多药耐药性(multi-drug resistance,MDR)严重影响了化疗效果.多药耐药基因(mdr1)编码的膜糖蛋白(P-gp)是MDR的主要形式[1].我们对30例脑胶质瘤中P-gp含量进行测定并探讨其表达与病人临床特点的关系.
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细胞素及合用异博定对人乳腺癌细胞多药耐药性逆转作用的研究
我们利用人乳腺癌耐药细胞系以流式细胞术及噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-2、α-干扰素(α-IFN)单用及与异博定合用对细胞耐药性的调节作用,结果报道如下.
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脑胶质瘤多药耐药细胞株U251/VP16的建立及其生物学特性
目的 采用依托泊苷诱导建立多药耐药细胞株U251/VP16.方法 采用浓度递增法使U251细胞对依托泊苷耐药,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测其多药耐药性；瑞氏-姬姆萨染色观察亲本细胞U251和耐药细胞株U251/VP16的细胞形态；流式细胞仪检测细胞周期的变化；计算细胞倍增时间；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测多药耐药基因(MDR1)、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、多药耐药相关蛋白5(MRP5)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)等耐药基因的表达变化.结果 (1)成功建立多药耐药细胞株U251/VP16,其对VP-16、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素、替莫唑胺的耐药倍数分别为:12.36、2.64、2.00、3.61、1.63.(2)光学显微镜下耐药细胞胞体增大,呈多形性,瑞氏-姬姆萨染色后可见增大的明显不规则的胞核,胞质内颗粒样物质增多.(3)细胞周期结果显示U251/VP16细胞株较亲本细胞G0/G1期和S期明显减少,G2/M期明显增多.(4) U251/VP16的倍增时间为(20.64±1.98)h,长于亲本细胞U251的(10.26±1.03)h.(5)RT-PCR检测结果显示MDR1、bcl-2、MRP5、LRP1等耐药基因的表达上调.结论 采用浓度递增法可成功建立多药耐药的人脑胶质瘤细胞株且耐药性稳定,其耐药性可能与bcl-2、MRP5、LRP1的表达上调有关.
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水通道蛋白-8对结肠癌细胞株HT-29多药耐药因子的影响
目的 通过转染过表达水通道蛋白-8(AQP-8)的真核表达载体,观察AQP-8对结肠癌HT-29细胞株多药耐药因子表达的影响.方法 取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验.构建绿色荧光蛋白(GFP)-AQP-8真核表达载体并转染至HT-29细胞,通过Western blot检测GFP-AQP-8转染效率;采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率;通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测转染GFP-AQP-8的HT-29细胞多药耐药因子P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)及拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的mRNA和蛋白相对表达量.结果 Western blot结果显示,GFP-AQP-8转染后结肠癌HT-29细胞AQP-8mRNA相对表达水平(0.976 ±0.086)与对照质粒GFP-N1转染组(0.140 ±0.024)比较显著上调(P＜0.05).MTT分析结果显示,转染了GFP-AQP-8的结肠癌HT-29细胞增殖抑制率[(22.86±3.75)％]与GFP-N1组[(1.12±0.17)％]比较显著升高(P＜0.05);与转染GFP-N1的对照组[(4.95±0.58)％]比较,转染了GFP-AQP-8的HT-29的细胞凋亡率显著增加[(14.08±2.37)％,P＜0.05].FQ-PCR和Western blot结果显示,GFP-AQP-8组P-gp、GST-π和TopoⅡ的mRNA表达水平(分别为0.44±0.05、0.34±0.03、0.38±0.05)比转染GFP-N1的对照组各基因mRNA表达水平(分别为0.99±0.12、1.02±0.12、0.96±0.14)均明显降低(P＜0.05),GFP-AQP-8组P-gp和GST-π蛋白表达水平(分别为0.28±0.04、0.37±0.05)与转染GFP-N1对照组表达水平(分别为0.83±0.08、0.75±0.10)比较明显下降(P＜0.05),TopoⅡ的蛋白表达在GFP-AQP-8组(0.60±0.08)与GFP-N1组(0.62±0.07)比较变化不明显(P＞0.05).结论 过表达AQP-8可抑制HT-29细胞生长,该抑制作用可能与抑制耐药基因P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达有关.
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肿瘤坏死因子-α基因抑制耐药性人乳腺癌细胞的研究
目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因对耐药细胞生长的抑制作用及机制.方法 以重组逆转录病毒为载体将TNF-α基因导入耐药性人乳腺癌细胞系MCF7/ADR,获阳性克隆MCF7/ADR-TNF1与MCF7/ADR-TNF2.体外观察并比较野生型和转基因癌细胞的生长速度,流式细胞仪分析细胞周期的变化,端粒酶重复扩增实验(TRAP)综合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法测定端粒酶活性的变化.结果 MCF7/ADR-TNF1与MCF7/ADR-TNF2细胞中有TNF-α基因的整合和表达,病毒上清中TNF-α含量分别为1 737 μg/L(106个细胞/48 h)、2 875 μg/L.与阴性对照细胞相比,MCF7/ADR-TNF1与MCF7/ADR-TNF2细胞的生长速度明显减慢,生长抑制率分别为32.4%、54.8%,细胞周期阻滞于S+G2/M期,端粒酶活性降低.结论 外源性TNF-α基因的导入能有效抑制耐药细胞,阻滞细胞周期、抑制端粒酶活性可能为其主要机制.
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裸鼠人肝癌原位移植多药耐药模型的建立及其耐药机制的探讨
目的 在体内建立人肝癌裸小鼠原位移植多药耐药模型，并研究其耐药机理。方法采用人肝癌（BEL-7402）裸小鼠（4～6周龄）原位移植，给予阿霉素(1.5 mg/kg体重，每周1次)腹腔注射诱导耐药（共8周），经四唑蓝(MTT)快速比色法检测原代培养的耐药细胞对抗癌药的敏感性，以流式细胞仪检测癌细胞表面mdr1基因产物P-糖蛋白（P-gp）的表达，并用罗丹明试验观察该蛋白功能。结果 移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征，实验组肝癌细胞表面P-gp表达为(75.45±5.67)%，而对照组表达仅(4.25±1.28)%，差异有非常显著性（P＜0.01），对阿霉素的耐药倍数提高了16.67倍，对羟基喜树碱具有交叉耐受性（13.67倍）。耐药细胞表面P-gp有较强的药物外排功能。结论 阿霉素较易诱导原位移植于裸小鼠的人肝癌多药耐药性的产生，其耐药倍数与临床肝细胞癌相似。该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生机制以及逆转其多药耐药性具有重要价值。
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阿帕替尼逆转P-gp转运体介导的乳腺癌化疗多药耐药性的作用及其机制
目的 探讨阿帕替尼对人乳腺癌化疗多药耐药性的逆转作用及其机制.方法 不同浓度的阿帕替尼作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7及MCF-7/ADR细胞48 h,MTT法检测阿帕替尼对两种细胞的细胞毒性;低毒浓度的阿帕替尼与化疗药物紫杉醇及阿霉素联用,探讨阿帕替尼对两种细胞化疗耐药性的影响;采用流式细胞术检测阿帕替尼对罗丹明123在MCF-7及MCF-7/ADR细胞内蓄积的影响;采用Pgp-GloTM Assay Systems试剂盒观察阿帕替尼对多药耐药相关蛋白P-gp的ATPase活性的影响;采用Western blot法检测阿帕替尼对P-gp表达及AKT磷酸化的影响.结果 阿帕替尼可浓度依赖性地逆转乳腺癌MCF-7/ADR细胞对紫杉醇及阿霉素的多药耐药性(P＜0.05)、增加罗丹明123在MCF-7/ADR细胞内的蓄积(P＜0.05)及激活P-gp转运体的ATPase活性(P＜0.05),而对P-gp的表达没有影响;此外,阿帕替尼不改变AKT的磷酸化水平.结论 阿帕替尼可能通过抑制P-gp转运体的外排功能逆转P-gp转运体介导的乳腺癌化疗多药耐药性.
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异汉防己碱增强多药耐药肿瘤细胞对阿霉素的敏感性及其机制
目的 以K562/DOX和MCF-7/DOX细胞为对象,探讨异汉防己碱对化疗药物阿霉素(DOX)的增敏作用及其作用机制.方法 采用MTT法检测异汉防己碱的内在细胞毒性及其对阿霉素的增敏作用,并以RF值评价其增敏效果.应用流式细胞术(FCM)检测细胞膜上P-gp的表达以及细胞内DOX和罗丹明123(Rh123)的蓄积量.结果 异汉防己碱在10 μg/ml的无毒剂量可明显增强DOX的细胞毒性.K562/DOX和MCF-7/DOX细胞膜上P-gp均呈强阳性表达,但异汉防己碱对该P-gp表达水平无明显影响.异汉防己碱可使K562/DOX和MCF-7/DOX细胞内DOX和Rh123的荧光密度(FI)均明显增加,由此证明异汉防己碱可有效抑制P-gp的功能.结论 异汉防己碱可通过抑制P-gp的功能而增强阿霉素的敏感性,从而有效逆转肿瘤细胞的多药耐药性(MDR),它可能成为有效多药耐药逆转剂的候选药物.
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川芎嗪联合氟尿嘧啶对胃癌细胞SGC-7901/ADR的杀伤作用
目的 现察川芎嗪(TMP)联合氟尿嘧啶(5-Fu)对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR细胞的体外杀伤作用.方法 采用MTT法观察TMP联合5-Fu对SGC901/ADR细胞的杀伤作用,光镜下观察并采用流式细胞仪(FCM)测定各药物组细胞周期的分布.结果 5-Fu对SGC-7901/ADR细胞的半数抑耕率(IC50)为13.001 mg/L,与300 mg/L TMP联合后,使其的IC50降至1.542 mg/L,逆转倍数是8.43倍,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01).光镜下可见5-Fu+TMP(终浓度300 mg/L)组较5-Fu组癌细胞皱缩变小变圆,出现凋亡改变.FCM分析:TMP联合5-Fu与对照组相比将细胞阻滞在DNA合成前期和静息期-G0/G1期(P<0.05).结论 TMP与5-Fu联合对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR有较强的杀伤作用,为当前胃癌治疗提供了新思路.
关键词： 胃癌 多药耐药性 SGC7901/ADR细胞 5-FU 川芎嗪 -
survivin反义寡核苷酸逆转顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡耐受作用
目的 探讨survivin反义寡核苷酸逆转人肺腺癌细胞对顺铂诱导的细胞凋亡耐受的效应.方法 1.常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的survivin 反义寡核苷酸(ASODN)体外转染细胞.2.采用二苯胺反应法(DPA)测定DNA片段化、激酶法检测Caspase-3酶活性及流式细胞术检测细胞凋亡率(AI),评价细胞凋亡程度.3.采用MTT法测定细胞存活率和生长抑制率,计算半效抑制浓度(IC50)及耐药倍数(RI).结果 1.单用ASODN转染组DNA片段化比率、细胞凋亡率和Caspase-3相对活性分别增高至(43.55±6.07)%、 (34.03±2.25)%和1.1298±0.2502,和各对照组相比较,均有显著性变化(P＜0.01);而ASODN和CDDP联用组上述凋亡指标增高更为明显,分别达(76.73±2.04)%、(65.85±5.47)%和1.6805±0.2758(P＜0.05).2.转染组A549/CDDP细胞生长抑制显著,单用转染组和联合CDDP组生长抑制率分别增高达59.3%和83.7%(P＜0.05).3.ASODN转染后CDDP对细胞IC50由(225.03±10.59) μmol/L减低至(158.84±4.256) μmol/L,其RI由11.9减为8.39.结论 survivin 反义寡核苷酸体外转染可降低耐顺铂人肺腺癌细胞的凋亡阈值,从而较大程度上逆转其对顺铂诱导的细胞凋亡耐受.
关键词： Survivin基因 反义寡核苷酸 多药耐药性 细胞凋亡 -
外放射对鼻咽鳞癌P糖蛋白的影响
目的初步探讨放射治疗前、后鼻咽鳞癌组织P-糖蛋白(P-gp)的表达及变化特点.方法应用免疫组织化学SP法检测了48例初治鼻咽鳞癌患者放射治疗前、后P-gp的表达. 结果 48例初治鼻咽鳞癌组织P-gp阳性表达率放射治疗前为18.75%(9例/48例),其中低分化鳞癌和中高分化鳞癌分别为17.65%(6例/34例)和21.43%(3例/14例);放射治疗后P-gp阳性表达率为75.00%(36例/48例), 其中低分化鳞癌和中高分化鳞癌分别为79.41%(27例/34例)和64.29%(9例/14例).放射治疗后P-gp阳性表达率较放射治疗前呈增高趋势,放射治疗后P-gp阳性率和放射治疗前相比有显著性差异(P<0.001).结论放射治疗可诱导和加强鼻咽鳞癌组织中P-gp表达,这可能是引起放﹑化疗交叉耐药的原因之一.
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不同mRNA差异显示法筛选胃癌细胞耐药相关基因的研究
目的比较银染和放射自显影mRNA差异展示方法在分离、克隆胃癌细胞耐药相关基因过程中的优缺点. 方法长春新硷诱导人胃癌SGC7901细胞,建立稳定的耐药细胞亚系SGC7901/VCR.同时应用银染和放射自显影的mRNA差异展示方法筛选胃癌SGC7901细胞和耐药细胞亚系SGC7901/VCR之间mRNA表达的差异.结果显示银染法省时,花费少,操作方便;在获得差异条带方面放射自显影法明显优于银染法,且其能得到较多低丰度的差异表达基因;而两者在二次PCR扩增,克隆,测序,杂交鉴定及假阳性率方面无明显差异. 结论银染mRNA差异展示法适合于高丰度差异表达基因的快速筛选,而放射自显影mRNA差异展示则能较彻底地显示两种细胞中多数mRNA的差异.
