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分枝杆菌临床分离株菌种的分子鉴定
目的 建立对临床分离分枝杆菌菌种快速、精确鉴定的方法学平台,了解分枝杆菌菌种的分布,为结核分枝杆菌(MTB)和非结核分枝杆菌(NTM)病临床精确诊断和有效治疗提供依据.方法 330株分枝杆菌分离株来自于2007年5月至2008年12月在哈尔滨市胸科医院诊断为结核病的住院患者.菌株灭活后提取基因组DNA,采用PCR方法,结合PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)和DNA序列测定方法进行菌种精确鉴定.结果 330株临床分离菌株全部精确鉴定,其中328株[占99.4％(328/330)]为结核分枝杆菌复合群(MTBC),2株[占0.6％(2/330)]为NTM.328株MTBC中,MTB 326株、非洲分枝杆菌(M.African)1株、田鼠分枝杆菌(M.microti)1株,分别占MTBC的99.4％ (326/328)、0.3％(1/328)和0.3％(1/328).经测序和基因组同源性分析发现,2株NTM为胞内分枝杆菌(MAC),与MAC的同源性分别为99％和93％,2株菌之间的同源性为93％.结论 建立了临床分离分枝杆菌菌种快速鉴定的方法学平台,临床诊断为结核病的患者MTB比例占绝对优势,也发现有M.African、M.microti和NTM感染.
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四川地区非结核分枝杆菌耐药情况与临床相关性研究
目的：探讨分析四川地区非结核分枝杆菌（NTM）感染、耐药情况以及与临床的相关性。方法回顾性分析2014年1月至2015年12月成都市公共卫生临床医疗中心分枝杆菌实验室接诊患者标本，采用基因芯片或16S rDNA 基因序列分析进行种群鉴定，比例法（L-J 固体培养法）药物敏感试验检测其耐药性，并对87例 NTM 患者进行临床相关性分析。组间率的比较采用χ2检验。结果2014年1月至2015年12月共收集12460例患者，阳性菌株3991株（阳性率32．0％），分离 NTM 125株。125株NTM 进行种或复合群鉴定，种群分布有9种，其中龟／脓肿分枝杆菌（42／125，33．6％）、胞内分枝杆菌（37／125，29．6％）、鸟分枝杆菌（29／125，23．2％）分离率较高。两年间耐药率比较差异无统计学意义（χ2＝3．88，P ＞0．05）。125例 NTM 对多种抗结核药耐药，其中异烟肼（99．2％）耐药率高，其次为利福平（97．6％）、链霉素（93．6％）、氧氟沙星（89．6％）、阿米卡星（85．6％）、卷曲霉素（81．6％）、乙胺丁醇（65．6％）、卡那霉素（58．4％）、克拉霉素（44．8％）。87例 NTM 患者临床相关性分析发现真实感染NTM 并致病的患者为58例（66．7％）。结论四川地区2014年1月至2015年12月 NTM 发病率呈上升趋势，耐药情况严峻，实验室分离菌种与临床相关性研究应进一步受到重视。
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分枝杆菌相关抗菌肽的研究进展
分枝杆菌是一类可能引起人体严重感染的病原体,随着分枝杆菌耐药菌株不断增多并在世界范围内传播,对开发新型抗分枝杆菌药物的需求愈发迫切.抗菌肽是一类普遍存在于生物体内、通常为双亲性阳离子结构的肽类物质,其可通过细胞膜破坏机制杀菌,具有广谱抗菌活性.抗菌肽具有来源广泛、抗菌谱广、杀菌迅速、耐药性低等优势.另外,不同于传统抗生素,抗菌肽还可通过穿膜后与细胞内靶点结合,触发下游的免疫学效应.尽管抗菌肽尚处于研发阶段,却已展现出广阔的应用前景.
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结节病与感染相关性的研究进展
结节病是一种系统性无干酪样坏死的肉芽肿性疾病,病因复杂,常累及肺脏、皮肤等多个器官,对糖皮质激素治疗敏感.目前认为,其发病机制是具有遗传易感性个体受到一种或几种不明原因抗原的刺激后产生的异常免疫应答,其真正发病原因尚未明确,可能与感染、遗传、职业、环境等多种因素有关.感染性因素中,分枝杆菌属、丙酸杆菌、病毒、立克次体、真菌等病原微生物的感染可能与其发病关系较为密切.
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结核疹和分枝杆菌相关性研究进展
皮肤结核疹与分枝杆菌相互关系一直存有争议.一般认为结核疹是对结核分枝杆菌或其代谢产物的一种超敏反应,结核分枝杆菌不会直接引起结核疹.近年来,有研究在结核疹皮损中培养出非结核分枝杆菌,且聚合酶链反应可检出结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌.综述目前各类结核疹与分枝杆菌相关性的研究进展,为结核疹病因探索和有效治疗的研究提供参考.
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结节病非遗传病因研究进展
阐述了与结节病发病关系密切的微生物因素,指出一些微生物,如分枝杆菌、痤疮丙酸杆菌、某些病毒、立克次体、粉尘和粒子及一些药物等均可能导致结节病发生或与其发展有密切关系,强调这些非遗传因素在结节病发病及进展中的可能作用,表明结节病病因的复杂性,说明了在某些情况下采用抗感染治疗结节病的理论基础.
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分枝杆菌感染肉芽肿体外模型的建立和验证
目的 构建可用于分枝杆菌感染肉芽肿研究的体外模型.方法 采用人免疫细胞分别与分枝杆菌(海鱼杆菌、结核杆菌、卡介苗及麻风杆菌)共培养的方法构建分枝杆菌感染肉芽肿体外模型,显微镜下动态观察肉芽肿的体外形成过程,并用流式细胞仪检测不同时期细胞表面抗原分子表达,实时定量PCR法检测细胞因子的mRNA表达及ELISA法检测重要细胞因子的分泌等.结果 共培养7～9d后观察到与肉芽肿结构相似的细胞聚集团块,部分细胞形成多核巨细胞；CD14、CD68、CD80等巨噬细胞表面抗原在不同的分枝杆菌组均有阳性表达；肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白介素1β、白介素10亦有不同程度的mRNA表达及分泌.结论 初步构建了人分枝杆菌肉芽肿体外模型,为研究分枝杆菌感染过程中肉芽肿形成和免疫反应诱导提供条件.
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皮肤分枝杆菌感染微孔板反向杂交检测法的研究
目的 探讨微孔板反向分子杂交技术与PCR-ELISA相结合的"拟芯片"法检测和鉴定几种常见的皮肤分枝杆菌感染的方法.方法 首先对5种分枝杆菌标准菌株(结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和偶遇分枝杆菌)16S rRNA DNA进行PCR扩增获得其PCR产物;其次对"拟芯片"法反应条件进行优化;并对其敏感性、特异性进行检测;再用建立的方法对9例临床分离株进行检测和鉴定.结果 "拟芯片"法反应条件优化结果为:探针包被浓度为100 nmol/mL,探针包被时间为15 min,杂交的温度为55℃,杂交时间为45 min,辣根过氧化物酶标记的亲和素的稀释度为1∶800;"拟芯片"法敏感性为1×101～1×102 个菌细胞/mL;特异性较好,各菌探针与其他分枝杆菌间无交叉.结论 "拟芯片"法是快速、敏感及特异的皮肤分枝杆菌感染诊断方法之一.
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PCR-RFLP分析鉴定皮肤组织中的分枝杆菌
目的 探讨用PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析的方法快速检测皮肤感染性肉芽肿组织中分枝杆菌.方法 皮肤感染性肉芽肿患者组织标本9份,提取组织DNA,进行PCR扩增,PCR产物分别用BstE Ⅱ和Hae Ⅲ 2种限制性内切酶进行酶切,3%Nusieve 3∶1琼脂糖凝胶电泳,进行限制性片段长度多态性分析,并与培养结果进行比较.结果 从5份临床诊断为游泳池肉芽肿的组织标本中检测出海分枝杆菌,从另4份诊断为皮肤感染性肉芽肿的标本中检测出2份结核分枝杆菌和2份脓肿分枝杆菌,此9份结果与培养鉴定结果完全一致.结论 用PCR-RFLP方法可以快速鉴定皮肤感染性肉芽肿组织中的分枝杆菌.
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脓肿分枝杆菌致全身播散性皮肤感染一例
目的 报道1例罕见的全身播散性脓肿分枝杆菌皮肤感染.方法 对患者作全面临床检查.应用流式细胞仪检测患者细胞免疫水平,同时进行组织病理检查、组织培养.用PCR-RFIJP、基因测序方法对分离自患者皮损的分枝杆菌做鉴定.结果 患者女,22岁,1年多前,无明显诱因面颈部出现对称性红斑,并在此基础上渐出现丘疹、结节和斑块,逐渐扩展至躯干四肢;患者CD4+T细胞低于正常,HIV抗体检测阴性.对皮损进行两次多管体外培养,3～5天后,L?wenstein-Jensen培养基上(37℃和32℃)出现阳性菌落.PCR-RFLP比较分析发现,临床分离株的酶切(BstEⅡ和HaeⅢ)图谱与脓肿分枝杆菌的酶切图谱相符合;对临床分离株的hsp65、16S rRNA基因进行了序列分析,发现该二序列与脓肿分枝杆菌同源性接近,分别是99.75%和100%.予以患者口服利福平、异烟肼、左氧氟沙星、克拉霉素,胸腺肽肌内注射,2个月后皮损明显好转.复查该患者的免疫状况,CD4+T细胞已在正常范围;6个月后颈部、躯干及四肢皮损基本痊愈.结论 结合表型特征、DNA酶切图谱和序列分析,临床分离株符合脓肿分枝杆菌;抗生素联合化疗辅以免疫调节剂综合治疗有效.
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皮肤分枝杆菌DNA提取方法比较分析
目的 比较分枝杆菌DNA提取的常用方法.方法 分别采用传统的冻融法和两种试剂盒(A、B)对不同浓度结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌和耻垢分枝杆菌纯菌悬液及模拟标本进行总DNA提取.通过检测DNA纯度和PCR产物比较3种方法的提取效果,并应用临床皮肤组织标本进一步验证.结果 3种方法提取的分枝杆菌DNA均能用于PCR检测.试剂盒A获得的DNA纯度高,冻融法其次,试剂盒B杂质多;灵敏性检测显示3种方法可检测出的纯菌悬液低浓度皆为102菌细胞/ml;对于模拟标本,在103菌细胞/ml时检出率为100％,在102菌细胞/ml时试剂盒A、B和冻融法检出率分别为60％(12/20)、55％(11/20)、55％(11/20);临床标本检测结果提示,试剂盒B可用于石蜡标本DNA的提取,对分枝杆菌感染组织提取率同其它两种方法基本一致.结论 试剂盒A通过多次过柱洗涤可快速获得分枝杆菌的优质基因组DNA,为实验研究及临床检测的首选;试剂盒B单次试剂处理除适用于石蜡标本提取DNA外,可用于新鲜组织标本的协同检测.
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分枝杆菌生长指示管的临床应用价值
目的 研究分枝杆菌生长指示管在其临床快速培养中的应用价值.方法 收集疑似或确诊结核病患者的临床标本96份,用N-乙酰半胱氨酸-氢氧化钠(NALC-NaOH)对标本消化去污处理后,分别接种BBL MGIT生长指示管和改良L-J培养基,同时沉渣涂片作抗酸染色.分析MGIT法的阳性率和平均检测周期,并与传统改良L-J法比较.结果 MGIT总标本培养阳性率28.1%,其巾涂阳标本阳性率77%、涂阴标本阳性率21.1%;标本阳性报警时间范围3～25 d,平均阳性诊断时间12.3 d,平均涂阳标本诊断时间10.4 d,平均涂阴标本诊断时间13.5 d.改良L-J法培养阳性侦测时间范围15～57 d,平均阳性侦测时问30.3 d,涂阳标本平均侦测时间21 d,涂阴标本平均阳件侦测时间36.3 d.结论 BBL MGIT生长指示管可快速检测临床分枝杆菌.
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苏州市耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特点的研究
目的 了解苏州市利福平( rifampin,RFP)耐药结核分枝杆菌rpoB基因突变特点,以期为苏州市RFP耐药结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床快速诊断提供有价值的分子标记靶点.方法 通过裂解MTB抽提基因组DNA,采用PCR扩增和DNA测序方法,分析苏州市结核病患者痰培养阳性并经药敏试验诊断为RFP耐药MTB的rpoB基因RFP耐药决定区(rifampin resistance-determining region,RRDR)和CⅡ区变异谱与变异率.将主要突变形式RRDR-531 (TCG→TTG)与传统药敏实验进行诊断学试验,评价此类型突变作为RFP耐药菌株分子标记靶点的临床应用价值.结果 42株RFP耐药MTB的rpoB基因总突变率为90.5％ (38/42),在所检测到的突变中,以RRDR-531 (TCG→TTG)为主要形式(61.9％).以此类型的位点突变作为RFP耐药菌株诊断的分子标记,与传统药敏试验比较进行配对x2检验,结果表明,与敏感菌株相比,RRDR-531(TCG→TTG)突变在RFP耐药菌株中差异有统计学意义(x2=12.51,P＜0.01).结论 rpoB基因RRDR-531(TCG→TTG)突变是苏州市MTB产生RFP耐药性的主要分子机制,其作为RFP耐药MTB诊断的分子标记靶点具有较好的临床应用价值.
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分枝杆菌鉴定的分子生物学方法研究进展
分枝杆菌属包括结核分枝杆菌群(mycobacterium tubercu-losis complex,MTC)、麻风分枝杆菌及非结核分枝杆菌(nontu-berculosis mycobaeteria,NTM)自1882年Koch发现结核菌以来,已报道了100余种分枝杆菌,其中约30种与不同的人类或动物疾病有关.
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结核病实验室安全管理
结核分枝杆菌属于二类传染性病原微生物,通过呼吸道传播,由于结核病与艾滋病的双重感染以及耐多药结核病的逐步蔓延,结核医院及其实验室人员存在着很大的生物安全风险.因此,对结核病实验室生物安全主要风险因素进行分析,采取针对性的综合管理措施尤为重要.
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肺科患者痰标本分离非结核分枝杆菌47株分析
目的 探讨临床肺疾病患者非结核分枝杆菌(NTM)分布,耐药情况及临床特点.方法 对1 959例患者的痰标本进行分枝杆菌培养.对培养阳性的910份标本中的860份进行药敏实验与菌型初步鉴定,并对分离出的47株NTM与相对应的44例临床资料进行对比分析.结果 NTM检出率5.5%,总耐药率93.6%,单耐药率平均48%,RH两联耐药率37%,含RH多联耐药率28%.临床症状多为咳嗽,咳痰,发热,部分病例咯血及慢性病症,治疗效果不明显.结论 NTM感染及引发的疾病必须引起医学检验与临床的重视,连续痰鉴定为NTM者为NTM肺病高度可疑者,实验室有必要进一步开展NTM的菌种鉴定技术.诊断耐多药肺结核,必须除外NTM肺病.
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非结核分枝杆菌病的流行趋势、诊断及治疗
分枝杆菌属除结核分枝杆菌复合群(包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌) 和麻风分枝杆菌外统称为非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria ,NTM).
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结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药情况分析
目的 比较结核分枝杆菌的3种实验室检测方法,了解出国体检人群结核分枝杆菌的检出率及耐药情况.方法 收集2010年1月至2012年12月福建省立医院出国体检中心1030例疑似结核病患者的3090份标本的涂片镜检,罗氏固体培养,MGIT 960液体培养等3种实验室检测方法的结果,并对药敏情况进行分析.结果 3种方法中,涂片镜检法检测时间短(2h),但阳性率低(2.0％)；罗氏固体培养阳性检测时间长(21.4d),阳性率为7.1％,污染率2.1％;MGIT 960液体培养阳性检测时间为11.2d,阳性率为9.2％,污染率4.3％.106株结核分枝杆菌中,74株对5种抗结核一线药物全部敏感,耐吡嗪酰胺(PZA)的有25株,耐异烟肼(INH)的有13株,耐链霉素(SM)的有9株,耐利福平(RFP)的有4株,没有出现耐乙胺丁醇(EMB)的菌株.结论 结核分枝杆菌的实验室检测方法中,MGIT 960液体培养时间较短,阳性率高.在5种抗结核一线药物中,对PZA的耐药率高,其次是INH.
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92株结核杆菌药敏分析
结核杆菌属分枝杆菌属,广泛分布于自然界中.我们分离出92株结核杆菌,药敏分析结果报告如下.1材料与方法1.1标本来源92株结核杆菌均来自结核病患者的痰标本.
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肺外结核样感染病原体的分离和耐药性分析
肺外结核样感染主要为泌尿系结核、淋巴结结核、结核性胸膜炎、结核性脑膜炎、骨结核等,病原体较为复杂,除结核分枝杆菌外还包含有非结核分枝杆菌,因此对此类疾病进行分枝杆菌菌属的分离鉴定和耐药性测定,对指导临床正确诊治此类疾病具有重要的价值,作者对本院2000年至2005年间采集的肺外结核样感染的标本,进行了分枝杆菌属细菌的分离和初步鉴定,并进行了耐药性测定.
