574例结核病病例细菌学检验结果分析

目的 了解西安市分支杆菌病原菌感染的流行状况,为制定结核病防治措施提供科学依据.方法 采用流行病学抽样调查方法 ,选取陕西省西安市为调查点,于2005年5～8月对其13个区级结防所就诊的所有病人进行调查,每个病人收集三份痰标本.采用痰涂片和痰培养法检测病人痰标本,鉴别培养基培养法鉴定分支杆菌菌种.结果 574位病人,涂片阳性113人,阳性率为19.69%,培养阳性病人150人,阳性率26.13%.后者明显高于前者,两者之间的差异具有显著统计学意义(x2=360.50,P＜0.01),两者联合阳性率为26.83%.从137例病例痰标本中分离到251株分支杆菌菌株,结核分支杆菌、牛分支杆菌、非结核分支杆菌(NTM)和混合感染的比例分别是67.88%、5.84%、11.68%、14.60%.结论 细菌培养法可明显提高阳性率;NTM感染流行状况应予以足够的重视.

自贡市非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定结果分析

目的 对自贡市35株疑似非结核分枝杆菌(NTM)临床分离株进行菌种鉴定.方法 从自贡市各区(县)及市结核病防治获得的临床分枝杆菌分离株,通过罗氏培养基(L-J)、对硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)鉴别培养基初步鉴定为NTM,再经多位点PCR方法确定为NTM后,对rpoB、hsp64及its基因进行测序及分析鉴定.结果 35株疑似NTM临床分离株,通过初步鉴别,多位点PCR,rpoB、hsp64及its基因测序及分析鉴别出32株NTM,分别为脓肿分枝杆菌(M.abscessus)11株、胞内分枝杆菌(M.intracellulare)7株、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)5株、鸟分枝杆菌(M.avium)3株、脓毒分枝杆菌(M.septicum1株、马赛分枝杆菌(M.masseillense)1株、戈登分枝杆菌(M.gordonae)2株、副瘰疬分枝杆菌(M.parascrofulaceum)1株和Mycobacterium peregrinum 1株.结论 抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为NTM的临床分离株中包含不同种类的NTM,自贡市NTM肺病的病原种类较多,以快生长脓肿分枝杆菌为主,其次为慢生长不产色菌的胞内分枝杆菌和缓慢生长光产色菌的堪萨斯分枝杆菌.实验室应开展进一步菌种鉴定,以指导临床正确诊断和合理治疗.

多位点PCR技术用于四川267株分枝杆菌临床分离株的鉴定

目的 初步了解四川省肺结核患者分枝杆菌菌种类型.方法 收集267株分枝杆菌临床菌株,经PNB/TCH鉴别培养基进行培养鉴定后,采用聚合酶链反应(PCR)对16S rRNA、Rv0577、IS1561、Rv1510、Rv1970、Rv3877/8和Rv3120基因位点进行扩增,鉴定至种,再经PRA-rpoB、hsp65基因测序进行验证.结果 267株分枝杆菌临床分离株多位点PCR结果显示结核分枝杆菌262株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,非结核分枝杆菌2株.PNB/TCH鉴别培养基培养鉴定结果为结核分枝杆菌复合群266株,非结核分枝杆菌1株.2株非结核分枝杆菌分别为鸟分枝杆菌(M.avium)和脓毒分枝杆菌(M.septicum).多位点PCR结果与rpoB-PRA、hsp65基因测序结果一致.结论 多位点PCR技术鉴定分枝杆菌菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值,且对于临床诊断和治疗都具有重要意义.

宁波地区非结核分枝杆菌病原谱的分析

目的 了解宁波市非结核分枝杆菌病源谱,掌握宁波市优势非结核分枝杆菌菌群.方法 采用胶体金法对713株分枝杆菌临床分离株进行非结核分枝杆菌初步鉴定,然后对其采用hsp65基因测序法作进一步菌种鉴定.结果 713株分枝杆菌经胶体金法初步鉴定有100株为非结核分枝杆菌.进一步菌种鉴定,有5株为结核分枝杆菌复合群,2株鼻疽诺卡菌,其余93株为非结核分枝杆菌,其中胞内分枝杆菌49株(52.7％),堪萨斯分枝杆菌15株(16.1％),戈登分枝杆菌8株(8.6％),鸟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌各4株,中间分枝杆菌2株,偶然分枝杆菌、土分枝杆菌、外来分枝杆菌、耻垢分枝杆菌株,M.seoulense、M.thermoresistibile和M.monacense各1株.结论 宁波地区优势非结核分枝杆菌群以胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌为主.

复方PCR用于分支杆菌菌种鉴定的初步研究

目的寻找新的、快捷简便的分支杆菌菌种鉴定技术,进一步提高临床结核病诊断的水平.方法将3套分支杆菌基因组DNA的不同标记引物同时放入一个体系中,并在同一退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对已知标准株和部分临床株进行菌种鉴定.结果复方PCR方法可将结核复合群中的结核分支杆菌、牛结核分支杆菌与非结核分支杆菌一次性地区分开,特异性达到100%,灵敏度为10ng/反应.结论复方PCR技术是一种有效而又简捷的分支杆菌诊断方法,可用于临床上分结核与非结核分支杆菌或分支杆菌与非分支杆菌的初步区分.

应用DNA微阵列技术快速鉴定分枝杆菌菌种

目的 利用DNA微阵列的高通量、高效性,建立一种快速、简便的分枝杆菌分子菌种鉴定方法,为临床医师正确诊断提供依据.方法 以DNA直接测序法为对照,通过PCR-SSCP和DNA微阵列技术分析28种分枝杆菌标准菌株、9种非分枝杆菌和465株分枝杆菌临床分离株的菌种.结果 应用DNA微阵列技术分析28种分枝杆菌标准菌株和9种非分枝杆菌菌株,特异性100%.465株分枝杆菌临床分离株中,经16S rRNA PCR-SSCP初步菌种鉴定,256株为结核分枝杆菌复合群,应用DNA微阵列分析,显示与分枝杆菌属探针M和结核分枝杆菌复合群探针a杂交阳性,两种鉴定方法结果一致;209株PCR-SSCP初步鉴定为非结核分枝杆菌的分离株,经芯片分析,68株为龟分枝杆菌龟亚种和脓肿亚种,46株为胞内分枝杆菌,34株为堪萨斯、瘰疬、胃和猿猴分枝杆菌复合群,31株为偶然分枝杆菌,16株为戈登分枝杆菌,3株为鸟分枝杆菌,2株为海和溃疡分枝杆菌复合群,1株为土分枝杆菌,1株为迪氏分枝杆菌,1株为草分枝杆菌;另6株只与探针M杂交,经测序显示5株为胞内分枝杆菌,但其基因序列与标准菌株不完全相同,1株为新金色分枝杆菌,芯片上无鉴定该菌种的探针.结论 用DNA微阵列可简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,提高分枝杆菌病的正确诊断率,指导临床合理治疗.

关于延长非结核分支杆菌菌种鉴定生化反应试剂保存时间的探讨

近年来,非结核分支杆菌引起感染的报道甚多,然而非结核分支杆菌肺病在临床症状及X线表现与结核分支杆菌极其相似,难以区别,只有通过实验室诊断进行鉴别.另外,由于非结核分支杆菌菌种的不同,临床上治疗方案也各有不同[1],因此需要及早对其菌种作出鉴定,但配制一批鉴定非结核分支杆菌菌种鉴定的生化反应试剂比较麻烦,而且试剂的保存时间较短,每次都要浪费很多剩余试剂.由于以上原因,一般我们都将初步确定为非结核分支杆菌的菌种保存起来,积累到一定数量,再进行鉴定,使非结核分支杆菌菌种鉴定结果的报告时间较长,延误病人治疗.

PCR法鉴定结核分枝杆菌复合群亚种的研究

结核分枝杆菌复合群中各菌型致病性和药物敏感性不尽相同,在临床治疗前需要进行菌种鉴定,目前临床使用的生化方法耗时长,给治疗带来不便,本研究采用PCR法可快速鉴定结核分枝杆菌复合群亚种,具有快速、准确的优点,现将研究结果报道如下.

分支杆菌分子菌种鉴定方法的研究进展

由于全球范围内肺结核及非结核分支杆菌病的发病呈逐年上升趋势,准确而快速的菌种鉴定技术对结核病的诊断和鉴别诊断及有效化疗都有极其重要的意义.目前国内外采用传统的分支杆菌菌种鉴定方法需依据细菌生长速度、色素产生及多种生化试验等结果综合分析才能获得结果;而BACTEC TB460、TB960培养基系统虽快速(2～6d),但只能初步鉴定结核分支杆菌复合群和非结核分支杆菌,不能将细菌鉴定至种.近年来建立的色谱方法虽能达到部分菌种鉴定的目的,但需特殊仪器,临床尚未普遍开展.目前国内外研究者都致力于使分支杆菌菌种鉴定从细胞表型水平进入分子基因水平.现对分支杆菌分子菌种鉴定方法的研究进展综述如下.

七、非结核分支杆菌菌种鉴定及对抗结核药物的耐药情况

参与WHO-GFN EQAS2009实验室间比对的结果分析

目的 为了正确认识和评估本实验室试验水平,更好地促进实验室试验能力建设,本实验室申请并参加了WHO的全球食源性感染网络(GFN)外部质量保证系统(EQAS)2009评估.方法 分别用微量肉汤稀释法、玻片凝集法和16S rDNA鉴定法对EQAS邮寄的17株菌株盲样进行了药物敏感性测定、血清型分型鉴定和细菌种属鉴定.结果 部分药敏结果有偏差(偏高或偏低);ESBLs(Extended Spetrum β-Lactamase)检测及血清型鉴定结果完全正确;仅未知肠道细菌鉴定结果错误.结论 以上事实表明,本实验室在某些细茵的复苏、鉴定,磺胺药物的药敏结果判读方面仍有不足,需加强和完善检测技术.

基于内转录间隔区和β-微管蛋白部分基因及相关序列扩增多态性分子标记技术推断红曲霉系统发育关系

目的 基于内转录间隔区(ITS)、β-微管蛋白(β-tubulin)部分基因和相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记技术结合形态学鉴定方法,推断不同种红曲霉的系统发育关系,寻找快速、准确鉴定红曲霉的方法.方法 以红曲霉基因组为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增红曲霉ITS、β-tubulin部分基因,利用Mega 7.0软件中大似然树法构建进化树,扩增SRAP分子标记技术的特征结合序列,利用R软件phangorn包中的FigTree软件进行建树,使用除权配对(UPGMA)法进行聚类分析,通过分析不同种红曲霉系统发育关系,找寻快速、准确的鉴定方法.结果 利用ITS和β-tubulin部分基因可将31株供试菌株分为两大类,而SRAP分子标记技术可将供试菌株分为四大类,结合袁型分析和3种分子鉴定方法,参照15株红曲霉参考菌株将16株未鉴定到种的红曲霉分别鉴定为安卡红曲霉、橙色红曲霉和紫色红曲霉.结论 SRAP分子标记技术具有更多的分类依据,结合表型分析能够帮助更快、更精确的将红曲霉鉴定到种.

梅里埃血培养仪联合Vitek2 compact在血标本中菌株分离鉴定及耐药检测分析

目的:分析Vitek2 compact和梅里埃血培养仪在血标本菌株分离鉴定和耐药分析的应用.方法:选择临床送检血液样本1 350份,进行菌种鉴定和耐药性分析.结果:在1 350份血液样本中分离出病原菌152株,革兰阴性菌78株(51.31%),革兰阳性菌66株(43.42%),真菌8株(5.27%);革兰阳性菌对苯唑西林与苄青霉素的耐药率分别为62.12%和77.27%,革兰阴性菌对头孢素类和青霉素类的耐药率均较高.结论:Vitek2 compact和梅里埃血培养仪能准确分离出血标本中菌株,在血流感染疾病的快速诊疗领域中具有较好的应用前景.

分析马尔尼菲青霉的研究现状

马尔尼菲青霉菌是一种常见也是较为致命的致病菌,这种致病菌能够在任何人群身上发生,但是目前临床上感染该病菌的人群多是一些免疫力不同于常入的人群,如有些人免疫功能抑制,那么这种就会比较容易感染上该种病菌.目前该病菌在艾滋病人群中属于重要的致病源.经过统计发现,该病菌在艾滋病感染者的发病率有高达25％,过去由于技术缺陷无法正确诊断病情就治疗,导致出现死亡率较高的现象,但是目前已经证实该病能够治愈,所以为了更加深入的认识该种病菌,提高治愈率,降低死亡率对该病菌进行研究具有非常重大的实际意义.

自贡市44株临床非结核分枝杆菌的鉴定

目的 对自贡市2012 2016年临床分离44株疑似非结核分枝杆菌进行菌种鉴定.方法 使用PCR-荧光探针法对自贡市临床44份疑似非结核患者的菌株进行初步筛查,并对44份菌株的hsp65及rpoB基因进行扩增并测序,通过序列比对获得菌株型别.结果 44株菌株分枝杆菌经PCR-荧光探针法检测结果显示均为非结核分枝杆菌.对44株分枝杆菌进行hsp65及rpoB基因测序比对,进一步菌种鉴定结果显示,44株分枝杆菌分别为11种非结核分枝杆菌.结论 自贡市非结核分枝杆菌种类较多,44株菌即分为11个种.PCR荧光探针法及基因测序法可对临床非结核分枝杆菌进行快速、准确的鉴定.

聚合酶链反应鉴定结核分枝杆菌常用靶基因序列的研究进展

分枝杆菌种类繁多,至今已发现有150余种,包括结核分枝杆菌复合群、麻风分枝杆菌以及非结核分枝杆菌,而结核分枝杆菌复合群是引起人类结核病的主要病原菌.分子生物学技术的发展为实现结核分枝杆菌的快速鉴定提供了方向,建立了各种以核酸序列为靶基因,如IS6110、16S rRNA、16S-23S rRNA ITS、hsp65、rpoB和gyrB等的快速鉴定方法.本文对聚合酶链反应(PCR)检测方法中鉴定结核分枝杆菌常用靶基因序列鉴定方法的敏感度和特异度研究进展进行综述.

基于hsp65基因的PCR-RFLP用于快速鉴定分枝杆菌菌种的初步研究

目的 基于hsp65基因的PCR-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)用于快速鉴定分枝杆菌菌种的方法的建立和评价.方法 选择分枝杆菌hsp65基因作为目的 基因,对分枝杆菌标准株进行PCR扩增,扩增产物经HaeⅢ和Bstp Ⅰ两种限制性内切酶酶切,酶切产物采用4%MetaPhor琼脂糖凝胶电泳,根据电泳条带位置,计算条带分子量,确定不同菌种的特异指纹图谱.结果 共对40种(株)分枝杆菌进行分析,6株结核分枝杆菌复合体菌株呈现两种指纹图谱,34株非结核分枝杆菌标准株均具有惟一的指纹图谱.结论 基于hsp65基因的PCR-RFLP可用于分枝杆菌菌种的快速鉴定,且方法简便,易于标准化.

广州市旧城区1994-2003年非结核分枝杆菌流行状况分析

目的探讨近10年广州市旧城区非结核分枝杆菌(MOTT)流行状况及流行趋势.方法分析1994-2003年广州市结核病肺部肿瘤防治所结核专科门诊患者的分枝杆菌培养、分群鉴定、部分MOTT菌株耐药性测定及菌种鉴定情况.结果检出12 634株分枝杆菌,其中MOTT 794株,其分离率为6.28%,年分离率3.51%～10.06%,10年上升幅度为73.15%;对613株MOTT进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)4种主要抗结核药物耐药性测定,至少耐R和H的菌株512株,耐多药率为83.5%,各年耐多药率71.4%～93.9%;菌种分布主要为致病性鸟-胞内、龟-脓肿分枝杆菌和瘰疬、偶发分枝杆菌等条件致病性MOTT;45岁以上年龄组为MOTT易感人群,55～65岁为感染高峰,男女性别构成平均为3.36:1.结论 10年来,广州市旧城区人口MOTT流行情况及长期变异趋势和全国水平相当,但分离率呈大幅上升趋势,主要为致病性菌种,并具有极高的耐药率,故对MOTT致病的流行病学研究应纳入国家结核病控制规划.

铁皮石斛促生长内生真菌的筛选与鉴定

石斛生境中存在多种能够促进石斛生长的内生真菌,利用内生真菌与铁皮石斛组培苗共生培养,筛选对铁皮石斛组培苗有促生长活性的内生真菌,研究内生真菌对石斛根的侵染情况,采用形态鉴定和分子鉴定的方法对促生长活性内生真菌进行鉴定.结果表明,8株内生真菌对铁皮石斛苗有促生长作用,均能侵染铁皮石斛根,在铁皮石斛根的根被、外皮层、皮层中以菌丝或菌丝团的形式存在,不侵染内皮层和中柱,区别于有害真菌.8株活性内生真菌中,2株产孢真菌经形态鉴定,属于Pestalotiopsis,Eurotium属,6株不产孢真菌经分子鉴定,分别属于Pyrenochaeta,Coprinellus,Pholiota,Alternaria,Helotiales等5个属.促生长活性内生真菌与石斛组培苗共生培养,可促进石斛组培苗生长,对于缩短石斛生长周期,增加石斛中药材资源具有指导意义.

半夏曲炮制过程中优势微生物的鉴定

研究半夏曲不同发酵时间点的微生物种类、数量变化以及优势菌种的分离鉴定,为探讨半夏曲炮制机制奠定基础.用选择性培养基对半夏曲发酵过程中5个时间点(0,18,36,54,72 h)样品中的细菌、霉菌、酵母菌分别进行培养、菌落计数、分离纯化优势菌种;采用16S rDNA,26S rDNA序列分别对优势细菌、优势真菌进行鉴定.结果表明,半夏曲发酵过程中细菌数量少、变化平缓,而酵母菌和霉菌数量发酵至54 h时迅速增加,至发酵结束时达1×107CFU·mL-1以上;通过NCBI同源性比对及构建系统发育树,鉴定出半夏曲炮制过程中的优势细菌为Streptomyces sp.,Bacillus pumilus,B.subtilis,B.aryabhattai,Bacillus sp.;优势酵母菌为Meyerozyma guilliermondii;优势霉菌为Paecilomycesvariotii,Byssochlamys spectabilis,Aspergillus niger.提示半夏曲的发酵过程涉及多种微生物共同参与,其中以酵母菌和霉菌为主.M.guilliermondii,P.variotii,P.variotii,A.niger和Bacillus sp.等优势菌种可能在半夏曲炮制中起重要作用.